張曉鳳

茂名市人民醫(yī)院，廣東 茂名525000

宮頸癌是女性常見的惡性腫瘤，好發(fā)于30～60 歲的中老年女性。陰道觸碰性流血、陰道排白色或血色液體及有腥臭味道是宮頸癌常見的臨床特征［1］。宮頸癌是較嚴(yán)重的惡性腫瘤之一，該病有一定潛伏期，大多數(shù)患者并未出現(xiàn)不適及其他癥狀，在日常的婦科檢查中難以發(fā)現(xiàn)或確認(rèn)。因此，宮頸癌的發(fā)現(xiàn)時(shí)間在治療該疾病中占有關(guān)鍵作用。宮頸癌的主要惡化原因是人類乳頭瘤病毒（human papilloma virus，HR-HPV）持續(xù)感染，致癌潛力依賴于E6/E7 癌基因的大量表達(dá)［2］。宮頸癌患者的HPV 感染原因多種多樣，最重要的感染途徑為性行為?？诜茉兴幍臑E用以及吸煙等都會(huì)引起惡變，同時(shí)也是高危型HPV 感染不斷擴(kuò)大的最重要的原因［3］。從HPV 感染到發(fā)生癌前病變，進(jìn)而發(fā)展到宮頸癌，一般需5～10 年，在這過(guò)程中可通過(guò)篩查，及早發(fā)現(xiàn)宮頸癌前病變，否則會(huì)錯(cuò)過(guò)最佳治療時(shí)機(jī)。高危型HPV中E6/E7 基因編碼的原癌蛋白是導(dǎo)致子宮頸上皮癌變的重要因子，對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)刺激最為重要，可引起宮頸上皮細(xì)胞的癌變，促進(jìn)其惡化［4］。本研究探討HPVE6/E7mRNA 檢測(cè)對(duì)宮頸病變患者的篩查價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018 年1 月至2018 年12 月于我院就診的宮頸病變患者168 例，年齡22～60 歲，平均年齡（36.48±6.78）歲，常見臨床癥狀均為接觸性出血、陰道異常出血、白帶異常及下腹隱痛等。

1.2 納入排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：①至少有3 年以上性生活史；②均符合宮頸病變的入選標(biāo)準(zhǔn)［5］；③資料齊全，意識(shí)正常，能夠配合治療；④簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①具有子宮或?qū)m頸切除術(shù)史的患者；②相關(guān)資料有缺失的患者；③調(diào)查期間無(wú)故退出者。

1.3 檢測(cè)方法

1.3.1 宮頸液基細(xì)胞學(xué)（TCT）檢查。樣本采集前3 天禁止性生活和藥品使用。采集時(shí)，擦除宮頸分泌物，將毛刷探入宮頸內(nèi)順時(shí)針旋轉(zhuǎn)4～6 周，充分刷取宮頸管和宮頸口鱗一柱狀上皮交界處的脫落細(xì)胞并取出，將刷頭浸入細(xì)胞處理試劑中，4℃保存。制備成細(xì)胞懸液，再制成細(xì)胞薄片，乙醇固定、染色，顯微鏡下觀察分析宮頸細(xì)胞形態(tài)。TCT 結(jié)果診斷采用TBS 分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。見表1。

表1 TBS 分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)

1.3.2 HPVE6/E7 mRNA 檢測(cè)。按1.3.1 方法取得宮頸脫落細(xì)胞，常規(guī)配置標(biāo)本緩沖液、陽(yáng)性對(duì)照液及處理后的細(xì)胞懸液，將三者混合制成反應(yīng)液，加入96 孔檢測(cè)板中，孵育時(shí)間為3.5h。嚴(yán)格按高危HPVE6/E7 mRNA 試劑盒使用說(shuō)明書進(jìn)行操作，最后放入自動(dòng)冷光儀讀板檢測(cè)結(jié)果，通過(guò)信號(hào)擴(kuò)增法進(jìn)行HPVE6/E7 mRNA 定量檢測(cè)。結(jié)果診斷標(biāo)準(zhǔn)：HPVE6/E7 mRNA 表達(dá)水平＞1，則診斷為HPVE6/E7 mRNA 呈陽(yáng)性；反之，則診斷為HPVE6/E7 mRNA 呈陰性。

1.4 診斷標(biāo)準(zhǔn) 對(duì)TCT 檢查和HPVE6/E7 mRNA 檢測(cè)陽(yáng)性者，在陰道鏡下取宮頸活組織病理學(xué)檢查，具體標(biāo)準(zhǔn)見表2。

表2 宮頸活組織病理學(xué)檢查診斷標(biāo)準(zhǔn)

1.5 觀察指標(biāo) 分析TCT 檢測(cè)、HPVE6/E7 mRNA 檢測(cè)與金標(biāo)準(zhǔn)（病理學(xué)檢查）的差異性；TCT 與HPVE6/E7 mRNA 檢測(cè)對(duì)宮頸病變患者診斷價(jià)值；HPVE6/E7 mRNA 檢測(cè)陽(yáng)性率與宮頸病變程度相關(guān)性。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS22.0 軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)分析，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HPVE6/E7mRNA、TCT 檢測(cè)結(jié)果與組織病理學(xué)檢測(cè)結(jié)果比較 HPVE6/E7mRNA 檢測(cè)陽(yáng)性率高于TCT檢測(cè)（P＜0.05）。見表3。

2.2 TCT 與HPVE6/E7mRNA 檢測(cè)對(duì)宮頸病變患者診斷價(jià)值分析 TCT 檢測(cè)診斷的靈敏度（73.18%）、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值（75.15%）、陰性預(yù)測(cè)值（70.28%）低于HPVE6/E7mRNA 檢測(cè)診斷為靈敏度（81.26%）、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值（79.84%）、陰性預(yù)測(cè)值（76.47%），TCT 檢測(cè)診斷的特異性（73.52%）高于HPVE6/E7mRNA 檢測(cè)診斷特異性（64.08%），但組間無(wú)顯著差異（P＞0.05）。見表4。

表3 HPVE6/E7mRNA、TCT 檢測(cè)結(jié)果與組織病理學(xué)檢測(cè)結(jié)果比較［例（%）］

表4 TCT 與HPVE6/E7mRNA 檢測(cè)的診斷價(jià)值比較（%）

2.3 HPVE6/E7mRNA 檢測(cè)陽(yáng)性率與宮頸病變程度相關(guān)性 HPVE6/E7mRNA 檢測(cè)陽(yáng)性率與宮頸病變有顯著關(guān)系（r=0.581，P=0.005），即HPVE6/E7 檢測(cè)陽(yáng)性率越高宮頸病變?cè)絿?yán)重，其中，宮頸癌患者的HPVE6/E7mRNA 檢測(cè)陽(yáng)性率為百分之百。見圖1。

圖1 HPVE6/E7mRNA 檢測(cè)陽(yáng)性率與宮頸病變程度相關(guān)性

3 討論

宮頸癌是婦科惡性腫瘤中致病源十分明確的疾病之一，HPV16 感染是宮頸癌最常見的HR-HPV 類型，HPV18 感染率居第二位［6］。宮頸癌嚴(yán)重影響者女性的身心健康，此病在患者體內(nèi)潛伏期較長(zhǎng)，未出現(xiàn)不適或其他癥狀的患者半數(shù)以上，只有進(jìn)行宮頸癌篩查才可能被發(fā)現(xiàn)或確診。因此，宮頸癌篩查至關(guān)重要。

本研究顯示，HPVE6/E7 mRNA 檢測(cè)與TCT 檢測(cè)陽(yáng)性數(shù)比較差異顯著，HPVE6/E7 mRNA 檢測(cè)陽(yáng)性率與宮頸病變有顯著關(guān)系，即HPVE6/E7 mRNA 陽(yáng)性率越高宮頸病變?cè)絿?yán)重，其中，宮頸癌患者的HPVE6/E7 mRN 陽(yáng)性率為百分之百，表明HPVE6/E7 mRNA 陽(yáng)性率隨著宮頸病變級(jí)別進(jìn)展呈逐步上升趨勢(shì)，其高表達(dá)可促進(jìn)宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展，是宮頸癌進(jìn)展預(yù)測(cè)的指標(biāo)。高危型HPVE6/E7 基因編碼的原癌蛋白是導(dǎo)致子宮頸上皮癌變的重要因子，E6 蛋白通過(guò)E6-AP 能特異性結(jié)合p53 蛋白形成復(fù)合物，促使p53 蛋白快速降解，導(dǎo)致細(xì)胞周期失控，其效應(yīng)等同于p53 突變［7］。E7蛋白和pRb 有高親和性，使E2F 和pRb 復(fù)合物解離，G1 期進(jìn)入S期所需基因如c-myc、DNA 聚合酶a 等得以轉(zhuǎn)錄，使細(xì)胞周期失控而發(fā)生永生化，發(fā)生癌變。當(dāng)機(jī)體發(fā)生HPV 感染時(shí)，一般情況下機(jī)體具有自我防御功能可將HPV 清除掉，其中部分患者由于身體原因不能將HPV 清除，導(dǎo)致HPV 在體內(nèi)處于持久性高水平狀態(tài)，病毒基因與人類基因整合，導(dǎo)致HPVE6/E7 復(fù)制轉(zhuǎn)錄活躍而致癌變［8］。有文獻(xiàn)顯示，HPVE6/E7 mRNA 高表達(dá)是宮頸癌重度惡化的主要原因，與宮頸癌的分期、分化等發(fā)展過(guò)程呈正相關(guān)［9］。E6/E7 mRNA 是HPV 基因表達(dá)的直接產(chǎn)物，是宮頸病變開始和進(jìn)展的必要條件；E6/E7 mRNA 檢測(cè)是提示宮頸致癌基因的活動(dòng)度，反映宮頸癌變的風(fēng)險(xiǎn)度。報(bào)道表明，HPVE6/E7 mRNA是宮頸細(xì)胞癌變的重要因素，故檢測(cè)HPVE6/E7 片段的表達(dá)較檢測(cè)病毒更精準(zhǔn)、更直接［10］。研究顯示，HPVE6/E7 mRNA 檢測(cè)診斷的靈敏度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值均高于TCT，特異性與TCT 差異不大［11］。表明HPVE6/E7 mRNA 表達(dá)能很好地反映了宮頸病變的嚴(yán)重程度，作為宮頸癌篩查具有較高的診斷價(jià)值。對(duì)于宮頸癌而言，早期控制與預(yù)防最好的方法就是篩查。若在前驅(qū)病變階段發(fā)現(xiàn)并采取適當(dāng)?shù)闹委煟渲委熜Ч黠@優(yōu)于中、晚期。由此可見，廣泛采用HPVE6/E7 mRNA 檢測(cè)，及早對(duì)患者病情進(jìn)行確診并及時(shí)治療，對(duì)該病的防治具有十分重要的意義［12］。研究顯示，TCT與HPVE6/E7 mRNA 檢測(cè)均具有明顯效果，能夠較準(zhǔn)確地對(duì)宮頸病變患者做出分型，有利于后續(xù)的進(jìn)一步診斷和治療，但兩種診斷方法的特異性、靈敏度存在一定差異，兩種檢測(cè)方法各有特點(diǎn)，后續(xù)將研究考慮兩種檢測(cè)方法聯(lián)合對(duì)宮頸病變的患者實(shí)行進(jìn)一步檢測(cè)［13］。

綜上所述，HPVE6/E7 mRNA 檢測(cè)對(duì)宮頸病變患者的篩查具有重大意義，能夠通過(guò)HPVE6/E7 mRNA陽(yáng)性表達(dá)來(lái)判斷宮頸病變嚴(yán)重程度，進(jìn)而采取相應(yīng)治療措施，更好地改善預(yù)后，值得臨床推廣應(yīng)用。