陳莎 ，張玉閣，陳佳，秦洪宇，殷中瓊，2，李煬平，鄒元鋒，2*

（1.四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院天然藥物研究中心，四川 成都 611130；2.四川省動物疾病與人類健康重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，四川 成都 611130；3.四川農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院，四川 成都 611130）

參麥方見于《醫(yī)學(xué)啟源》的參麥飲，是一種傳統(tǒng)的中藥復(fù)方制劑，由紅參和麥冬兩味藥材制備而成，具有抗氧化，抗心肌缺血，降低心肌耗氧量，增強(qiáng)心臟壓力等藥理作用[1]。藥理研究發(fā)現(xiàn)，中藥多糖具有增強(qiáng)免疫、調(diào)節(jié)腸道菌群、促進(jìn)生長等多種生物活性[2-3]。本試驗(yàn)按一定比例在肉雞飼料中添加參麥多糖（SMP），探索其對肉雞生長性能、免疫應(yīng)答、血液生化指標(biāo)及42 日齡腸道菌群、黏膜免疫的積極影響。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)藥材 紅參購自成都荷花池中藥材市場，麥冬于2019 年3 月采自四川三臺縣，經(jīng)四川農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院鄒元鋒博士鑒定。參麥多糖（SMP）的提?。杭t參與麥冬剪碎后按照1∶1 質(zhì)量比混合，100 ℃下乙醇回流萃取，去除低分子量和親脂化合物；30倍量蒸餾水100 ℃下提取2次，每次2 h；水提液濃縮后用乙醇沉淀，收集多糖沉淀，冷凍干燥后即得。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計 所有動物試驗(yàn)均按四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動物倫理委員會批準(zhǔn)的程序進(jìn)行。從綿陽某家禽有限公司購買健康的1日齡三黃雞60只，隨機(jī)分為4組，每組15只，分籠飼養(yǎng)。4個組分別按照0、0.25%、0.5%、1.0%的比例添加SMP，基礎(chǔ)日糧配方見表1。飲食符合中國三黃雞喂養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)營養(yǎng)要求。前7 d 采用23 h 光照，溫度保持在27 ℃左右，然后逐漸過渡到自然光和室溫（22 ℃）。試驗(yàn)期42 d。在此期間，肉雞自由采食與飲水。第14 d 接種新城疫疫苗。其余飼養(yǎng)管理按《家禽飼養(yǎng)管理手冊》進(jìn)行。

表1 基礎(chǔ)日糧組成和營養(yǎng)水平

1.3 生長性能測定 在試驗(yàn)開始及每個生長階段結(jié)束時對肉雞稱重，計算體重增加量。飼料消耗量＝飼料供給量－剩余量。通過計算肉雞體重增加量與飼料消耗量的比值來確定飼料轉(zhuǎn)換比（FCR）。

1.4 免疫力測定 試驗(yàn)第42 d，采集每只雞的靜脈血5 mL，4 000 r∕min 離心10 min，分離上清液，－20 ℃保存。采用血凝抑制（HI）試驗(yàn)，測定新城疫（ND）抗體效價。

為確定免疫應(yīng)答水平，采用雞酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）試劑盒和微板閱讀器（美國BIORAD iMark）測定血清免疫球蛋白G（Ig G）、免疫球蛋白M（Ig M）、白介素-2（IL-2）和腫瘤壞死因子α（TNF-α）的水平。試驗(yàn)步驟按試劑盒說明書進(jìn)行。

將雞安樂死之后，采集雞胸腺、脾臟和法氏囊，去除表面筋膜和脂肪，吸干表面血跡后逐一稱重，計算免疫器官指數(shù)。免疫器官相對重量表示為器官重量與體重之比（mg∕g），計算公式：

1.5 血液生化參數(shù)測定 采用全自動生化分析儀測定血清葡萄糖、尿酸（UA）、甘油三酯（TG）、膽固醇、高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白（LDL）和堿性磷酸酶（ALP）的水平。

1.6 腸道菌群分析 無菌采集盲腸內(nèi)容物0.5 g，置于無菌Eppendorf 管中，用0.9 mL 稀釋劑在振蕩器上振蕩20 min，使盲腸內(nèi)容物均勻化。稱重適量盲腸內(nèi)容物，用稀釋劑稀釋至合適的倍數(shù)，取0.1 mL稀釋樣品接種到瓊脂培養(yǎng)基。采用MRS 瓊脂培養(yǎng)乳桿菌，采用MacCon 瓊脂培養(yǎng)大腸桿菌，采用SS 瓊脂培養(yǎng)沙門氏菌，每個稀釋度重復(fù)3 次。細(xì)菌計數(shù)以lgCFU（菌落形成單位）∕g表示。

1.7 腸道黏膜上分泌型免疫球蛋白A（sIgA）的測定 去除腸內(nèi)容物后，用潔凈液氮在無菌研缽中將回腸研磨成均勻粉末。冷凍條件下稱取組織粉末0.1 g于無酶Eppendorf管中，加入PBS至10 mg∕mL，混勻。3 500 r∕min 冷凍離心20 min，取上清液，采用雞分泌型免疫球蛋白A（sIgA）酶聯(lián)免疫分析試劑盒檢測組織中的sIgA含量。

1.8 統(tǒng)計分析 試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 統(tǒng)計軟件進(jìn)行單向方差分析（ANOVA），采用Duncan 法進(jìn)行組間多重比較。當(dāng)P＜0.05時，認(rèn)為差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 生長性能 生長性能的測定結(jié)果匯總在表2 中，包括初始體重（IBW）、最終體重（FBW）、平均日增重（ADG）、平均日采食量（ADFI）和飼料轉(zhuǎn)化率（FCR）。0.25%和1.0% SMP 添加組的FBW 明顯高于對照組（P＜0.05）。添加SMP 對ADG、ADFI 和FCR 無影響，但相對于對照組，試驗(yàn)組的FCR在一定程度上有所降低。

2.2 免疫狀況 各組肉雞的免疫器官指數(shù)見表3。0.25%SMP 添加組的脾臟指數(shù)高于對照組（P＜0.05）。與對照組相比，0.25%和1.0%SMP添加組的脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)均較高（P＜0.05）。當(dāng)飼喂0.25%SMP 時，胸腺指數(shù)得到明顯改善（P＜0.05）。

免疫應(yīng)答狀態(tài)的測定結(jié)果見表4。所有SMP添加組的IgG 含量均顯著高于對照組（P＜0.05）。添加0.25%SMP 可顯著增加IgM 和IL-2 的含量（P＜0.05）。0.25%和1.0%SMP添加組中，雞新城疫（ND）抗體效價水平（42 d）明顯增高（P＜0.05）。0.5%和1.0%SMP添加組中，TNF-α濃度明顯降低（P＜0.05）。

2.3 血液生化參數(shù) 日糧中補(bǔ)充SMP 對血液生化參數(shù)的影響見表5。SMP 添加組的血清葡萄糖、堿性磷酸酶（ALP）和甘油三酯濃度均低于對照組（P＜0.05）。尿酸在添加1.0%SMP 時顯著降低（P＜0.05），膽固醇濃度在添加0.5%SMP 時顯著降低（P＜0.05）。所有試驗(yàn)組的高密度脂蛋白(HDL)濃度均高于對照組，差異最顯著的是0.25%SMP 添加組（P＜0.05）。添 加0.5% 和1.0%的SMP 后，低密度脂蛋白（LDL）濃度顯著降低（P＜0.05）。

2.4 腸道菌群和黏膜免疫 腸道菌群及黏膜免疫測定結(jié)果見表6。腸道菌群計數(shù)顯示，SMP 添加組的大腸桿菌和沙門氏菌數(shù)量顯著減少（P＜0.05）。與對照組相比，添加0.25%SMP可顯著增加乳酸桿菌的數(shù)量。在日糧中加入SMP 可促進(jìn)腸道黏膜反應(yīng)因子sIgA的分泌，增加其含量（P＜0.05）。

表2 參麥多糖（SMP）對肉雞生長性能的影響g

表3 參麥多糖(SMP)對肉雞脾臟、胸腺和法氏囊指數(shù)的影響mg∕g

表4 參麥多糖（SMP）對免疫應(yīng)答的影響

表5 不同水平參麥多糖（SMP）對血液生化指標(biāo)的影響

表6 不同水平參麥多糖（SMP）對腸道菌群和sIgA分泌量的影響

3 討論

3.1 SMP 對生長性能的影響 BW、ADG、ADFI 和FCR 常作為評估家禽生長性能和經(jīng)濟(jì)價值的指標(biāo)。本研究發(fā)現(xiàn)，在肉雞日糧中添加0.25%SMP，其FBW明顯高于對照組，表明SMP可以促進(jìn)肉雞生長，這與黃芪多糖對肉雞生長性能的影響結(jié)果相似[4]。然而，與以前試驗(yàn)不同的是，本試驗(yàn)添加SMP 對ADG、ADFI 和FCR 值沒有顯著影響，推測可能是由于多糖劑量和來源不同所致。血清生化指標(biāo)可以反映動物物質(zhì)代謝的變化，到目前為止，大量文獻(xiàn)報道了多糖對動物血液生化指標(biāo)具有改善作用[5-6]。本研究表明，SMP可降低血糖、膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白（LDL）水平，提高高密度脂蛋白（HDL）水平。

3.2 SMP 對免疫功能的調(diào)節(jié)作用 多糖對免疫系統(tǒng)有調(diào)節(jié)作用，主要表現(xiàn)為免疫增強(qiáng)或免疫刺激[7]。雞免疫細(xì)胞的發(fā)育、分化和抗體產(chǎn)生主要發(fā)生在免疫器官，包括法氏囊、胸腺和脾臟。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在日糧中加入SMP可以改善肉雞的脾臟、胸腺和法氏囊指數(shù)，提高機(jī)體的整體免疫功能，這與現(xiàn)有的研究成果相似[8]。此外，本試驗(yàn)分別檢測了肉雞IgM、IgG、TNF-α、IL-2的含量及ND效價,作為評價機(jī)體免疫水平的指標(biāo)，以綜合判斷肉雞的免疫性能及一般抗性。

一般來說，血清免疫球蛋白水平的高低是判斷動物體液免疫功能好壞的重要指標(biāo)之一。IgG可介導(dǎo)體液免疫反應(yīng)，IgM 主要由淋巴組織和脾臟中的B細(xì)胞產(chǎn)生。本研究發(fā)現(xiàn)，日糧中添加SMP 可增加血清中的IgG 和IgM 含量，說明SMP可以提高動物體內(nèi)抗體水平，更好地幫助機(jī)體抵抗外界物質(zhì)的侵襲。腫瘤壞死因子α（TNF-α）主要由單核-巨噬細(xì)胞分泌，TNF-α含量過高會激活一氧化氮（NO）等細(xì)胞毒性炎癥介質(zhì)的產(chǎn)生，增加疾病的發(fā)生率。目前，大多數(shù)試驗(yàn)都集中于研究多糖對病理模型動物TNF-α含量變化的影響[9]。而在本試驗(yàn)中，添加SMP 可以降低血清中TNF-α的含量，表明在正常條件下SMP對機(jī)體TNF-α的產(chǎn)生具有調(diào)節(jié)作用，能有效預(yù)防疾病的發(fā)生。白細(xì)胞介素-2（IL-2）是由活化的T 或NK細(xì)胞產(chǎn)生的，能刺激T淋巴細(xì)胞增殖，調(diào)節(jié)淋巴細(xì)胞和單核-巨噬細(xì)胞的功能，增強(qiáng)NK細(xì)胞的殺傷活性，促進(jìn)抗體和細(xì)胞因子的產(chǎn)生[10]。本試驗(yàn)添加0.25%和0.5%SMP 組的IL-2 含量增加。推測SMP可能通過促進(jìn)IL-2分泌來刺激T細(xì)胞增殖，增強(qiáng)NK 細(xì)胞活性，從而提高免疫水平。此外，1.0%SMP 添加組的IL-2 含量降低，表明SMP 對IL-2的影響不會隨著濃度的增加而增加，推測存在某一最佳作用劑量，這與其他文獻(xiàn)[11]報道的一致。本試驗(yàn)以0.25%添加劑量的效果最好。新城疫抗體滴度反映了雛雞對新城疫病毒的特異性反應(yīng)，抗體水平越高，體液免疫功能越強(qiáng)。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，SMP 提高了免疫抗體水平，增強(qiáng)了雞對疫病的抗性。

3.3 腸道菌群與黏膜免疫的關(guān)系 研究表明，中藥多糖可作為優(yōu)勢碳源調(diào)節(jié)機(jī)體微生態(tài)機(jī)制，改善腸道健康[12]。多糖進(jìn)入腸道后，被乳酸菌和雙歧桿菌利用發(fā)生降解，產(chǎn)生乙酸、丙酸、丁酸、異戊酸等短鏈脂肪酸，降低腸道pH值，抑制不耐酸致病菌（如大腸桿菌和沙門氏菌等)的生長[13]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，在日糧中添加SMP可促進(jìn)腸道有益菌群乳酸菌的增殖，減少大腸桿菌和沙門氏菌等有害細(xì)菌的數(shù)量?；啬c組織中的分泌型免疫球蛋白A（sIgA）作為腸道免疫屏障的第一道防線，是腸黏膜先天免疫的主要效應(yīng)物，在腸黏膜免疫中起著重要的保護(hù)作用[14]。sIgA水平的高低反映了機(jī)體黏膜免疫狀態(tài)的好壞。本研究中，添加SMP 可以顯著增加腸道sIgA 的含量。對其他多糖的研究也獲得了相似的結(jié)果?？梢奡MP 有利于促進(jìn)肉雞腸道黏膜免疫球蛋白的合成與分泌，增強(qiáng)腸黏膜的局部免疫功能。

4 結(jié)論

綜上，在肉雞基礎(chǔ)日糧中添加SMP可以改善肉雞的生長性能，促進(jìn)肉雞免疫器官的發(fā)育，提高血清IgG、IgM、IL-2 和ND 抗體水平，增加回腸中sIgA 的合成和分泌，降低TNF-α含量，還可以通過培養(yǎng)腸道有益菌、抑制有害菌含量來調(diào)節(jié)腸道菌群。