李晶晶，季青，劉煊，李琦，岳小強(qiáng)

1.中國(guó)人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)長(zhǎng)征醫(yī)院，上海200003；2.上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬曙光醫(yī)院，上海200003

胃癌是我國(guó)常見惡性腫瘤，雖然手術(shù)、放療、化療等技術(shù)不斷進(jìn)步，靶向藥物也不斷涌現(xiàn)，但目前對(duì)于胃癌的整體療效仍不理想。近年來，中醫(yī)藥在胃癌綜合防治中的作用與地位越來越受到重視。滋陰化痰方（Ziyin Huatan Recipe，ZYHT）是上海長(zhǎng)征醫(yī)院中醫(yī)科基于“胃癌痰證理論”所創(chuàng)制的針對(duì)晚期胃癌的有效方劑。前期研究證實(shí)其對(duì)胃癌血管新生有明顯的抑制作用［1］，但其確切機(jī)制尚不明確。外泌體是由多種細(xì)胞（包括腫瘤細(xì)胞）通過胞吐方式分泌至微環(huán)境中的一種直徑在30～100 nm，具有雙層膜結(jié)構(gòu)的囊狀結(jié)構(gòu)［2］，幾乎所有的細(xì)胞都可以分泌外泌體，有些微生物亦可以產(chǎn)生［3-5］。近年來發(fā)現(xiàn)在細(xì)胞之間的通訊中發(fā)揮重要調(diào)節(jié)作用［6］，可直接轉(zhuǎn)運(yùn)促血管新生相關(guān)蛋白至內(nèi)皮細(xì)胞，也可通過轉(zhuǎn)運(yùn)microRNA和lncRNA，進(jìn)而影響促血管新生因子的表達(dá)［7］。外泌體不僅本身參與腫瘤免疫、腫瘤侵襲及轉(zhuǎn)移等過程，并且腫瘤外泌體攜帶的內(nèi)容物可能作為腫瘤標(biāo)志物用于腫瘤的早期診斷與治療［8］?，F(xiàn)代研究者認(rèn)為，外泌體研究雖屬微觀分子學(xué)，但其整體表達(dá)的特點(diǎn)與中醫(yī)整體觀念有相似性［9］。目前更有學(xué)者將外泌體引入中醫(yī)的研究領(lǐng)域，為中醫(yī)和外泌體的結(jié)合帶來新的進(jìn)展與突破［10］。本研究擬觀察ZYHT是否通過調(diào)控胃癌細(xì)胞來源的外泌體來影響人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞管樣分化，繼而影響腫瘤的血管新生。

1 材料

1.1 細(xì)胞HUVECs、SGC-7901、MGC-803均購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院細(xì)胞資源中心。

1.2 藥品與試劑ZYHT中所需藥物百合（批號(hào):18041006）、白花蛇舌草（批號(hào):18082704）、制半夏（批號(hào):19052209）均為吳江上海蔡同德中藥飲片公司提供。DMEM培養(yǎng)基（美國(guó)Hyclone公司，批號(hào):AE29431636）；FBS（美國(guó) GIBCO 公司，批號(hào):42G9081K）；0.25%胰蛋白酶-0.02%EDTA（上海碧云天科技有限公司，批號(hào):090619191011）；PKH67細(xì)胞膜標(biāo)記熒光染色劑（美國(guó)Sigma公司，批號(hào):MKCH2943）；Matrigel基質(zhì)膠（美國(guó)BD公司，批號(hào):9189007）；BCA蛋白質(zhì)定量試劑盒（上海碧云天科技有限公司，批號(hào):010719190723）；表面標(biāo)志物TSG101、CD81多克隆抗體（美國(guó)Proteintech公司，批號(hào):14497-1-AP、66866-1-Ig）；GAPDH多克隆抗體（美國(guó)Cell signaling公司，批號(hào):14971633）。細(xì)胞培養(yǎng)上清外泌體快速抽提試劑盒HieffTM（上海翊圣生物科技有限公司，批號(hào):H8914770）。

1.3 儀器倒置相差顯微鏡（日本奧林巴斯公司，型號(hào):CKX53）；CO2培養(yǎng)箱（美國(guó)Thermo公司，型號(hào):CCL-170B-8）；多功能酶標(biāo)儀（美國(guó)Biotek Instruments公司，型號(hào):8218141）；透射電鏡（美國(guó)FEI公司，型號(hào):Tecnai G2 Spirit Biotwin）；納米顆粒跟蹤分析儀NanoSight（英國(guó)Malvern公司，型號(hào):Zeta View）；共聚焦熒光顯微鏡［奧林巴斯（中國(guó)）有限公司，型號(hào):IX73］。

2 方法

2.1 ZYHT制備將百合30 g，白花蛇舌草30 g和制半夏15 g，加8倍水煎2次，每次2 h，將煎液濾過，減壓濃縮成膏。加入2倍乙醇攪拌，靜置48 h，過濾并回收乙醇，濃縮成膏，并干燥粉碎［11］。由上海長(zhǎng)征醫(yī)院藥材科統(tǒng)一制備，質(zhì)控穩(wěn)定。ZYHT配制:用培養(yǎng)基配制1 g·L-1母液。CCK-8法檢測(cè)ZYHT的IC10值，根據(jù)IC10值確定ZYHT的給藥濃度［1］。此次實(shí)驗(yàn)確定高劑量ZYHT（ZYHT-H）和低劑量ZYHT（ZYHT-L）為研究對(duì)象。

2.2 外泌體的分離純化取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的第4代MGC-803細(xì)胞，分別加入2種不同劑量的ZYHT，用去除外泌體的完全培養(yǎng)基培養(yǎng)48 h后，收集上清培養(yǎng)液，0.22μm 濾膜過濾，離心半徑11.5 cm，3 000 g離心10 min，小心收集上清并轉(zhuǎn)移至新的離心管，于冰上放置待用；加入一定比例的外泌體抽提試劑，渦旋振蕩混勻1 min，放置4℃靜置2 h或過夜；取出裝有混合液的離心管于4℃，離心半徑8.4 cm，10 000 g離心60 min，棄上清，收集沉淀，取適量PBS均勻吹打離心沉淀物，使其充分混勻，并轉(zhuǎn)移至新的離心管中；將含有外泌體的離心管于4℃，離心半徑8.4 cm，12 000 g離心2 min，棄沉淀，保留上清；將獲取的MGC-803-Exos于80℃保存?zhèn)溆?，避免反?fù)凍融。SGC-7901-Exos操作同前。

2.3 外泌體的鑒定

2.3.1 透射電鏡觀察MGC-803-Exos形態(tài)取10μL的MGC-803-Exos滴于透射電鏡專用的載樣銅網(wǎng)上，常溫靜置2 min，濾紙吸去浮液，用1%（W/V）磷鎢酸溶液染色5 min后，濾紙吸去多余染色液，晾干，透射電鏡觀察MGC-803-Exos的形態(tài)。

2.3.2 W estern blot法檢測(cè)MGC-803-Exos膜表面標(biāo)志性蛋白取MGC-803-Exos 100μg，加入100μL的RIPA裂解液，吹打使裂解液和MGC-803-Exos充分混合，冰上裂解30min，在4℃下，離心半徑8.4 cm，12 000 g離心30 min，吸取上清液置于1.5 mL EP管中，-80℃凍存。BCA法檢測(cè)蛋白濃度后，加入5×Loading Buffer，99℃變性10 min。按每孔20μL上樣至10%SDS-PAGE膠，80 V電泳30min，120 V電泳1 h，采用濕法轉(zhuǎn)膜，200mA轉(zhuǎn)膜1 h 30 min，5%BSA封閉液室溫封閉2 h，5%BSA封閉液以1∶1 000的比例稀釋一抗GAPDH、TSG101和CD81，4℃孵育一抗過夜。TBST漂洗10 min，洗滌3次，加入二抗室溫孵育2 h，加入顯影液，上機(jī)曝光。

2.3.3 MGC-803-Exos粒徑分析取濃度為100 mg·L-1的100μL的MGC-803-Exos重懸于1.5 mL PBS內(nèi)，經(jīng)納米顆粒跟蹤分析儀NanoSight進(jìn)行檢測(cè)。SGC-7901-Exos操作同前。

2.4 外泌體與HUVECs共培養(yǎng)觀察

2.4.1 外泌體染色取濃度為100 mg·L-1的MGC-803-Exos加入300μL的DiluentC溶液混勻，配制成MGC-803-Exos工作液，以確保完全分散。在新的離心管中加入1μL的PKH6與250μL的Diluent C溶液混勻，配制成PKH67染色液。SGC-7901-Exo工作液和PKH67染色液輕柔混勻4 min后，加入等體積0.5%BSA結(jié)合多余染料，室溫孵育20min。加入比例外泌體提取試劑4℃避光靜置2 h。4℃，10 000 g，離心60 min，PBS重懸染色后的MGC-803-Exos。將含有外泌體的離心管于4℃，離心半徑8.4 cm，12 000 g離心2 min，棄沉淀，保留上清，用0.22 nm濾器過濾，4℃避光保存?zhèn)溆谩?/p>

2.4.2 MGC-803-Exos與HUVECs共培養(yǎng)取第5代HUVECs重懸于無血清培養(yǎng)基中，以5×104·mL-1濃度加入24孔板中，每孔100μL（5 000個(gè)），置于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中，待細(xì)胞貼壁后加入上述PKH67熒光標(biāo)記的MGC-803-Exos，孵育24 h后去培養(yǎng)基，將細(xì)胞用TBST洗3遍，每次3 min；用4%多聚甲醛固定爬片15 min（可4℃固定過夜），PBS洗3次，每次3 min；每孔加入0.5%Tritonx-100 250μL，室溫通透20 min（細(xì)胞膜打孔）；用TBST洗3遍，每次3～5 min，吸水紙吸干；每孔加入DAPI200μL，避光孵育5min，用TBST洗3遍，每次3 min；染膜:膜探針（紅色），1∶100稀釋，每孔200μL，染5～20 min，用TBST洗3遍，每次3 min。共聚焦熒光顯微鏡下觀察ADSC-Exos是否進(jìn)入細(xì)胞，鏡下PKH67熒光標(biāo)記的MGC-803-Exos呈綠色熒光。SGC-7901-Exos操作同前。

2.4.3 外泌體影響進(jìn)HUVECs管樣結(jié)構(gòu)形成實(shí)驗(yàn)

將Matrigel基質(zhì)膠置于96孔板中，37℃孵育30 min使其凝固。用無血清培養(yǎng)基重懸第5代HUVECs后接種至96孔板中，每孔2×104個(gè)細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)分為4組分別加入濃度為100 mg·L-1的MGC-803-Exos、300 mg·L-1的MGC-803-Exos、500 mg·L-1的MGC-803-Exos以及等量PBS（對(duì)照組）。每組3個(gè)復(fù)孔。于37℃處理48 h后，倒置相差顯微鏡下觀察管狀結(jié)構(gòu)形成情況，計(jì)算每孔分支結(jié)構(gòu)總長(zhǎng)度。SGC-7901-Exos操作同前。

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，多組比較時(shí)，先行正態(tài)性檢驗(yàn)，若不符合正態(tài)分布，則采用非參數(shù)檢驗(yàn)KruskalWallis檢驗(yàn)法；若符合正態(tài)分布，則采用單因素方差分析（one way ANOVA），多個(gè)實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組進(jìn)行比較采用Dunnett′s test檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)為α＝0.05，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 外泌體鑒定透射電鏡觀察示，MGC-803-Exos和SGC-7901-Exos為大小均勻、形態(tài)一致的圓形或橢圓形膜性囊泡，邊緣清晰。納米顆粒跟蹤分析儀NanoSight檢測(cè)顯示，MGC-803-Exos粒徑范圍為37.9～203.5 nm，SGC-7901-Exos粒徑范圍57.4～147.5 nm 符合外泌體粒徑范圍30～200 nm（見圖1、圖2）。Western blot檢測(cè)顯示，TSG101和CD81為其標(biāo)志蛋白，內(nèi)參蛋白為GAPDH（見圖3）。

圖1 MGC-803-Exos的電鏡形態(tài)和粒徑大小

圖2 SGC-7901-Exos的電鏡形態(tài)和粒徑大小

圖3 外泌體的標(biāo)志蛋白CD81、TSH101

3.2 外泌體與HUVECs共培養(yǎng)為了進(jìn)一步驗(yàn)證外泌體能否被HUVECs攝取，我們對(duì)外泌體進(jìn)行染色標(biāo)記，與HUVECs共培養(yǎng)24 h后，發(fā)現(xiàn)在共聚焦顯微鏡下被PKH67熒光標(biāo)記的外泌體呈云霧狀或斑片狀綠色熒光，聚集在細(xì)胞核周圍。說明外泌體可以被HUVECs攝?。ㄒ妶D4）。

圖4 血管內(nèi)皮細(xì)胞攝取外泌體

3.3 ZYHT調(diào)控腫瘤細(xì)胞來源外泌體抑制HUVECs管樣結(jié)構(gòu)形成將外泌體與HUVECs共培養(yǎng)，觀察ZYHT能否調(diào)控外泌體影響HUVECs的管樣分化能力。倒置相差顯微鏡觀察結(jié)果顯示，當(dāng)外泌體濃度為100 mg·L-1時(shí)，不論是MGC-803-EXOs或SGC-7901-EXOs對(duì)HUVECs成管能力無明顯影響。但當(dāng)外泌體濃度為300 mg·L-1和500 mg·L-1時(shí)，ZYHT調(diào)控外泌體影響HUVECs的管樣分化能力與對(duì)照組相比表現(xiàn)出明顯差異（見圖5、圖6）。

圖5 ZYHT調(diào)控MGC-803-Exos對(duì)HUVECs體外成管能力的影響

圖6 ZYHT調(diào)控SGC-7901-Exos對(duì)HUVECs體外成管能力的影響

3.4 不同處理方式對(duì)MGC細(xì)胞的比較運(yùn)用重復(fù)測(cè)量方差分析的方法發(fā)現(xiàn)在MGC-803細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中不同的處理之間存在著顯著的差異（F ＝212.257，P＜0.001），不同處理方法與不同濃度之間的交互作用顯著（F＝49.539，P＜0.001），而不同濃度之間不存在顯著的差異（見表1和表2）。由表1可知，HUVECs的分支長(zhǎng)度，在MGC-803-Exos組是隨著濃度的增加而增加；在ZYHT-L-MGC-803-Exos組和ZYHT-H-MGC-803-Exos組是隨濃度的增加而減少。由表2可知，外泌體濃度為100mg·L-1，MGC-803-Exos組的HUVECs分支長(zhǎng)度最長(zhǎng)；外泌體濃度為300 mg·L-1和500 mg·L-1，ZYHT-H-MGC-803-Exos組的HUVECs分支長(zhǎng)度最短。由此得出ZYHT調(diào)控MGC-803-Exos抑制HUVECs管樣分化能力的影響是隨著外泌體濃度的增加及ZYHT劑量的增加而增強(qiáng)（見圖7）。

表1 不同濃度在同一實(shí)驗(yàn)處理的比較 （±s）

表1 不同濃度在同一實(shí)驗(yàn)處理的比較 （±s）

注：*表示P＜0.05；**表示P＜0.01；***表示P＜0.001

處理方法（I）濃度（ρ/mg·L-1）（J）濃度（ρ/mg·L-1）平均差異（I-J ）***MGC-803-Exos 100 300-1 107.33 500-3 674.33 300 100 1 107.33***500-2 567.00 500 100 3 674.33 300 2 567.00 ZYHT-L-MGC-803-Exos 100 300 1 359.00*500 2 273.67*300 100-1 359.00*500 914.67*500 100-2 273.67*300-914.67*ZYHT-H-MGC-803-Exos 100 300 2 473.67**500 3140.67**300 100-2473.67**500 667.00 500 100-3140.67**300-667.00

圖7 不同濃度在同一實(shí)驗(yàn)處理的比較

3.5 不同處理方式對(duì)SGC-7901細(xì)胞的比較在SGC-7901細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，不同的處理之間也存在著顯著的差異（F＝408.572，P＜0.001），不同濃度之間存在顯著差異（F＝53.374，P＜0.01），且不同處理方法與不同濃度之間的交互作用顯著（F＝407.535，P＜0.001）（見表3和表4）。由表3可知，HUVECs的分支長(zhǎng)度，在SGC-7901-Exos組是隨著濃度的增加而增加；在ZYHT-L-SGC-7901-Exos組和ZYHT-H-SGC-7901-Exo是隨濃度的增加而減少。由表4 可知，外泌體濃度為100 mg·L-1的情況下，SGC-7901-Exos組的HUVECs分支長(zhǎng)度最長(zhǎng)；外泌體濃度為300 mg·L-1和500 mg·L-1，ZYHT-H-SGC-7901-Exos組的HUVECs分支長(zhǎng)度最短。由此得出ZYHT調(diào)控SGC-7901-Exos抑制HUVECs管樣分化能力的影響是隨著外泌體濃度的增加及ZYHT劑量的增加而增強(qiáng)（見圖8）。

表2 不同處理在同一濃度的比較（±s）

表2 不同處理在同一濃度的比較（±s）

注：*表示P＜0.05；**表示P＜0.01；***表示P＜0.001

濃度（ρ/mg·L-1）（I）處理方法（J）處理方法平均差異（I-J ）100 Control MGC-803-Exos-1106.67 ZYHT-L-MGC-803-Exos-449.67 ZYHT-H-MGC-803-Exos 84.67 MGC-803-Exos Control 1106.67 ZYHT-L-MGC-803-Exos 657.00 ZYHT-H-MGC-803-Exos 1191.33**ZYHT-L-MGC-803-Exos Control 449.67 MGC-803-Exos-657.00 ZYHT-H-MGC-803-Exos 534.33 ZYHT-H-MGC-803-Exos Control-84.67 MGC-803-Exos-1191.33*ZYHT-L-MGC-803-Exos-534.33 300 Control MGC-803-Exos-2214.00*ZYHT-L-MGC-803-Exos 909.33 ZYHT-H-MGC-803-Exos 2558.33*MGC-803-Exos Control 2214.00*ZYHT-L-MGC-803-Exos 3123.33***ZYHT-H-MGC-803-Exos 4772.33***ZYHT-L-MGC-803-Exos Control-909.33 MGC-803-Exos-3123.33***ZYHT-H-MGC-803-Exos 1649.00***ZYHT-H-MGC-803-Exos Control-2558.33*MGC-803-Exos-4772.33***ZYHT-L-MGC-803-Exos-1649.00***500 Control MGC-803-Exos-4781.00 ZYHT-L-MGC-803-Exos 1824.00*ZYHT-H-MGC-803-Exos 3225.33*MGC-803-Exos Control 4781.00 ZYHT-L-MGC-803-Exos 6605.00 ZYHT-H-MGC-803-Exos 8006.33*ZYHT-L-MGC-803-Exos Control-1824.00*MGC-803-Exos-6605.00*ZYHT-H-MGC-803-Exos 1401.33*ZYHT-H-MGC-803-Exos Control-3225.33*MGC-803-Exos-8006.33*ZYHT-L-MGC-803-Exos-1401.33*

表3 不同濃度在同一實(shí)驗(yàn)處理的比較

表4 不同處理在同一濃度的比較

圖8 不同處理在同一濃度的比較

4 討論

近年來隨著對(duì)腫瘤微環(huán)境研究的不斷深入，外泌體開始受到越來越多的關(guān)注。外泌體在腫瘤的自噬、化療抵抗、轉(zhuǎn)移等生物學(xué)進(jìn)程中發(fā)揮重要的調(diào)控作用［12］。眾所周知，在腫瘤發(fā)生的早期就伴隨著新血管的生長(zhǎng)，而更多研究表明腫瘤的血管新生與其產(chǎn)生的外泌體密切相關(guān)。外泌體作為腫瘤與各種正常細(xì)胞之間的通訊系統(tǒng)，可以將自身攜帶的與血管新生相關(guān)蛋白、microRNA和lncRNA傳遞給參與血管生成的受體細(xì)胞的分子和遺傳物質(zhì)，并促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞和其他正常細(xì)胞表型和功能的重新編程［13］。研究發(fā)現(xiàn)惡性黑色素瘤細(xì)胞來源的外泌體內(nèi)含有miRNA-9，其可以通過激活JAK-STAT通路來促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的管腔形成［14］。Umezu等［15］發(fā)現(xiàn)來源于人類白血病腫瘤細(xì)胞的外泌體傳遞的miRNA被HUVECs攝取后，可增加腫瘤細(xì)胞遷移能力和促進(jìn)血管管腔的形成。Yuk-Kit等［16］研究發(fā)現(xiàn)人鼻咽癌 C666-1 細(xì)胞分泌的外泌體被HUVECs胞吞后，改變了HUVECs相應(yīng)的蛋白質(zhì)，促進(jìn)血管生成，表明外泌體可能通過改變內(nèi)皮細(xì)胞蛋白質(zhì)的表達(dá)水平來促進(jìn)血管生成。還有研究證明，外泌體通過體內(nèi)和體外靶向轉(zhuǎn)錄因子c-MYB，將miR-130a從胃癌細(xì)胞導(dǎo)入到血管細(xì)胞，可以促進(jìn)血管生成和腫瘤生長(zhǎng)［17］。LIU等［18］報(bào)道，CD97高表達(dá)的胃癌組織來源的外泌體可發(fā)揮促血管生成作用而使胃癌細(xì)胞增殖能力提高20%。由此可見，外泌體可以通過多種途徑促進(jìn)腫瘤血管的生成，加速腫瘤生長(zhǎng)。外泌體作為腫瘤血管生成的潛在生物標(biāo)志物，有望成為抗腫瘤血管生成治療的靶點(diǎn)。

中醫(yī)藥對(duì)惡性腫瘤的防治有獨(dú)特的作用，通過抑制血管新生、調(diào)節(jié)免疫微環(huán)境等干預(yù)腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移［19］，特別是針對(duì)腫瘤的復(fù)發(fā)，中醫(yī)藥具有一定的優(yōu)勢(shì)［20］。由于外泌體參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展和侵襲與轉(zhuǎn)移等諸多生理活動(dòng)，而中醫(yī)藥防治腫瘤具有多環(huán)節(jié)、多途徑、多靶點(diǎn)的特點(diǎn)，因此，中醫(yī)藥的作用機(jī)制可能通過干預(yù)外泌體介入腫瘤診療的各個(gè)環(huán)節(jié)［21］。中醫(yī)研究著眼于臟腑功能的整體變化，而細(xì)胞和組織分子亦是一個(gè)動(dòng)態(tài)演變的過程，外泌體產(chǎn)生異常的蛋白質(zhì)、分子等靶基因，提示人體內(nèi)部微環(huán)境的動(dòng)態(tài)變化，從而出現(xiàn)不同的癥狀和體征。因此將外泌體與中醫(yī)藥相結(jié)合，未來可從新的微觀角度揭示中醫(yī)辨證論治腫瘤的機(jī)制［22-25］。ZYHT是課題組所在學(xué)科基于中醫(yī)“從痰論治胃癌”的理論所創(chuàng)制的針對(duì)晚期胃癌的基礎(chǔ)方，該方以百合為君，用之益胃扶正、化痰祛邪；制半夏為臣，降氣和胃、燥濕化痰；佐以白花蛇舌草清熱解毒利濕。前期臨床觀察發(fā)現(xiàn)，其聯(lián)合化療可明顯改善胃癌患者生活質(zhì)量，延長(zhǎng)其生存期。本研究顯示ZYHT可抑制胃癌細(xì)胞的侵襲和遷移，其機(jī)制與抗胃癌血管新生有關(guān)。本研究將ZYHT作用于腫瘤細(xì)胞，結(jié)果顯示隨著ZYHT藥物劑量的增加，其調(diào)控外泌體抑制HUVECs的管樣分化的作用增強(qiáng)，并且這種作用是隨著外泌體濃度的增加而增強(qiáng)，提示調(diào)控腫瘤細(xì)胞外泌體分泌的確是ZYHT抗血管生成的內(nèi)在分子機(jī)制之一?？梢娢磥砜梢酝饷隗w為切入點(diǎn)，更全面地研究中醫(yī)藥防治腫瘤的機(jī)制。