王星，吳茜，李紅蔚，華靜娜，李莉△，秦中華

新型冠狀病毒（SARS-CoV-2）逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）檢測已經(jīng)成為診斷新型冠狀病毒肺炎（COVID-19）的標(biāo)準(zhǔn)方法，但RT-PCR檢測存在一定的局限性［1］。與RT-PCR相比，血清學(xué)檢測具有檢測時(shí)間快、工作量小的優(yōu)點(diǎn)。《新型冠狀病毒肺炎診療方案（試行第七版）》已明確指出SARS-CoV-2特異性抗體可以作為COVID-19確診的依據(jù)，同時(shí)肯定了抗體檢測是核酸檢測的有益補(bǔ)充?？贵w的臨床價(jià)值很大程度上取決于對(duì)感染過程中宿主抗體反應(yīng)的了解。但是，對(duì)于SARSCoV-2感染人體后產(chǎn)生血清學(xué)特異性抗體的規(guī)律目前尚不明確，其作為確診標(biāo)準(zhǔn)的意義還有待于更多的臨床數(shù)據(jù)予以證實(shí)。本研究分析了30例COVID-19患者，以期探索特異性抗體產(chǎn)生規(guī)律，為臨床實(shí)踐提供依據(jù)。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象選取2020年1月21日—2020年3月15日天津市海河醫(yī)院收治的COVID-19患者30例，其中重癥組20例（均為重型患者），非重癥組10例（均為普通型患者）；均符合《新型冠狀病毒肺炎診療方案（試行第七版）》的診斷標(biāo)準(zhǔn)、臨床分型及出院標(biāo)準(zhǔn)，并且每例患者同時(shí)動(dòng)態(tài)檢測SARSCoV-2特異性IgM和IgG 5次及以上。

1.2 方法所有入選病例均在入院當(dāng)天進(jìn)行SARS-CoV-2特異性IgM和IgG檢測，且病程中多次采樣，進(jìn)行縱向分析。根據(jù)病程抗體檢測時(shí)間不同，共分為發(fā)病0～6 d、7～12 d、13～18 d、19～27 d、28～33 d、34～42 d和43～48 d共7個(gè)時(shí)段。由于每例患者發(fā)病時(shí)間不同，病程長短不同，因此并非每例患者每個(gè)時(shí)段均進(jìn)行了采樣檢測。SARS-CoV-2特異性抗體檢測為S蛋白特異性結(jié)合抗體，采用磁微?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析方法，試劑購自Bioscience公司。標(biāo)本的采集、檢測、結(jié)果判定等均嚴(yán)格按照說明書由檢驗(yàn)專業(yè)人員完成。抗體的結(jié)果以S/Co表示，其中S代表樣本的發(fā)光值，Co代表cut-off值。以患者出院時(shí)間為節(jié)點(diǎn)，分為急性期與恢復(fù)期。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 26.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料采用例（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)或Fisher確切概率法。對(duì)于連續(xù)變量的描述，非正態(tài)分布數(shù)據(jù)用中位數(shù)及四分位數(shù)間距［M（P25，P75）］表示，組間比較采用Mann-WhitneyU檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 2組一般資料比較重癥組年齡高于非重癥組（P＜0.01）。2組間性別、發(fā)病至入院時(shí)間、核酸陽性持續(xù)時(shí)間及合并癥比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表1。

Tab.1 Comparison of general data between two groups表1 2組患者一般資料比較

2.2 病程與特異性IgM和IgG陽性率發(fā)病0～6 d IgM和IgG陽性率分別為42.86%和28.57%，隨著病程的進(jìn)展，2種抗體的陽性率逐步增高。IgM在13～18 d陽性率達(dá)到峰值100%，持續(xù)約3周，IgG在19～27 d陽性率達(dá)到峰值100%，持續(xù)約2周，兩者從發(fā)病大約5周后陽性率開始下降。IgM較IgG陽性率達(dá)峰時(shí)間早約1周，見圖1。

Fig.1 Changes of IgM and IgG positive rates with the course of disease圖1 IgM和IgG陽性率隨病程變化情況

2.3 重癥組與非重癥組特異性抗體水平比較重癥組與非重癥組在發(fā)病后約28 d內(nèi)IgM、IgG水平逐步升高，28 d后開始下降，重癥患者IgM、IgG水平下降明顯。重癥組患者在發(fā)病后28～33 d IgG水平較非重癥組高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

2.4 急性期與恢復(fù)期患者特異性抗體水平重癥組恢復(fù)期IgG水平較非重癥組高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表3。

Tab.2 Changes of IgM and IgG levels at different time points after onset in two groups表2 重癥組與非重癥組發(fā)病后不同時(shí)間IgM、IgG變化

Tab.3 Changes of IgM and IgG levels in acute pahse and convalescent phase in two groups of patients表3 2組急性期與恢復(fù)期IgM、IgG變化

3 討論

COVID-19的病原體SARS-CoV-2與SARSCoV有較高的同源性（高達(dá)79%）［2］。但是，SARSCoV-2對(duì)于人類而言是全新的病毒，目前對(duì)于它的認(rèn)知仍然有限，其血清學(xué)特異性抗體的變化規(guī)律尚不清楚。本研究入組的患者均為經(jīng)核酸檢測確診的COVID-19患者，分為重癥組與非重癥組。所有入選患者的臨床癥狀、特征和進(jìn)展與既往報(bào)道的COVID-19患者相似［3-4］。

一般認(rèn)為，當(dāng)病毒侵入人體后，人體會(huì)產(chǎn)生相應(yīng)的抗體進(jìn)行防御，其中特異性抗體IgM是最早產(chǎn)生，維持時(shí)間短，負(fù)責(zé)早期防御；IgG抗體主要在感染中后期產(chǎn)生，維持時(shí)間長，使人體獲得長久免疫。有研究顯示，感染SARS-CoV-2后，人體會(huì)在約1周內(nèi)產(chǎn)生IgM、IgG抗體［5-7］。不同研究，抗體陽性率不同。Zhao等［5］報(bào)道發(fā)病1周確診患者IgM和IgG陽性率分別為27%和18%，大約4周IgM陽性率達(dá)100%。Long等［6］的研究顯示，發(fā)病1周確診患者IgM和IgG陽性率分別為40%和55%，17～19 d時(shí)其IgG陽性率達(dá)到100%，IgM的峰值出現(xiàn)在20～22 d，陽性率約為94.1%。本研究顯示，發(fā)病0～6 d IgM和IgG陽性率分別為42.86%和8.57%，隨著病程的進(jìn)展，抗體陽性率逐步增高，IgM在13～18 d陽性率達(dá)到峰值100%，IgG在19～27 d陽性率達(dá)到峰值100%，此后抗體陽性率開始下降。抗體陽性率的影響因素眾多：各檢測機(jī)構(gòu)使用的試劑盒不同，cut-off值不同；檢測儀器不同；操作者水平差異；入選的患者情況（年齡、性別、基礎(chǔ)疾病等）不同；不同患者的病毒載量不同，對(duì)機(jī)體的影響不同等。如果單用抗體篩檢患者容易誤診，錯(cuò)判患者病情分期，因此必須多次反復(fù)聯(lián)合核酸檢測。

Jin等［8］研究顯示COVID-19患者IgM總體呈現(xiàn)先升后降、IgG呈現(xiàn)持續(xù)上升的變化趨勢。與既往文獻(xiàn)報(bào)道SARS-CoV抗體動(dòng)態(tài)變化規(guī)律基本一致［9］。而本研究顯示IgM和IgG水平總體上均為先升后降。COVID-19患者中有部分IgG水平在發(fā)病后3周左右開始下降，下降較為緩慢［10-11］。本研究顯示重癥與非重癥組患者在發(fā)病后約28 d內(nèi)IgM、IgG水平逐步升高，此后開始下降，且重癥患者IgG水平下降明顯，提示動(dòng)態(tài)監(jiān)測IgG水平，有助于監(jiān)測病情變化。

Zhao等［5］發(fā)現(xiàn)重癥患者相比非重癥患者體內(nèi)有高水平的IgG。本研究顯示重癥組患者在發(fā)病后28～33 d IgG水平較非重癥組高，說明重癥患者機(jī)體的長期免疫反應(yīng)可能更加強(qiáng)烈，而且持續(xù)高IgG水平可能提示病情嚴(yán)重。值得注意一點(diǎn)，有研究顯示非重癥患者IgM反應(yīng)較弱，甚至其中大多數(shù)患者在整個(gè)病程中沒有產(chǎn)生明顯的IgM抗體［12］，表明IgM診斷對(duì)非重癥患者可能并不敏感和有效。

COVID-19恢復(fù)期患者中有部分IgG水平在感染后2～3個(gè)月開始下降，其中有40%無癥狀患者在出院8周后檢測不到抗體［13］。結(jié)合筆者觀察到的IgM和IgG水平總體上均為先升后降的趨勢，提示患者獲得的抗體免疫可能有限?；謴?fù)期重癥組IgG水平較非重癥組高，說明重癥組患者恢復(fù)期抗體免疫以IgG為主，也提示高水平的IgG可能與病情嚴(yán)重程度有關(guān)。

本研究尚有不足之處，監(jiān)測時(shí)間相對(duì)較短，樣本量較小且為單中心研究。目前對(duì)于SARS-CoV-2以及COVID-19的了解仍然有限，需要多學(xué)科深入研究。故有必要對(duì)COVID-19患者進(jìn)行多中心、長期隨訪觀察，總結(jié)分析，以指導(dǎo)患者康復(fù)治療以及健康人群的預(yù)防。