馬永峰，要莉莉，劉 利，張銀文，蔣 浩，謝榮景，毛曉博

河北省滄州市人民醫(yī)院：1.胸外科；2.重癥醫(yī)學科，河北滄州 061000

肺癌屬于全球范圍內(nèi)最為常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率和病死率均較高，其中約85%左右的肺癌患者肺癌類型屬于非小細胞肺癌(NSCLC)，盡管手術(shù)治療方案是目前對NSCLC進行治療的最佳方案，但仍約有50%以上的NSCLC患者在確診后病情已發(fā)展至癌癥晚期，從而失去手術(shù)治愈機會[1]。此外，大部分NSCLC患者在手術(shù)后仍會出現(xiàn)復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。因此，積極尋找有效地監(jiān)測NSCLC患者病情進展的指標，有十分重要的意義[2]。沉默信息調(diào)節(jié)因子2(SIRT2)屬沉默信息調(diào)節(jié)因子家族成員，可乙?；揎椂喾N靶蛋白，還可通過叉頭轉(zhuǎn)錄因子家族對抗氧化應(yīng)激反應(yīng)和調(diào)節(jié)能量代謝[3]。胃泌素釋放肽前體(ProGRP)屬胃腸激素，可通過細胞間或自分泌相互作用對腫瘤轉(zhuǎn)移和生長進行調(diào)節(jié)[4]。CHCHD2為診斷NSCLC的生物學標志物，含有C端CHCH保守結(jié)構(gòu)域和N端線粒體定位序列。有研究指出，CHCHD2具有促進成纖維細胞遷移等生理功能，在人類細胞中CHCHD2可起到促進翻譯，改變細胞黏附和加速細胞遷移的作用[5]。但SIRT2、ProGRP、CHCHD2表達水平與NSCLC的關(guān)系報道較少，因此本研究擬選擇本院收治的NSCLC患者為研究對象，分析SIRT2、ProGRP、CHCHD2在NSCLC患者組織中的表達情況與臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1一般資料 經(jīng)倫理委員會審議并批準，選取本院2016年1月至2017年6月收治的NSCLC患者為研究對象，納入標準：(1)經(jīng)術(shù)后病理學檢查確診為NSCLC；(2)術(shù)前未行化療或放療干預(yù)；(3)保存完整腫瘤病灶組織標本和癌旁組織標本；(4)臨床和隨訪資料完整，無缺失。排除標準：(1)合并原發(fā)性器官功能障礙；(2)合并其他惡性腫瘤；(3)合并其他自身免疫性疾病。依照標準共入組97例，其中男53例，女44例；平均年齡(63.92±9.03)歲；低分化39例、中高分化58例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移34例、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移63例。

1.2方法 取癌旁組織和NSCLC腫瘤組織標本，采用免疫組織化學法對組織中SIRT2、ProGRP、CHCHD2的表達水平進行檢測，使用4%甲醛溶液固定標本，使用石蠟常規(guī)包埋并做4 μm厚連續(xù)切片，并采用免疫組織化學試劑盒對切片進行染色，枸櫞酸緩沖液煮沸進行修復(fù)，使用二氨基聯(lián)苯胺和蘇木素分別進行顯色和復(fù)染。由經(jīng)驗豐富的病理科醫(yī)師進行閱片和判定，在400倍高倍鏡下隨機選擇5個視野閱片，染色強度評分：無著色為0分，著色呈淡黃色為1分，著色呈棕黃色記2分，著色呈棕褐色為3分。陽性細胞評分：<5%為0分，5%～<26%為1分，26%～50%為2分，>50%為3分。染色強度評分和陽性細胞評分之和≥3分記為陽性，<3分記為陰性。

1.3統(tǒng)計學處理 采用SPSS20.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)處理分析，計數(shù)資料以例數(shù)和百分率表示，組間比較采用χ2檢驗；采用Spearman相關(guān)分析各指標與患者臨床病理特征的關(guān)系；隨訪患者3年，記錄患者生存及死亡情況，采用Cox風險比例回歸模型分析影響預(yù)后的因素。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1腫瘤組織和癌旁組織中各指標陽性表達情況 結(jié)果顯示，NSCLC患者腫瘤組織中SIRT2、ProGRP、CHCHD2陽性表達率均高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 腫瘤組織和癌旁組織中各指標陽性表達情況[n(%)]

2.2不同臨床特征患者腫瘤組織中各指標陽性表達情況 結(jié)果顯示，不同年齡和性別患者腫瘤組織中各指標表達比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，不同分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況和腫瘤最大徑患者腫瘤組織中SIRT2、ProGRP、CHCHD2陽性表達率比較，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表2。

表2 不同臨床特征患者腫瘤組織中各指標陽性表達情況[n(%)]

2.3患者臨床特征與腫瘤組織中各指標關(guān)系 結(jié)果顯示，NSCLC患者腫瘤組織中SIRT2、ProGRP、CHCHD2陽性表達與患者腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腫瘤最大徑均呈正相關(guān)(P<0.05)，見表3。

表3 患者臨床特征與腫瘤組織中各指標關(guān)系

2.4不同預(yù)后患者各指標檢測結(jié)果 結(jié)果顯示，隨訪3年死亡患者SIRT2、ProGRP、CHCHD2陽性表達率明顯高于存活患者，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表4。

表4 不同預(yù)后患者各指標檢測結(jié)果[n(%)]

2.5各指標與患者預(yù)后的關(guān)系 結(jié)果顯示，SIRT2、ProGRP、CHCHD2陽性表達是影響NSCLC患者預(yù)后的獨立危險因素(P<0.05)，見表5。

表5 各指標與患者預(yù)后質(zhì)量的關(guān)系

3 討 論

有學者指出，NSCLC的發(fā)生、發(fā)展是一系列復(fù)雜的病理變化過程，多種因素均參與該過程[6]。目前臨床中尚缺乏有效、特異度高的指標對患者的預(yù)后和病理特征進行分析，因此NSCLC的發(fā)生、發(fā)展機制仍有待進一步研究[7]。SIRT2是人類Ⅲ類組蛋白脫乙酰酶，位于19號染色體上，可通過去乙?；瘜δ[瘤相關(guān)基因進行調(diào)控，影響腫瘤相關(guān)基因的生物活性，進而調(diào)控其生物學功能[8]。有研究指出，組蛋白去甲基化酶基因啟動子區(qū)域與SIRT2結(jié)合后可有效抑制腫瘤生長和細胞增殖[9]。SIRT2還可抑制抗氧化蛋白活性，增加活性氧誘導(dǎo)乳腺癌細胞DNA損傷的敏感性，有效起到加速乳腺癌細胞凋亡的作用[10]。在多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中SIRT2均起到重要調(diào)控作用。

胃泌素釋放肽(GRP)最初分離自豬非竇部胃上皮細胞，屬鈴蟾素類似物，后在人胃腸神經(jīng)纖維、腦、胎兒肺神經(jīng)內(nèi)均檢測到GRP的表達[11]。有研究指出，多種腫瘤組織所分泌的GRP是儲存在細胞質(zhì)高爾基體內(nèi)，并在相關(guān)刺激的作用下向細胞外分泌和釋放，并可與細胞膜上GRP受體有效結(jié)合，具有促進腫瘤細胞增殖的作用[12]。但GRP半衰期短，檢測難度大，ProGRP是GRP的前體結(jié)構(gòu)，可反映GRP的水平，具有較高的臨床應(yīng)用價值[13]。CHCHD2是保守蛋白，人鼠CHCHD2蛋白有87%的保守序列，有研究指出，CHCHD2的C端CHCH結(jié)構(gòu)域定位于線粒體膜間隙或內(nèi)膜，但其生物學功能尚未完全揭示[14]。在肺鱗癌和肺腺癌病灶組織中CHCHD2陽性表達率異常升高，且在多種癌組織中CHCHD2基因陽性表達率均異常升高[15]。

本研究結(jié)果顯示，NSCLC患者腫瘤組織中SIRT2、ProGRP、CHCHD2陽性表達率高于癌旁組織，SIRT2、ProGRP、CHCHD2可作為腫瘤組織和癌旁組織鑒別的差異蛋白。本研究進一步分析SIRT2、ProGRP、CHCHD2與患者病理特征的關(guān)系，結(jié)果顯示，不同分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況和腫瘤最大徑患者腫瘤組織中SIRT2、ProGRP、CHCHD2陽性表達率比較，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，進一步采用Spearman相關(guān)性分析結(jié)果顯示，NSCLC患者腫瘤組織中SIRT2、ProGRP、CHCHD2陽性表達與患者腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腫瘤最大徑均呈正相關(guān)。結(jié)果提示，隨著SIRT2、ProGRP、CHCHD2陽性表達率升高，NSCLC患者病理特征可能出現(xiàn)惡化傾向，因而其可作為潛在的評估患者預(yù)后的重要指標。本研究進一步分析發(fā)現(xiàn)，隨訪3年死亡患者SIRT2、ProGRP、CHCHD2陽性表達率明顯高于存活患者，而Cox風險比例回歸模型分析結(jié)果顯示，SIRT2、ProGRP、CHCHD2陽性表達是影響NSCLC患者預(yù)后的獨立危險因素。分析認為，SIRT2、ProGRP、CHCHD2可通過加速患者病理特征惡化而引起NSCLC患者預(yù)后差，SIRT2、ProGRP、CHCHD2可作為評估患者預(yù)后質(zhì)量的獨立性因素。但本研究臨床樣本量較少，且所有患者均來自同一地區(qū)，可能存在一定的地域偏差，有待繼續(xù)追蹤分析。

綜上所述，NSCLC患者術(shù)后容易復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，積極監(jiān)測對于患者的病情進展意義重大，本研究發(fā)現(xiàn)，SIRT2、ProGRP、CHCHD2陽性表達與NSCLC腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腫瘤最大徑呈正相關(guān)，因此，臨床上通過檢測上述指標對患者及時進行干預(yù)，從而降低NSCLC患者術(shù)后復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的可能性。