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        口腔扁平苔蘚患者血清脂肪因子趨化素水平與Th17/Treg比值的相關(guān)性

        2021-01-26 07:52:30郭明郭盼辛越紅黎煒
        疑難病雜志 2021年1期
        關(guān)鍵詞:性反應(yīng)外周血血清

        郭明,郭盼,辛越紅,黎煒

        口腔扁平苔蘚(oral lichen planus,OLP)是一種臨床常見且好發(fā)于口腔黏膜的非感染性炎性疾病,其反復(fù)發(fā)作、可慢性遷延至終身,對患者身心健康造成嚴(yán)重影響[1]。但OLP發(fā)病原因及機(jī)制尚不完全清楚。脂肪因子趨化素(Chemerin)是脂肪細(xì)胞因子之一,與慢性腎臟病、潰瘍性結(jié)腸炎、慢性胰腺炎、子癇前期等炎性反應(yīng)相關(guān)疾病密切相關(guān)[2]。多囊卵巢綜合征患者血清中Chemerin水平明顯上調(diào),經(jīng)二甲雙胍治療后,其水平明顯下降,其對多囊卵巢綜合征具有一定診斷價值[3]。輔助性T細(xì)胞17(Th17)/調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)比例失調(diào)可能影響各種免疫失調(diào)的炎性疾病發(fā)生發(fā)展[4]。Th17/Treg比值在OLP患者外周血中升高,其失衡在OLP發(fā)病進(jìn)程中發(fā)揮重要作用[5]。但Chemerin在OLP患者血清中的表達(dá)情況及與Th17/Treg平衡的關(guān)系尚未見相關(guān)報(bào)道。現(xiàn)分析Chemerin在OLP患者血清中的表達(dá)水平及其與Th17/Treg平衡的關(guān)系,以期為臨床診治OLP提供依據(jù),報(bào)道如下。

        1 資料與方法

        1.1 臨床資料 選擇2018年7月—2020年3月中國中醫(yī)科學(xué)院西苑醫(yī)院口腔科收治的OLP患者58例作為OLP組,其中男18例,女40例,年齡29~68(46.24±14.87)歲;體質(zhì)量指數(shù)(BMI)17.56~24.35(20.97±2.87)kg/m2;病程1~15(7.46±5.83)個月;病變分型:非糜爛型33例,糜爛型25例。納入同期醫(yī)院健康體檢者62例作為健康對照組:男21例,女41例,年齡31~66(45.91±14.72)歲;BMI 17.42~25.02(21.16±2.93)kg/m2。2組性別、年齡、BMI等比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn),入選者及家屬知情同意并簽署知情同意書。

        1.2 病例選擇標(biāo)準(zhǔn) (1)診斷標(biāo)準(zhǔn):參考《口腔黏膜病學(xué)》有關(guān)OLP判定標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行診斷[6]。(2)納入標(biāo)準(zhǔn):①所有患者臨床表現(xiàn)均符合OLP診斷標(biāo)準(zhǔn),必要時進(jìn)行病理確診;②所有患者不伴有牙周炎、皮損、復(fù)發(fā)性阿弗他潰瘍等其他口腔疾??;③患者自愿參與并完成該項(xiàng)研究。(3)排除標(biāo)準(zhǔn):①口服藥物、金屬全冠、銀汞合金等引起的苔蘚樣反應(yīng)者;②合并糖尿病、高血壓等全身系統(tǒng)疾病者;③合并艾滋病、乙肝、結(jié)核等感染性疾病者;④合并類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡及其他自身免疫性疾病者;⑤處于妊娠期、月經(jīng)期、哺乳期女性;⑥近期使用過抗生素、糖皮質(zhì)激素、免疫抑制劑者。

        1.3 觀測指標(biāo)與方法

        1.3.1 樣本采集:采集所有受試者清晨空腹肘靜脈血7~8 ml,均分成2份。一份置于無菌EP管中,室溫自然凝集30 min, 離心取上層血清,分裝于凍存管中,于-80℃冰箱中保存?zhèn)錅y;另一份置于含肝素抗凝劑的抗凝管備用。

        1.3.2 血清Chemerin測定:上述血清采用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法檢測Chemerin水平,嚴(yán)格按照試劑盒(上海恒斐生物科技有限公司生產(chǎn))說明書進(jìn)行。

        1.3.3 外周血Th17、Treg細(xì)胞測定:上述血液采用密度梯度離心法及Ficoll淋巴細(xì)胞分離液(北京百奧萊博科技有限公司生產(chǎn))獲得外周血單個核細(xì)胞,利用RPMI-1640培養(yǎng)液將外周血單個核細(xì)胞密度調(diào)整為2×106個/ml,利用流式細(xì)胞儀(型號 CytoFLEX,貝克曼庫爾特商貿(mào)中國有限公司生產(chǎn))檢測Th17、Treg細(xì)胞含量,計(jì)算Th17/Treg比值。

        1.3.4 血清IL-17、IL-10 mRNA測定:將保存的血清樣本解凍,無菌環(huán)境下,直接采用TRIzol試劑盒(上海彩佑實(shí)業(yè)有限公司生產(chǎn))、反轉(zhuǎn)錄試劑盒Reverse Transcription Kit(廣州昂飛生物科技有限公司生產(chǎn))提取總RNA并反轉(zhuǎn)錄成cDNA。參照SYBR Green QPCR mix熒光定量PCR試劑盒(上海經(jīng)科化學(xué)科技有限公司生產(chǎn))說明書配制反應(yīng)體系,利用實(shí)時熒光定量PCR(qRT-PCR)基因擴(kuò)增儀(型號 T20,杭州朗基科學(xué)儀器有限公司生產(chǎn))進(jìn)行cDNA擴(kuò)增,qPCR檢測。IL-17、IL-10均以β-actin為內(nèi)參,引物由北京百奧萊博科技有限公司合成,其相應(yīng)引物序列見表1??偡磻?yīng)體系(20 μl)包括:cDNA 3 μl,正向、反向引物各1 μl,SYBR Green QPCR mix 8 μl,DEPC水7 μl。反應(yīng)步驟:95 ℃ 3 min,95 ℃ 20 s、65 ℃ 30 s、70 ℃ 18 s,35個循環(huán);每個樣品重復(fù)3次。采用2-△△CT法計(jì)算血清IL-17、IL-10相對表達(dá)量。

        表1 IL-17、IL-10及內(nèi)參β-actin的引物序列

        2 結(jié) 果

        2.1 2組血清Chemerin和外周血細(xì)胞Th17、Treg、Th17/Treg水平比較 與健康對照組比較,OLP組患者血清Chemerin水平和外周血Th17細(xì)胞百分比、Treg細(xì)胞百分比、Th17/Treg細(xì)胞比例均明顯升高(P均<0.05), 見表2。

        表2 2組受試者血清Chemerin和外周血Th17、Treg及Th17/Treg水平比較

        2.2 2組血清IL-17、IL-10 mRNA表達(dá)比較 與健康對照組比較,OLP組患者血清IL-17、IL-10 mRNA表達(dá)水平均明顯升高(P均<0.05),見表3。

        表3 2組受試者血清IL-17 mRNA、IL-10 mRNA表達(dá)水平比較

        2.3 血清Chemerin與Th17、Treg、Th17/Treg及IL-17 mRNA、IL-10 mRNA的關(guān)系 Pearson法分析顯示,OLP患者血清中Chemerin水平與Th17、Treg、Th17/Treg及IL-17、IL-10 mRNA均呈正相關(guān)(r/P=0.461/0.000、0.456/0.000、0.411/0.000、0.477/0.000、0.459/0.000)。

        3 討 論

        OLP是一種免疫介導(dǎo)的炎性疾病,具有惡變潛能,極可能危及患者生命安全[7-9]。因此,尋找OLP發(fā)病相關(guān)因素,對盡早診治OLP具有重要意義。

        Chemerin是一種趨化因子,在血液及多種組織中均有表達(dá),其可在氧化應(yīng)激、信號傳導(dǎo)、免疫應(yīng)答、炎性反應(yīng)等生物學(xué)過程中起重要作用[10-11]。Chemerin在慢性腎臟病患兒血清中呈高表達(dá),其表達(dá)水平與腎臟功能障礙有關(guān),有望成為評估心血管疾病并發(fā)癥及腎移植后腎結(jié)局的生物學(xué)指標(biāo)[12]。Chemerin在潰瘍性結(jié)腸炎中表達(dá)失調(diào),其可能參與并影響潰瘍性結(jié)腸炎疾病的發(fā)生發(fā)展,可能是治療潰瘍性結(jié)腸炎的潛在靶標(biāo)[13]。Chemerin在慢性胰腺炎中水平上調(diào),其可能在慢性胰腺炎發(fā)展進(jìn)程中發(fā)揮重要作用,有可能是診斷慢性胰腺炎的潛在指標(biāo)[14]。以上研究表明,表達(dá)異常的Chemerin與炎性疾病發(fā)展過程關(guān)系密切。本研究中OLP患者血清Chemerin水平明顯高于健康體檢者,提示其可能在OLP發(fā)病進(jìn)展中起一定作用。分析其原因,Chemerin可能通過調(diào)控免疫細(xì)胞聚集,促進(jìn)炎性反應(yīng),進(jìn)而在OLP發(fā)展中發(fā)揮促炎作用,但仍需深入探究其作用機(jī)制。Th17/Treg平衡可有效維持機(jī)體免疫穩(wěn)態(tài),Th17/Treg失衡參與并影響自身免疫性疾病及過敏性疾病等炎性疾病的發(fā)展進(jìn)程,Th17/Treg比值在過敏性哮喘患者外周血中明顯升高,Th17/Treg失衡可能在過敏性哮喘中發(fā)揮重要免疫調(diào)節(jié)作用[15]。賈沛茹等[5]研究發(fā)現(xiàn),Th17/Treg比例在OLP患者外周血中均增加,體內(nèi)發(fā)生Th17/Treg平衡紊亂,與病情嚴(yán)重程度相關(guān),調(diào)節(jié)Th17/Treg平衡,有望為治療OLP提供新靶點(diǎn)。本研究顯示,OLP組患者外周血Th17細(xì)胞百分比、Treg細(xì)胞百分比、Th17/Treg細(xì)胞比值均明顯高于健康對照組,提示Th17及Treg細(xì)胞亞群均參與了OLP的全身免疫反應(yīng),且以Th17細(xì)胞占優(yōu)勢的Th17/Treg失衡可能在OLP發(fā)病過程中發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用,具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究證實(shí)。

        IL-17是由Th17細(xì)胞分泌的標(biāo)志性促炎因子,可誘導(dǎo)趨化因子和其他細(xì)胞因子表達(dá),從而介導(dǎo)炎性細(xì)胞聚集、浸潤及組織損傷[16]。本研究顯示,IL-17在OLP患者血清中呈高表達(dá),與王婷婷等[17]研究趨勢一致,提示IL-17可能參與并影響OLP發(fā)病過程。分析可能原因,Th17細(xì)胞可能被抗原呈遞細(xì)胞激活后,釋放IL-17,進(jìn)而參與OLP的炎性反應(yīng)過程。IL-10是由Treg等細(xì)胞分泌的抑制炎性因子,其可抑制促炎因子的釋放及抗原的提呈,可在免疫炎性類疾病中發(fā)揮抑制炎性反應(yīng)及免疫調(diào)節(jié)作用,IL-10在OLP外周血中表達(dá)上調(diào),其可能在OLP發(fā)展進(jìn)程中起重要作用。本研究中OLP組IL-10表達(dá)水平明顯高于健康對照組,與徐建英等[18]研究趨勢相符,提示Treg可能通過分泌IL-10,進(jìn)而在OLP發(fā)生進(jìn)展中發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用。IL-10表達(dá)水平升高可能是機(jī)體全身免疫對局部炎性反應(yīng)的免疫應(yīng)激反應(yīng);此外,機(jī)體通過增加IL-10表達(dá),使巨噬細(xì)胞的活化、自身反應(yīng)性淋巴細(xì)胞的激活劑擴(kuò)增受到抑制,從而維持免疫耐受[19]。

        本研究顯示,OLP患者血清中Chemerin水平與Th17、Treg、Th17/Treg及IL-17、IL-10 mRNA均呈正相關(guān),提示Chemerin與Th17、Treg、Th17/Treg、IL-17 mRNA、IL-10 mRNA相互影響,從而在OLP發(fā)病過程中起一定作用,究其原因,Chemerin可能通過炎性介質(zhì)分泌及表達(dá)的改變,從而促進(jìn)OLP炎性反應(yīng)過程,且Th17、Treg可能通過抗原刺激分別分泌IL-17、IL-10,從而在OLP疾病發(fā)展進(jìn)程中發(fā)揮作用。進(jìn)一步研究顯示,OLP患者血清Chemerin水平與Th17/Treg細(xì)胞比例呈正相關(guān),提示Chemerin的改變可能協(xié)同Th17、Treg細(xì)胞亞群失衡共同參與OLP發(fā)病進(jìn)展。

        綜上所述,OLP患者血清Chemerin表達(dá)上調(diào),且外周血Th17、Treg細(xì)胞百分比均升高,Th17/Treg平衡失調(diào),Chemerin水平與Th17/Treg存在正相關(guān)性,Chemerin、Th17/Treg可能通過相互影響,進(jìn)而在OLP發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮作用。對Chemerin水平及Th17/Treg平衡的深入探究,有望為治療OLP提供新靶點(diǎn)。但本研究仍有不足之處,研究樣本量較少,可能會造成試驗(yàn)結(jié)果發(fā)生一定偏差,后續(xù)將擴(kuò)大研究樣本量,進(jìn)行深入探究。

        利益沖突:所有作者聲明無利益沖突

        作者貢獻(xiàn)聲明

        郭明:設(shè)計(jì)研究方案,實(shí)施研究過程,論文撰寫;郭盼:提出研究思路,分析試驗(yàn)數(shù)據(jù),論文審核;辛越紅:實(shí)施研究過程,資料搜集整理,論文修改;黎煒:提出研究思路,進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

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