曾梅，李金良，曾洪良，吳讓忠，徐樹培，袁定勝

（1.四川省木里縣動物疫病預(yù)防控制中心，四川 木里 615899；2.四川省畜牧科學(xué)研究院，四川 成都 610066）

豬支原體肺炎是由豬肺炎支原體引起的一種慢性接觸性呼吸道傳染病，又稱豬地方性流行肺炎及豬氣喘病等。豬支原體肺炎廣泛分布于世界各地，是較難凈化的豬病之一。該病可造成豬生長發(fā)育不良，導(dǎo)致繼發(fā)感染，引發(fā)豬呼吸道綜合征甚至死亡。其診斷如下。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)動物 某養(yǎng)殖場35日齡左右三元雜交保育豬133 頭。病豬喘氣、呼吸短促，呈腹式呼吸，發(fā)哮鳴音，初步診斷為豬支原體肺炎。

1.2 主要儀器與試劑 MyCycler PCR 儀，JYSPCT型水平電泳槽，JY600E型通用電泳儀電源，口腔拭子基因組DNA 提取試劑盒，病毒RNA 提取試劑盒，一步法RT-PCR 擴(kuò)增試劑盒（MMuLV），2×T5 Super PCR Mix，DL2000 DNA Marker。

2 試驗(yàn)方法

2.1 臟器剖解 無菌采取病豬氣管、支氣管、肺臟及肺門淋巴結(jié)，觀察其呼吸系統(tǒng)是否存在病理變化。

2.2 影像學(xué)檢查 病豬進(jìn)行X線檢查，取背胸位觀察影像的對稱性和特征影像，取側(cè)位觀察滲出。受檢豬先進(jìn)行背胸位X 線檢查，再轉(zhuǎn)動X 光機(jī)照射機(jī)頭進(jìn)行側(cè)位檢查。

2.3 PCR 病原鑒定 PCR 鑒定及測序根據(jù)DB32∕T1461-2009中豬肺炎支原體P36基因引物序列，合成兩條引物，引物序列為P1：5-TTACAGCGGGAAGACC-3，P2：5-CGGCGAGAAACTGGATA-3，預(yù)計擴(kuò)增片段長度約為427 bp。采集的病料參照報道的方法提取基因組DNA，進(jìn)行PCR鑒定和測序。

3 試驗(yàn)結(jié)果

隨機(jī)選取有典型咳嗽、氣喘癥狀的病豬進(jìn)行X 線檢查，發(fā)現(xiàn)肺野有不規(guī)則的云絮狀滲出陰影。觀察到其肺臟水腫，左右肺膈葉、心葉及右肺尖葉呈灰紅色，病理部位如鮮嫩肌肉，呈肉變樣。取病豬部分肺臟病料-20 ℃低溫保存，進(jìn)行豬支原體肺炎實(shí)時熒光定量PCR 檢測，結(jié)果顯示豬支原體肺炎為抗原陽性。

綜合以上檢查結(jié)果，確診該例為肺炎陽性。以整個豬群為單位，只要發(fā)現(xiàn)一頭病豬，就可認(rèn)為該豬群是病豬群，豬場為豬支原體肺炎陽性場。

4 小結(jié)

豬支原體肺炎多呈慢性或隱性感染。豬肺炎支原體在一般的培養(yǎng)基中很難生長，較難分離。X 線檢查具有重要的診斷作用，通?？蓪﹄[性感染、早期感染或疑似病豬做出迅速診斷。