葉蓉 唐春鳳 劉道光 朱明慧 姚薇 田順亮 劉承偉 于蘭

(1桂林醫(yī)學院基礎(chǔ)醫(yī)學院人體解剖學教研室，廣西 桂林 541004；2柳州市中醫(yī)醫(yī)院；3桂林醫(yī)學院臨床醫(yī)學院；4菏澤醫(yī)學專科學校人體解剖學教研室；5桂林醫(yī)學院藥學院；6桂林醫(yī)學院附屬醫(yī)院)

隨著我國人口老齡化的進一步加劇，老化和衰老所帶來的運動能力降低、血糖升高、能量的向心性分布、基礎(chǔ)代謝降低、抵抗力低下及生命力減弱等問題將進一步加速機體的老化，給我國社會的發(fā)展帶來巨大壓力〔1〕。中醫(yī)認為，人到老年，腎氣衰退，則不足以滋養(yǎng)五臟六腑，而臟腑功能衰退，氣血陰陽虧虛，最終導致老年期疾病發(fā)生〔2〕。金匱腎氣丸出自東漢張仲景的《金匱要略》，功效是補益腎中精氣，是溫補腎陽的經(jīng)典名方〔3〕。臨床研究表明，金匱腎氣丸具有增強免疫、改善代謝水平、增強神經(jīng)體液調(diào)節(jié)等作用〔4，5〕。補中益氣丸出自金代醫(yī)學家李東垣的《脾胃論》，主要功效為補中益氣，升陽舉陷，能有效調(diào)理脾胃〔6〕?，F(xiàn)代醫(yī)學證實，補中益氣丸具有調(diào)節(jié)胃腸運動、抗胃潰瘍及胃黏膜損傷、影響消化分泌、調(diào)節(jié)免疫功能等作用〔7～9〕。二者單獨在臨床的運用較多，但二者聯(lián)合作用對衰老小鼠運動能力及代謝水平的研究未見報道。課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，隨著年齡的增加，小鼠消化道和內(nèi)臟高級中樞邊緣葉的突觸核蛋白表達量增加，內(nèi)臟功能紊亂，并且運動能力出現(xiàn)增齡性下降〔10〕。本課題通過建立自然衰老小鼠模型，并予以金匱腎氣丸合補中益氣丸溫補腎陽、調(diào)理脾胃，通過觀察老年小鼠活動能力、體重、血糖、不同部位體溫變化和生存時間的變化，評價金貴腎氣丸與補中益氣丸聯(lián)用的抗衰老效應(yīng)，進一步闡明衰老狀態(tài)方證相關(guān)的生物學基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1藥物 金匱腎氣丸〔地黃、山藥、酒萸肉、茯苓、牡丹皮、澤瀉、桂枝、附子(炙)、牛膝(去頭)、鹽車前子〕，北京同仁堂科技發(fā)展股份有限公司制藥廠；補中益氣丸〔炙黃芪、黨參、炙甘草、白術(shù)(炒)、當歸、升麻、柴胡、陳皮、生姜、大棗〕，仲景宛西制藥股份有限公司。

1.2動物 健康SPF級C57BL/6J小鼠，購自湖南斯萊克景達實驗動物有限公司，實驗動物許可證號：SCXK(湘)2016-0002。飼養(yǎng)于溫度22～24℃，12/12 h光照/黑暗周期，相對濕度(55%±20%)環(huán)境，自由攝食與飲水，自然飼養(yǎng)至24月齡。

選取10只小鼠，按照體重(20～30 g)隨機分為對照組(n=5)、實驗組(n=5)，每組內(nèi)雄性為2只、雌性為3只。分組后實驗組每天上午定時灌胃金匱腎氣丸10 mg和補中益氣丸5 mg的溶液0.5 ml，給藥4 w；對照組同等時間灌胃0.5 ml的純凈水。

1.3方法 存活天數(shù)：給藥當天為第1天到小鼠死亡當天，為小鼠存活天數(shù)；體重變化：用電子水平(可精確到0.01 g)每隔4 d測量小鼠體重1次；血糖變化：用優(yōu)利特血糖試紙每周于固定時間檢測小鼠的尾靜脈血糖1次；體溫變化：用紅外線溫度測試儀于上午固定時間測試小鼠頭、頸、上肢、下肢、腹部、背部、尾根部體溫。頭部測試部位為兩瞳孔連線的中點；頸部為頸前正中線中點；上肢為左、右腋窩；下肢為左、右腹股溝中點；尾部測試部位為尾根部；胸部為劍胸結(jié)合處；腹部在臍部；背部為第一腰椎棘突處。

1.4行為學測試 平衡桿試驗反映小鼠平衡力及行走能力。爬桿試驗反映小鼠在克服自身重力情況下展現(xiàn)出的抓力及爬行能力。懸掛試驗反映小鼠四肢肌力及抓握能力。曠場試驗反映小鼠在一個空曠環(huán)境的運動能力及狀態(tài)。每7 d通過平衡桿試驗、爬桿試驗、懸掛試驗、曠場試驗檢測小鼠行為變化。

1.5統(tǒng)計學方法 通過GraphPad Prism8.0軟件分析數(shù)據(jù)并繪圖，兩組間比較采用獨立樣本t檢驗，多個樣本均數(shù)間的比較采用單因素方差分析。

2 結(jié) 果

2.1觀察指標結(jié)果

2.1.1生存曲線 隨著年齡的增加，老年小鼠逐漸衰老死亡，實驗組的存活時間明顯高于對照組〔(18.00±1.414)d vs(9.60±7.301)d；P<0.05〕。見圖1。

圖1 對照組與實驗組小鼠的生存曲線

2.1.2體重變化 給藥前，兩組體重差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；給藥后，實驗組體重明顯高于對照組(P<0.05)。見表1。

2.1.3血糖變化 給藥前，兩組血糖差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；給藥后，兩組血糖均明顯升高(P<0.001，P<0.01)，但實驗組血糖明顯低于對照組(P<0.05)。見表1。

表1 對照組與實驗組給藥前后體重和血糖的比較

2.1.4不同部位體溫變化 隨著年齡的增加，老年小鼠頭、頸、胸、腹部近心端體溫較高，四肢和尾部體溫較低，尤以左下肢和尾部體溫最低，體溫呈向心性分布。實驗組給藥后四肢體溫升高，右上肢、左下肢及右下肢體溫明顯高于對照組(P<0.05，P<0.001)。見表2。

表2 兩組給藥前后的各部位體溫比較

2.2行為學結(jié)果

2.2.1平衡桿試驗 與給藥前比較，對照組平衡桿所用時間明顯增加(P<0.05)，實驗組給藥后平衡桿所用時間明顯減少(P<0.05)，與對照組相比，實驗組平衡桿所用時間顯著減少(P<0.01)。見表3。

2.2.2爬桿試驗 對照組一直以下滑方式爬桿，與給藥前比較所用時間無明顯改變(P>0.05)，實驗組給藥后無下滑，爬桿所用時間顯著增加(P<0.01)，與對照組相比，實驗組爬桿所用時間顯著增加(P<0.01)。見表3。

2.2.3懸掛試驗 與給藥前比較，對照組懸掛所用時間減少(P>0.05)，實驗組給藥后懸掛所用時間顯著增加(P<0.01)，與對照組相比，實驗組懸掛所用時間明顯增加(P<0.05)。見表3。

2.2.4曠場試驗 與給藥前比較對照組曠場運動速度顯著下降(P<0.01)，實驗組給藥后曠場運動速度有升高的趨勢(P>0.05)，與對照組相比，實驗組曠場運動速度顯著升高(P<0.01)。見表3。

表3 對照組與實驗組平衡桿試驗、爬桿試驗、懸掛試驗所用時間及曠場試驗運動速度的比較

3 討 論

隨著年齡的增加，機體逐漸老化衰老，衰老所帶來的一系列生理代謝功能紊亂包括血糖異常、身體溫度的向心性分布、運動功能的下降，進一步加重全身功能的衰退〔11〕。中醫(yī)理論著作《黃帝內(nèi)經(jīng)》〔12〕曰：“腎為先天之本，主藏精，腎精是生命的原始物質(zhì)和臟腑運作的原始動力；脾胃為后天之本，氣血生化之源，是保養(yǎng)生之氣、延年益壽之關(guān)鍵”。明代虞摶《醫(yī)學正傳》〔13〕又指出：“腎氣盛則壽延，腎氣衰則壽夭”。脾胃虛，則氣血生化不足，腎中精氣不得以補充，加速機體衰老〔14〕。而老年人存在臟腑功能衰退現(xiàn)象〔15〕，故影響氣血生化，從而使身體健康受到威脅，壽命減短。因此，減緩老年人臟腑功能衰退，促進氣血生化，可有助于提高老年人生活質(zhì)量，延長壽命〔16〕。金匱腎氣丸有溫補腎陽功效，可提高老年人腎中精氣〔17〕；而補中益氣丸有補中益氣、健脾胃之功效。因此，補中益氣丸與金匱腎氣丸聯(lián)用，可進一步提升老年人腎中精氣，調(diào)節(jié)氣血。

本課題通過給予老年小鼠金匱腎氣丸和補中益氣丸干預，結(jié)果顯示，老年小鼠體重增加、四肢體溫升高、血糖相對穩(wěn)定，可維持正常，推測金匱腎氣丸和補中益氣丸聯(lián)用可能通過調(diào)節(jié)老年小鼠的脂肪代謝、基礎(chǔ)代謝、糖代謝，從而提高了老年小鼠整體代謝水平。

老年小鼠的行為學結(jié)果顯示，給予金匱腎氣丸和補中益氣丸干預后的老年小鼠行走、爬行、抓握能力增強，運動速度增快，推測金匱腎氣丸和補中益氣丸聯(lián)用可能通過調(diào)節(jié)老年小鼠的免疫功能，從而增強了老年小鼠的運動能力。

另一方面，觀察到實驗組老年小鼠存活時間明顯高于對照組，表明金匱腎氣丸和補中益氣丸聯(lián)用可能通過提高老年內(nèi)臟功能，改善小鼠代謝水平，增強其運動能力，從而有效延長壽命。然而金匱腎氣丸和補中益氣丸聯(lián)用如何提高老年小鼠代謝水平及增強運動能力的機制尚不清楚，本課題后期將針對這方面進行相關(guān)實驗。