（河南省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，河南鄭州 471000）

實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力比對(duì)是農(nóng)業(yè)農(nóng)村部加強(qiáng)獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室管理的主要抓手，也是科學(xué)評(píng)價(jià)和提高實(shí)驗(yàn)室管理水平和檢測(cè)能力的重要手段[1]。為進(jìn)一步加強(qiáng)河南省獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室管理，提高全省獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)診斷能力，建立省、市、縣三級(jí)動(dòng)物疫情監(jiān)測(cè)預(yù)警機(jī)制和風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估模型，實(shí)施定點(diǎn)、定量、跟蹤監(jiān)測(cè)模式[2]，河南省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心（以下稱省中心）2018—2020 年均組織開(kāi)展了全省獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力比對(duì)。全省共有18 個(gè)省轄市、10 個(gè)省直管縣/市和117 個(gè)縣/區(qū)級(jí)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室參加，均在規(guī)定時(shí)間內(nèi)完成了比對(duì)盲樣領(lǐng)取、實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)、報(bào)告出具和結(jié)果上報(bào)。比對(duì)結(jié)果客觀地反映了河南省獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)水平和存在的問(wèn)題，為進(jìn)一步完善獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室管理體系，健全動(dòng)物疫情監(jiān)測(cè)預(yù)警機(jī)制和風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估模型提供政策建議。

1 材料與方法

1.1 比對(duì)項(xiàng)目

按照河南省獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力比對(duì)方案的有關(guān)要求，2018—2020 年涉及的比對(duì)項(xiàng)目共有8 個(gè)，分別是禽流感病毒（AIV）抗體檢測(cè)、H7亞型AIV 抗體檢測(cè)（HI 試驗(yàn)）、布魯氏菌抗體檢測(cè)（試管凝集試驗(yàn)）、豬偽狂犬病病毒（PRV）gB抗體檢測(cè)（ELISA）、A 型口蹄疫病毒（FMDV）抗體檢測(cè)（液相阻斷ELISA）、FMDV 核酸檢測(cè)（熒光RT-PCR）、H7 亞型AIV 核酸檢測(cè)（熒光RTPCR）、塞內(nèi)卡病毒（SVA）核酸檢測(cè)（熒光RTPCR）、非洲豬瘟病毒（ASFV）核酸檢測(cè)（熒光PCR）。

1.2 比對(duì)方法、標(biāo)準(zhǔn)和試劑

2018—2020 年實(shí)驗(yàn)室能力比對(duì)試驗(yàn)涉及項(xiàng)目雖略有調(diào)整，但均采用國(guó)家獸醫(yī)參考實(shí)驗(yàn)室或?qū)I(yè)實(shí)驗(yàn)室推薦的方法，比對(duì)試劑為自行準(zhǔn)備（表1）。

表1 實(shí)驗(yàn)室比對(duì)項(xiàng)目、方法和標(biāo)準(zhǔn)

1.3 比對(duì)樣品

比對(duì)樣品由省中心實(shí)驗(yàn)室制備、驗(yàn)證、編號(hào)和分裝，每個(gè)檢測(cè)項(xiàng)目設(shè)5 份盲樣，各參考值樣品數(shù)目不定。

1.3.1 H7 亞型AIV 抗體檢測(cè)樣品 由哈爾濱維科生物技術(shù)有限公司購(gòu)入該項(xiàng)目標(biāo)準(zhǔn)陰性血清、陽(yáng)性血清，稀釋得到雞血清樣品5 份，標(biāo)定參考值分別為6log2、3log2、0log2。

1.3.2 布魯氏菌抗體檢測(cè)樣品 由中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所購(gòu)入該項(xiàng)目標(biāo)準(zhǔn)陰性血清、陽(yáng)性血清，稀釋得到牛血清樣品5 份，標(biāo)定參考值分別為強(qiáng)陽(yáng)性（1:400）、陽(yáng)性（1:100）、陰性（＜1:50）。

1.3.3 PRV-gB 抗體檢測(cè)樣品 由IDEXX 公司購(gòu)入該項(xiàng)目標(biāo)準(zhǔn)陰性血清、陽(yáng)性血清，稀釋得到豬血清樣品5 份，標(biāo)定參考值分別為強(qiáng)陽(yáng)性、弱陽(yáng)性、陰性。

1.3.4 A 型FMDV 抗體檢測(cè)樣品 由中國(guó)蘭州獸醫(yī)研究所購(gòu)入該項(xiàng)目陰性血清、陽(yáng)性血清，稀釋得到血清樣品5 份，標(biāo)定參考值分別為強(qiáng)陽(yáng)性（1:720）、陽(yáng)性（1:360）、陰性（＜1:16）。

1.3.5 FMDV 核酸檢測(cè)樣品 由中國(guó)蘭州獸醫(yī)研究所購(gòu)入抗原稀釋得到樣品5 份，標(biāo)定參考值分別為陽(yáng)性、陰性。

1.3.6 H7 亞型AIV 核酸檢測(cè)樣品 由哈爾濱維科生物技術(shù)有限公司購(gòu)入該項(xiàng)目標(biāo)準(zhǔn)抗原，稀釋得到樣品5 份，標(biāo)定參考值分別為陽(yáng)性、陰性。

1.3.7 SVA 核酸檢測(cè)樣品 由SVA 滅活稀釋得到樣品5 份，標(biāo)定參考值分別為陽(yáng)性、陰性。

1.3.8 ASFV 核酸檢測(cè)樣品 由中國(guó)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心購(gòu)入質(zhì)粒稀釋得到樣品5 份，標(biāo)定參考值分別為陽(yáng)性、陰性。

1.4 比對(duì)樣品的保存和傳遞

為保證比對(duì)樣品良好的生物學(xué)活性，樣品均存放于-20 ℃以下的冰柜中。分發(fā)時(shí)將樣品和試劑放入帶有冰袋的泡沫箱中保存，由參加比對(duì)的省轄市實(shí)驗(yàn)室派專人在規(guī)定時(shí)間內(nèi)統(tǒng)一領(lǐng)取，并在12 h內(nèi)送達(dá)參加比對(duì)的實(shí)驗(yàn)室。

1.5 評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)

相關(guān)比對(duì)項(xiàng)目評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)表2。

2 比對(duì)結(jié)果

2.1 省轄市獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室

2018—2020 年18 個(gè)省轄市獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室參賽率均為100%，2018 年所有項(xiàng)目平均正確率97.30%，12 個(gè)實(shí)驗(yàn)室所有比對(duì)項(xiàng)目檢測(cè)結(jié)果全部正確，3 個(gè)比對(duì)項(xiàng)次結(jié)果正確率低于60%；2019年所有項(xiàng)目平均正確率為96.98%，12 個(gè)實(shí)驗(yàn)室所有比對(duì)項(xiàng)目檢測(cè)結(jié)果全部正確，1 個(gè)比對(duì)項(xiàng)次結(jié)果正確率低于60%；2020 年所有項(xiàng)目平均正確率為95.28%，7 個(gè)實(shí)驗(yàn)室所有比對(duì)項(xiàng)目檢測(cè)結(jié)果全部正確，1 個(gè)比對(duì)項(xiàng)次結(jié)果正確率低于60%（表3）。

2.2 省直管縣/市獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室

2018—2020 年10 個(gè)省直管縣/市獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室參賽率均為100%，2018 年所有項(xiàng)目平均正確率為93.05%，3 個(gè)實(shí)驗(yàn)室所有比對(duì)項(xiàng)目檢測(cè)結(jié)果全部正確，2 個(gè)比對(duì)項(xiàng)次結(jié)果正確率低于60%；2019年所有項(xiàng)目平均正確率為95.37%，3 個(gè)實(shí)驗(yàn)室所有比對(duì)項(xiàng)目檢測(cè)結(jié)果全部正確，1 個(gè)比對(duì)項(xiàng)目結(jié)次正確率低于60%；2020 年所有項(xiàng)目平均正確率為84.57%，1 個(gè)實(shí)驗(yàn)室所有比對(duì)項(xiàng)目檢測(cè)結(jié)果全部正確，6 個(gè)比對(duì)項(xiàng)次結(jié)果正確率低于60%（表3）。2.3 縣/區(qū)級(jí)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室

2018—2020 年117 個(gè)縣/區(qū)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室參賽率分別為100%、100%、95.87%，2018 年所有項(xiàng)目平均正確率為91.51%，50 個(gè)實(shí)驗(yàn)室所有比對(duì)項(xiàng)目檢測(cè)結(jié)果全部正確，38 個(gè)比對(duì)項(xiàng)次結(jié)果正確率低于60%；2019 年所有項(xiàng)目平均正確率為91.26%，77 個(gè)實(shí)驗(yàn)室所有比對(duì)項(xiàng)目檢測(cè)結(jié)果全部正確，27 個(gè)比對(duì)項(xiàng)次結(jié)果正確率低于60%；2020年所有項(xiàng)目平均正確率為88.54%，17 個(gè)實(shí)驗(yàn)室所有比對(duì)項(xiàng)目檢測(cè)結(jié)果全部正確，58 個(gè)比對(duì)項(xiàng)次結(jié)果正確率低于60%（表3）。

表2 比對(duì)樣品項(xiàng)目判定標(biāo)準(zhǔn)

表3 2018—2020 年各省轄市、直管縣/市、縣/區(qū)級(jí)實(shí)驗(yàn)室比對(duì)結(jié)果

3 討論

3.1 從總體比對(duì)結(jié)果來(lái)看

省轄市獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室2018—2020 年所有項(xiàng)目比對(duì)結(jié)果正確率超過(guò)95%，省直管縣/市和縣/區(qū)級(jí)實(shí)驗(yàn)室2018—2019 年所有項(xiàng)目比對(duì)結(jié)果正確率超過(guò)90%，2020 年開(kāi)展加大病原學(xué)比對(duì)項(xiàng)目后，所有項(xiàng)目比對(duì)結(jié)果正確率超過(guò)80%。這表明全省大部分獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室能夠?yàn)楹幽鲜?dòng)物疫情風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估及動(dòng)物疫病預(yù)防控制體系提供有力支撐。同時(shí)也反映了市縣兩級(jí)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)水平存在一定差距，尤其是在直管縣/市和各縣/區(qū)級(jí)廣泛開(kāi)展病原學(xué)檢測(cè)項(xiàng)目比對(duì)后，差距更為明顯，部分實(shí)驗(yàn)室尤其是縣/區(qū)級(jí)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力有待提高。

3.2 從不同項(xiàng)目檢測(cè)結(jié)果來(lái)看

就省轄市、省直管縣/市、縣/區(qū)級(jí)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室各項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果的穩(wěn)定性而言，定性檢測(cè)結(jié)果高于定量檢測(cè)結(jié)果，普通ELISA、固相ELISA 結(jié)果高于液相阻斷ELISA 結(jié)果，表明全省獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員需進(jìn)一步提升操作水平，同時(shí)要加強(qiáng)儀器設(shè)備的更新和維護(hù)，確保結(jié)果的準(zhǔn)確性[3]。

3.3 從參加比對(duì)項(xiàng)目設(shè)置來(lái)看

參賽項(xiàng)目按照國(guó)家獸醫(yī)工作要點(diǎn)要求，緊跟當(dāng)前疫情形勢(shì)，加大病原學(xué)項(xiàng)目的比對(duì)力度。2018年省轄市和5 個(gè)（50%）省直管縣/市獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室參加病原學(xué)比對(duì)項(xiàng)目；2019 年省轄市、9 個(gè)（90%）省直管縣/市和67 個(gè)（57.26%）縣/區(qū)級(jí)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室參加病原學(xué)比對(duì)項(xiàng)目，但縣區(qū)級(jí)僅比對(duì)一個(gè)病原學(xué)項(xiàng)目；2020 年全部省轄市、直管縣市和96 個(gè)（82.05%）縣/區(qū)級(jí)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室參加所有病原學(xué)比對(duì)項(xiàng)目。加上后續(xù)繼續(xù)開(kāi)展的非洲豬瘟項(xiàng)目比對(duì)，目前全省共有18 個(gè)省轄市、10 個(gè)省直管縣/市和109 個(gè)縣區(qū)級(jí)實(shí)驗(yàn)室具備非洲豬瘟檢測(cè)資質(zhì)，其余縣/區(qū)級(jí)實(shí)驗(yàn)室也在有序籌備中。但各級(jí)要意識(shí)到具備病原學(xué)檢測(cè)能力和實(shí)際工作需求的差距，積極提升自身檢測(cè)能力和實(shí)驗(yàn)室管理水平[4]。

3.4 從檢測(cè)試劑來(lái)看

比對(duì)試驗(yàn)所用檢測(cè)試劑從開(kāi)始的全部由省中心派發(fā)到部分自行準(zhǔn)備再到現(xiàn)在的全部自行準(zhǔn)備。雖然試劑完全一致化會(huì)減少試劑盒廠家和批次之間差異造成的誤差，但逐步實(shí)行自行準(zhǔn)備試劑以來(lái)，全省比對(duì)結(jié)果并無(wú)明顯差異，表明河南多數(shù)實(shí)驗(yàn)室日常使用的試劑穩(wěn)定性較好，能滿足動(dòng)物疫病檢測(cè)的需要。個(gè)別實(shí)驗(yàn)室個(gè)別項(xiàng)目存在較大誤差的原因可能與其試驗(yàn)操作人員技術(shù)不熟練、理論知識(shí)不足或?qū)嶒?yàn)室儀器配置不到位有關(guān)[5]。

4 小結(jié)

本次比對(duì)試驗(yàn)項(xiàng)目涉及禽流感、口蹄疫、非洲豬瘟等重大動(dòng)物疫病及布病等人獸共患??；比對(duì)方法涉及HI 試驗(yàn)、試管凝集試驗(yàn)、ELISA、液相阻斷ELISA、熒光PCR、熒光RT-PCR 等，河南省各級(jí)實(shí)驗(yàn)室均展現(xiàn)了較高水平，但也暴露了個(gè)別檢測(cè)項(xiàng)目的不足。建議以此為契機(jī)，深入分析查找問(wèn)題，研究制定改進(jìn)措施，強(qiáng)化實(shí)驗(yàn)室日常監(jiān)管，完善實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系和生物安全管理體系建設(shè)，加強(qiáng)檢測(cè)設(shè)備的補(bǔ)充更新，加強(qiáng)對(duì)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員的專業(yè)培訓(xùn)，不斷提升其專業(yè)水平[6]。