李冀，宋一嬋，高彥宇

(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040)

冠心病作為發(fā)病率、死亡率極高的心臟疾病，發(fā)作時(shí)引起的心肌缺血、缺氧及壞死等病理改變可造成極大危害，盡快恢復(fù)冠脈再灌注、控制梗死面積，保護(hù)心臟功能是基本治療手段。然而，缺血心肌恢復(fù)血流后可能伴隨心肌代謝紊亂、細(xì)胞受損死亡等不可逆性改變，極易導(dǎo)致不良后果如惡性心律失常、血液無(wú)復(fù)流、心肌頓抑、微循環(huán)障礙等，進(jìn)一步加重心肌損傷，此種現(xiàn)象被稱為心肌缺血再灌注損傷(Myocardial Ischemia and Reperfusion Injury，MIRI)[1]，迄今為止發(fā)現(xiàn)該病發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，與鈣超載、自噬、細(xì)胞凋亡、氧自由基爆發(fā)、炎性反應(yīng)等眾多途徑及相互協(xié)同機(jī)制有關(guān)[2]。線粒體作為真核細(xì)胞中的重要細(xì)胞器，不僅為心肌細(xì)胞提供大量能源，更參與調(diào)控細(xì)胞凋亡和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等重要環(huán)節(jié)，在缺血缺氧環(huán)境中，線粒體會(huì)選擇性自噬降解，清除受損堆積線粒體以維持心肌細(xì)胞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)，進(jìn)而影響缺血心肌的功能。線粒體自噬具有雙重性，準(zhǔn)確有效地干預(yù)該水平對(duì)改善MIRI情況有著重要臨床意義。近年來(lái)在防治心血管疾病方面中醫(yī)藥發(fā)揮了多靶點(diǎn)、多途徑的治療優(yōu)勢(shì)，逐步受到人們重視，關(guān)于中藥單體、組分、復(fù)方及其他中醫(yī)療法發(fā)揮療效的研究也在不斷深入。線粒體自噬及其相關(guān)通路作為潛在有力干預(yù)靶點(diǎn)，可能啟發(fā)中醫(yī)藥在分子層面發(fā)揮作用的新機(jī)制。本文將探討線粒體自噬在MIRI過(guò)程中的作用以及將近年來(lái)中醫(yī)藥在此方面的研究作一綜述。

1 線粒體自噬與相關(guān)經(jīng)典通路

自噬是通過(guò)溶酶體將細(xì)胞內(nèi)受損、缺陷、衰老的蛋白和細(xì)胞器吞噬包裹，并加以降解代謝的生理過(guò)程[3]，是細(xì)胞在營(yíng)養(yǎng)缺乏或外界刺激時(shí)所發(fā)生的適應(yīng)性反應(yīng)，以達(dá)到維持細(xì)胞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)的目的。線粒體自噬是指在生理或病理刺激下，線粒體發(fā)生去極化損傷，細(xì)胞通過(guò)自噬機(jī)制對(duì)受損或功能失調(diào)的線粒體進(jìn)行選擇性降解清除，從而保證線粒體的數(shù)量、質(zhì)量和基本功能[4]。與細(xì)胞其他自噬過(guò)程不同的是，線粒體自噬在蛋白分子調(diào)控網(wǎng)絡(luò)上有著高度的選擇性。線粒體作為真核細(xì)胞的重要組成部分，對(duì)缺血缺氧等環(huán)境較為敏感，其自噬功能失調(diào)可能導(dǎo)致很多病理過(guò)程，包括心肌細(xì)胞受損和死亡，及時(shí)清除損傷或積累的線粒體對(duì)維持心肌細(xì)胞穩(wěn)態(tài)極為重要。目前在哺乳動(dòng)物模型中，較為明確的線粒體自噬水平關(guān)鍵通路為線粒體外膜PTEN誘導(dǎo)的蛋白激酶1(PTEN-induced putative kinase1，PINK1)/E3泛素-蛋白連接酶活性帕金森病蛋白2(parkinson protein2，Parkin)通路，以及受體介導(dǎo)的線粒體自噬通路：B淋巴細(xì)胞瘤-2結(jié)合腺病毒E1B互相作用蛋白3(Bc1-2 and adenovirus E1B interacting protein，BNIP3)/線粒體NIP3膜蛋白(Nip3-like protein X，NIX)、線粒體外膜結(jié)構(gòu)域包含蛋白FUN141(FUN14 domain-containing1，F(xiàn)UNDC1)等[5]。多種蛋白分子形成共同調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，在不同的生理病理過(guò)程中，被激活的信號(hào)通路亦有不同。

1.1 PINK1/Parkin經(jīng)典通路

目前研究表明PINK1/Parkin通路是線粒體自噬最常見(jiàn)、最主要途徑[6]。PINK1作為一種廣泛存在于細(xì)胞質(zhì)中的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，在正常狀態(tài)下，可在膜外轉(zhuǎn)位酶介導(dǎo)下進(jìn)入線粒體與內(nèi)膜結(jié)合，隨之被蛋白酶主動(dòng)剪切并降解。在MIRI等病理?xiàng)l件下，線粒體膜電位喪失，PINK1進(jìn)入被抑制，累積在去極化的線粒體外膜。此時(shí)PINK1發(fā)生自磷酸化，招募細(xì)胞漿中的Parkin并將其磷酸化激活，Parkin具有E3-泛素連接酶活性，可將泛素分子連接到底物蛋白，從而多聚泛素化線粒體外膜受體蛋白，包括線粒體銜接蛋白Miro、線粒體融合蛋白MFN1/2、水通道蛋白VDAC1等，這些泛素化蛋白作為開(kāi)始進(jìn)行自噬降解的信號(hào)，被自噬系統(tǒng)接頭蛋白p62、OPTN、Beclin1、NDP52等識(shí)別后[7-8]，鎖定到自噬體隔離膜上，此時(shí)微管蛋白1輕鏈3(LC3)銜接子接受募集來(lái)到受損線粒體附近，與上述自噬接頭蛋白結(jié)合形成自噬體，吞噬并運(yùn)送被標(biāo)記的線粒體到自噬泡，從而開(kāi)啟線粒體自噬過(guò)程[9]。PINK1與Parkin位于同一條通路的上下游，協(xié)同介導(dǎo)了線粒體自噬。此外，研究表明PINK1與Parkin還可通過(guò)調(diào)控線粒體分裂與融合、控制線粒體運(yùn)動(dòng)來(lái)清理受損的線粒體，Strapazon等[10]發(fā)現(xiàn)Parkin與吞噬細(xì)胞的啟動(dòng)子相互作用，具有獨(dú)立的泛素連接酶功能，或可直接調(diào)控啟動(dòng)線粒體自噬。由此可知，PINK1/Parkin途徑在線粒體自噬中所發(fā)揮的作用至關(guān)重要。

1.2 受體介導(dǎo)的線粒體自噬通路

在哺乳動(dòng)物細(xì)胞的線粒體外膜上存在某些標(biāo)記蛋白，可直接作為線粒體自噬受體發(fā)揮作用，無(wú)需通過(guò)泛素化和銜接底物即可激活線粒體自噬過(guò)程，其經(jīng)典模式是與相關(guān)微管蛋白1輕鏈3(LC3)發(fā)生結(jié)合，從而介導(dǎo)啟動(dòng)線粒體自噬。此類受體包括BNIP3/NIX、FUNDC1、BCL2L13、NLRX1、PHB2等。其中BNIP3、NIX屬于B淋巴細(xì)胞瘤-2(Bcl-2)家族同源蛋白，是含有非典型BH3結(jié)構(gòu)域和LIR基序的單通道跨膜蛋白，生理情況下呈低表達(dá)狀態(tài)，當(dāng)線粒體發(fā)生去極化時(shí)，BNIP3、NIX可將自身攜帶的LIR序列絲氨酸磷酸化[11]，促進(jìn)連接自噬相關(guān)因子LC3，形成LIR-LC3結(jié)構(gòu)域，直接結(jié)合將線粒體導(dǎo)向自噬體完成清除。二者在功能上存在疊加和冗余，但具體表現(xiàn)不完全相同。NIX特定介導(dǎo)紅細(xì)胞譜系成熟時(shí)以及干細(xì)胞分化過(guò)程中的線粒體自噬[12]，以保證兩種細(xì)胞正常生理活動(dòng)，NIX自身也可以作為受體蛋白結(jié)合Atg8蛋白家族誘導(dǎo)發(fā)生線粒體自噬。BNIP3則可通過(guò)抑制PINK1分解來(lái)使哺乳動(dòng)物細(xì)胞線粒體的自噬水平調(diào)高，在缺血缺氧條件下，BNIP3蛋白含量明顯增多[13]，對(duì)線粒體自噬調(diào)控更為顯著。細(xì)胞受到外界不良刺激時(shí)，BNIP3可誘導(dǎo)過(guò)度線粒體自噬，而同等條件下NIX則不能[14]。FUNDC1是一種三次跨膜蛋白，含跨膜結(jié)構(gòu)域和N末端的LIR基序，主要介導(dǎo)缺氧、低氧環(huán)境以及線粒體膜電勢(shì)降低條件下的線粒體自噬，目前對(duì)以該自噬受體介導(dǎo)的線粒體自噬機(jī)制尚未完全闡明。有研究表明在生理狀態(tài)下，F(xiàn)UNDC1部分被磷酸化而不能與LC3發(fā)生結(jié)合，而當(dāng)細(xì)胞缺氧時(shí)，F(xiàn)UNDC1被去絲氨酸磷酸化，其N端的LIR序列直接與LC3發(fā)生結(jié)合，從而啟動(dòng)線粒體的特異清除[15]。此外，研究人員發(fā)現(xiàn)FUNDC1可特定地與視神經(jīng)萎縮癥蛋白(OPA1)和線粒體動(dòng)力相關(guān)蛋白-1(DRP1)結(jié)合來(lái)調(diào)節(jié)線粒體分裂過(guò)程，也表明FUNDC1參與調(diào)控線粒體自噬[16]。

除上述幾種較為常見(jiàn)的受體介導(dǎo)的線粒體自噬途徑之外，目前還有新發(fā)現(xiàn)的線粒體自噬受體蛋白如Bcl-2類蛋白13(BCL2L13)，是Atg32家族功能性同源蛋白，對(duì)線粒體碎片化式損傷可通過(guò)招募LC3形成自噬小體的方式將其特異性清除[17]；NLRX1蛋白是NOD樣NLR家族成員，可通過(guò)寡聚化形成LH3-LC3結(jié)構(gòu)域來(lái)介導(dǎo)李斯特菌感染誘導(dǎo)的線粒體自噬[18]；線粒體內(nèi)膜蛋白Prohibitin2(PHB2)會(huì)在線粒體膜電位喪失后被暴露出來(lái)，其上含有的LIR基序會(huì)與LC3相互結(jié)合從而介導(dǎo)線粒體的清除[19]。這些受體蛋白介導(dǎo)線粒體自噬方式較為相似，均含有LC3結(jié)合區(qū)域—LIR序列，但具體機(jī)制尚不十分清楚，有待進(jìn)一步研究。

2 線粒體自噬對(duì)MIRI的影響

心肌缺血后引起的細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)、電生理、能量代謝等方面的病理變化在血流恢復(fù)再灌注時(shí)表現(xiàn)的更為嚴(yán)重，可能導(dǎo)致一系列嚴(yán)重心功能失常甚至猝死情況的發(fā)生。MIRI的發(fā)生發(fā)展是涉及多種分子、細(xì)胞機(jī)制的復(fù)雜病理過(guò)程。在分子層面，心肌細(xì)胞對(duì)能量的需求較高，線粒體則是真核細(xì)胞制造能量最重要的場(chǎng)所，缺血條件下線粒體將發(fā)生結(jié)構(gòu)破壞或功能障礙，出現(xiàn)氧自由基生成失衡、鈣離子超載、mPTP過(guò)度開(kāi)放、物質(zhì)代謝異常等多種損傷性改變[20]，這些改變相互疊加影響，使心肌細(xì)胞的活性隨之減弱，甚至誘發(fā)啟動(dòng)其他機(jī)制如細(xì)胞凋亡、細(xì)胞自噬、炎癥反應(yīng)，氧化應(yīng)激等，造成心肌損傷[21]，從而參與MIRI的發(fā)生。在此類情況下，線粒體適度提高自噬能力將有利于更新心肌細(xì)胞主要成分，恢復(fù)細(xì)胞原有生理功能，維持再灌注后心肌細(xì)胞活性[22]，同時(shí)緩解心肌缺血期的能量危機(jī)，對(duì)缺血再灌注損傷的預(yù)后產(chǎn)生積極作用。有關(guān)MIRI的實(shí)驗(yàn)研究表明，在心肌缺血階段線粒體自噬水平明顯提高，而再灌注階段線粒體自噬則進(jìn)一步激活[23]；王艷等[24]對(duì)大鼠進(jìn)行心肌缺血預(yù)處理后，發(fā)現(xiàn)MIRI發(fā)生24 h內(nèi)，線粒體膜上Parkin大量募集，p62蛋白表達(dá)增強(qiáng)，線粒體自噬增強(qiáng)且持續(xù)至48 h，促進(jìn)了心肌細(xì)胞存活；研究顯示在缺血缺氧環(huán)境下，血小板中FUNDC1介導(dǎo)的線粒體自噬水平將提升，從而有效減少M(fèi)IRI造成的心肌細(xì)胞損傷[25]；Parkin敲除型動(dòng)物在敗血癥導(dǎo)致的心肌缺血過(guò)程中，線粒體自噬水平下降，隨之出現(xiàn)心肌細(xì)胞凋亡率增高，心肌梗塞面積增大，存活率明顯降低現(xiàn)象[26]；有研究者發(fā)現(xiàn)線粒體自噬主要介導(dǎo)蛋白PINK1、Parkin的缺乏在一定程度上增強(qiáng)心肌細(xì)胞對(duì)MIRI的敏感性[27]；線粒體自噬標(biāo)記物BNIP3、NIX在心肌細(xì)胞體外缺血應(yīng)激反應(yīng)中表達(dá)增加，引起線粒體膜通透性改變及溶酶體消耗增加，從而促進(jìn)線粒體自噬啟動(dòng)[28]。

然而需要注意的是，包括線粒體自噬在內(nèi)的所有自噬行為都具有雙重性。當(dāng)線粒體受損時(shí)適度提高其自噬水平可維持有效的細(xì)胞穩(wěn)態(tài)，作為一種防御機(jī)制對(duì)細(xì)胞起到保護(hù)作用，而過(guò)度激活導(dǎo)致的持續(xù)高水平自噬可能會(huì)引起線粒體過(guò)度清除，使線粒體循環(huán)障礙或能量代謝出現(xiàn)紊亂，最終誘使細(xì)胞啟動(dòng)死亡程序[29]。因此線粒體自噬必須保持程度上的平衡，自噬不足和過(guò)度都可能導(dǎo)致細(xì)胞走向死亡，從而加速疾病進(jìn)程。尤其是在能量高需求的心肌細(xì)胞中，過(guò)度線粒體自噬被證明與慢性心力衰竭和心肌缺血/再灌注等情況導(dǎo)致的心肌細(xì)胞死亡高度相關(guān)[30]，相關(guān)研究表明在心肌缺血階段及時(shí)激活并適度增加線粒體自噬活動(dòng)可有效減輕心肌細(xì)胞損傷，而再灌注時(shí)期持續(xù)升高的線粒體自噬使細(xì)胞內(nèi)大量蛋白質(zhì)降解，ATP供應(yīng)不足，細(xì)胞被迫凋亡，進(jìn)一步加快了MIRI發(fā)展[31]。這引發(fā)我們思考：考慮疾病所在階段及變化機(jī)制，如何以選擇性的方式調(diào)節(jié)線粒體自噬活性使其保持最佳平衡，進(jìn)而有效干預(yù)MIRI以及其他缺血性心肌疾病是我們當(dāng)前面臨的挑戰(zhàn)。

3 中醫(yī)藥相關(guān)調(diào)控機(jī)制研究

心肌缺血再灌注損傷(MIRI)是基于現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究的疾病名稱，該病的發(fā)病部位、發(fā)病機(jī)制以及臨床表現(xiàn)等特點(diǎn)與古代醫(yī)學(xué)中的“胸痹”“心悸”“真心痛”等范疇基本相符，其病癥最早記載于《黃帝內(nèi)經(jīng)》：“脈虛則血虛，血虛則痛”，初有心痛之描述，至東漢時(shí)期，張仲景在《金匱要略》中正式提出胸痹概念：“陽(yáng)微陰弦，即胸痹而痛”，闡釋了該病病機(jī)乃素體氣血陰陽(yáng)偏向虧虛，心之氣虛氣滯導(dǎo)致瘀血內(nèi)停，病理產(chǎn)物血瘀、痰濁、寒凝等痹阻心脈，不通則痛，發(fā)為胸痹，病性總屬本虛標(biāo)實(shí)，虛實(shí)夾雜?，F(xiàn)代臨床中針對(duì)MIRI具體病癥表現(xiàn)多采用行氣活血、溫通心脈、益氣養(yǎng)陰、祛痰化濁等治則辯證施治，尤以益氣活血、祛瘀止痛作為胸痹心痛的重要治則；現(xiàn)代藥理研究表明，益氣活血類中藥可通過(guò)抑制鈣超載、抗氧化應(yīng)激、抑制細(xì)胞凋亡、保護(hù)線粒體、調(diào)節(jié)自噬等方式來(lái)保護(hù)心肌免受MIRI損傷[32]。中醫(yī)藥治療缺血性心臟病經(jīng)驗(yàn)豐富、優(yōu)勢(shì)獨(dú)到，目前有研究認(rèn)為線粒體可能是其發(fā)揮作用的主要靶點(diǎn)之一[33]，線粒體是心肌細(xì)胞所需能量的重要“生產(chǎn)車間”，在MIRI發(fā)生期間，及時(shí)清除受損線粒體、保證線粒體質(zhì)量、維持能量供應(yīng)關(guān)乎著心肌細(xì)胞存亡，調(diào)控線粒體自噬機(jī)制為當(dāng)下研究熱點(diǎn)。目前有相關(guān)人員研究了中藥成分對(duì)心肌細(xì)胞線粒體的保護(hù)功能以及對(duì)其自噬的調(diào)節(jié)作用，以期從該角度深入分析中醫(yī)藥防治MIRI的分子機(jī)制，研究代表性中藥涉及到丹參、人參、黃芪等及其有效成分。

3.1 中藥以線粒體為靶點(diǎn)作用機(jī)制

當(dāng)心肌細(xì)胞處于缺血缺氧等高壓環(huán)境下，線粒體穩(wěn)態(tài)平衡被打破，高濃度的鈣離子和活性氧釋放會(huì)導(dǎo)致膜電位異常，mPTP不可逆性開(kāi)放，ATP合成率下降等事件發(fā)生誘導(dǎo)細(xì)胞損傷甚至死亡，從保護(hù)線粒體整體功能作為切入點(diǎn)，研究人員發(fā)現(xiàn)：黃芪多糖可以有效降低膜電位水平和抑制mPTP開(kāi)放程度，減少過(guò)度釋放的活性氧ROS水平及鈣離子濃度，多靶點(diǎn)保護(hù)線粒體膜結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，進(jìn)而保護(hù)受損心肌[34]；李劍等[35]發(fā)現(xiàn)葛根素治療對(duì)于MIRI大鼠再灌注時(shí)期mPTP高水平開(kāi)放和離子平衡紊亂有明顯抑制作用，因而可減少心肌細(xì)胞大量凋亡，保護(hù)瀕死心?。煌魤?mèng)霞等[36]發(fā)現(xiàn)三七總皂苷可穩(wěn)定MIRI大鼠心肌細(xì)胞線粒體跨膜電位，減少ROS和氧化丙二醛(MDA)產(chǎn)生，有效調(diào)節(jié)能量代謝，減輕線粒體功能損傷。針對(duì)細(xì)胞缺血缺氧導(dǎo)致的鈣超載現(xiàn)象，研究者發(fā)現(xiàn)黃芪甲苷預(yù)處理可降低細(xì)胞中乳酸脫氫酶(LDH)釋放，下調(diào)鈣敏感受體(CaSR)表達(dá)從而降低鈣離子濃度，維持線粒體穩(wěn)態(tài)[37]；朱寧等[38]研究發(fā)現(xiàn)，對(duì)缺氧乳鼠以紅景天苷注入治療后，心肌的興奮收縮耦聯(lián)增強(qiáng)，超載的鈣離子濃度得到調(diào)節(jié)，即表明紅景天可能通過(guò)減輕鈣超載來(lái)改善心肌細(xì)胞損傷；侯明曉等[39]發(fā)現(xiàn)人參總皂苷可在為線粒體提供能量基質(zhì)、促進(jìn)ATP合成的同時(shí)，保護(hù)心肌肌漿網(wǎng)鈣泵(SERCA)活力，降低膜內(nèi)游離鈣離子濃度，降低心肌受損程度。氧化應(yīng)激損傷在MIRI再灌注時(shí)期影響尤為明顯，在抑制氧化應(yīng)激方面，王佳等[40]研究證實(shí)熊果酸可抑制脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，減輕氧自由基堆積誘發(fā)的心肌線粒體損傷；湯世民等[41]發(fā)現(xiàn)丹參酮ⅡA預(yù)處理可有效抑制心肌線粒體氧化應(yīng)激反應(yīng)，并顯著降低再灌注導(dǎo)致的ROS過(guò)度釋放，馬春香等[42]也發(fā)現(xiàn)丹參酮ⅡA能夠減少肌鈣蛋白Ⅰ表達(dá)，并通過(guò)抑制mPTP開(kāi)放、減少細(xì)胞色素C釋放來(lái)改善心肌細(xì)胞損傷；周春剛等[43]研究發(fā)現(xiàn)經(jīng)當(dāng)歸補(bǔ)血湯處理后的心肌細(xì)胞抗氧化應(yīng)激能力明顯提升，細(xì)胞凋亡率及ROS水平降低，通過(guò)保護(hù)線粒體的生理功能而修復(fù)心肌細(xì)胞因缺氧復(fù)氧所致?lián)p傷。細(xì)胞凋亡是MIRI損傷的一種表現(xiàn)形式和最終結(jié)果，線粒體損傷后膜電位持續(xù)降低會(huì)促進(jìn)釋放細(xì)胞色素 C(Cyt-c)和凋亡因子Caspase-3，激活凋亡信號(hào)，加重心肌細(xì)胞的損傷，賀勇貴等[44]通過(guò)研究白藜蘆醇對(duì)MIRI的影響發(fā)現(xiàn)，白藜蘆醇可以通過(guò)抑制ROS介導(dǎo)的線粒體凋亡信號(hào)途徑來(lái)減少細(xì)胞凋亡，增強(qiáng)心肌收縮力，保護(hù)缺血心??；孫彬等[45]發(fā)現(xiàn)姜黃素干預(yù)處理可有效減少M(fèi)IRI大鼠心肌細(xì)胞質(zhì)中Cyt-c及Caspase-3的釋放，從而抑制線粒體介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，減少心肌梗死面積；研究表明黃芪和三七配伍后主要有效成分能夠提高心肌細(xì)胞缺氧復(fù)氧過(guò)程中線粒體膜電位，從而抑制氧自由基的生成以及氧化損傷后的細(xì)胞凋亡，進(jìn)而減輕細(xì)胞損傷，維持心肌細(xì)胞的正常生理功能[46]。此外，國(guó)內(nèi)外大量研究顯示，黨參、川芎嗪、木犀草素、紫荊黃酮等中藥有效成分可通過(guò)多種途徑作用于線粒體，通過(guò)保護(hù)線粒體的結(jié)構(gòu)和功能，從而發(fā)揮對(duì)心肌細(xì)胞不同程度的保護(hù)作用，進(jìn)一步延緩MIRI疾病的進(jìn)程及相關(guān)心血管疾病的發(fā)生發(fā)展[47-50]。

3.2 中藥調(diào)控線粒體自噬相關(guān)機(jī)制

很多中藥成分、組分、復(fù)方可以通過(guò)調(diào)控不同通路或受體蛋白介導(dǎo)的線粒體自噬來(lái)保護(hù)缺血受損的心肌細(xì)胞。例如研究者使用丹皮酚處理缺氧培養(yǎng)的H9C2細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)心肌細(xì)胞損傷和凋亡均有所減弱，心室重構(gòu)被逆轉(zhuǎn)，認(rèn)為丹皮酚通過(guò)控制線粒體中PINK1/Parkin蛋白的表達(dá)、調(diào)節(jié)線粒體自噬來(lái)發(fā)揮保護(hù)作用[51]；葒草苷被證實(shí)可以保護(hù)MIRI大鼠心肌細(xì)胞內(nèi)線粒體功能的完整性，具體表現(xiàn)為恢復(fù)其膜電位及正常開(kāi)放mPTP、降低mTOR磷酸化和調(diào)控PINK1/Parkin依賴性信號(hào)通路介導(dǎo)的線粒體自噬[52]；馬慧娟等[53]研究證明三七總皂苷可濃度依賴性改善大鼠MIRI后心肌功能的恢復(fù)，這可能與調(diào)控缺氧誘導(dǎo)因子1(HIF-1)/腺病毒E1B相互作用蛋白3(BNIP3)介導(dǎo)的線粒體自噬機(jī)制有關(guān)；陳曦[54]的實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)益氣活血類方(人參、黃芪、三七、川芎、當(dāng)歸)可通過(guò)增強(qiáng)Beclin1蛋白的表達(dá)，促進(jìn)LC3-Ⅰ到LC3-Ⅱ基因的轉(zhuǎn)化，形成自噬體誘導(dǎo)線粒體自噬的啟動(dòng)從而減少心肌細(xì)胞的損傷及凋亡。一些中藥及其有效成分在調(diào)控線粒體自噬過(guò)程中則發(fā)揮著“雙刃劍”的作用，在對(duì)抗MIRI心肌細(xì)胞損傷中通過(guò)或促進(jìn)或抑制線粒體自噬達(dá)到雙向調(diào)節(jié)的效果。王佳楠等[55]通過(guò)研究丹參酮ⅡA對(duì)大鼠心肌缺血3周后的影響，發(fā)現(xiàn)其能降低心肌線粒體中Beclin1的表達(dá)和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值、促進(jìn)P62蛋白的表達(dá)，同時(shí)大鼠心肌損傷情況得到明顯改善，推測(cè)丹參酮ⅡA通過(guò)抑制線粒體過(guò)度自噬來(lái)達(dá)到保護(hù)心肌的目的；盧長(zhǎng)青等[56]發(fā)現(xiàn)五味子乙素可顯著降低MIRI模型小鼠心肌損傷指標(biāo)，通過(guò)誘導(dǎo)促進(jìn)線粒體自噬對(duì)抗MIRI造成的心肌細(xì)胞損傷，其機(jī)制可能與升高線粒體自噬標(biāo)記蛋白環(huán)氧化酶I(COXI)的mRNA水平、促進(jìn)Beclin1蛋白表達(dá)水平以及激活A(yù)MPK/mTOR/ULK1信號(hào)通路有關(guān)；張東偉等[57]應(yīng)用人參皂苷Rb1和黃芪甲苷對(duì)MIRI心肌細(xì)胞進(jìn)行干預(yù)，發(fā)現(xiàn)其可以抑制PINK1/Parkin通路介導(dǎo)的線粒體自噬進(jìn)程，防止線粒體自噬過(guò)度，減輕再灌注時(shí)期的心肌損傷；YUAN等[58]以參族提取物人參皂苷Rg1干預(yù)MIRI模型大鼠，發(fā)現(xiàn)其可以減輕線粒體結(jié)構(gòu)損傷，促進(jìn)線粒體自噬水平而減少受損線粒體的堆積，控制心肌細(xì)胞質(zhì)量。這種特殊的雙向調(diào)節(jié)作用也可發(fā)生在同一種中藥或有效成分中，例如辛高杰等[59]通過(guò)研究缺氧復(fù)氧H9c2心肌細(xì)胞損傷模型，發(fā)現(xiàn)50 μmol·L-1濃度的丹酚酸B可以提高心肌細(xì)胞活力，降低LDH漏出量及ROS釋放量，并且通過(guò)抑制NIX受體蛋白與降低LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值來(lái)抑制線粒體自噬的發(fā)生，減少過(guò)度自噬對(duì)心肌的損害；而亦有研究表明丹酚酸B保護(hù)缺血心肌細(xì)胞的可能機(jī)制是激活SIRT1-FOXO3a-Parkin軸，增進(jìn)PI3K/Akt信號(hào)通路的表達(dá)并且上調(diào)mortalin蛋白，在維持線粒體結(jié)構(gòu)和功能穩(wěn)定的同時(shí)，提升線粒體自噬效率，減少受損線粒體的積累[60]。通過(guò)對(duì)比研究我們發(fā)現(xiàn)，中藥的雙向調(diào)節(jié)作用在心肌缺血早期階段主要是適度誘導(dǎo)線粒體自噬發(fā)生，避免受損線粒體堆積帶來(lái)進(jìn)一步損傷；而心肌缺血后期以及再灌注時(shí)期則是防止過(guò)度自噬造成心肌細(xì)胞大量死亡。中藥通過(guò)干預(yù)線粒體自噬來(lái)緩解MIRI疾病進(jìn)程已被證實(shí)，而目前國(guó)內(nèi)外相關(guān)研究尚未闡明其確切作用機(jī)制，以及中藥如何發(fā)揮最大限度的靶向調(diào)節(jié)作用，這啟發(fā)我們開(kāi)展更廣泛、更深入的探索與鉆研。

4 展望

現(xiàn)階段的研究初步證實(shí)了以人參皂苷、丹參酮ⅡA、三七總皂苷等為代表的中藥及有效成分，可以線粒體為作用靶點(diǎn)發(fā)揮保護(hù)機(jī)制，并通過(guò)介導(dǎo)PINK1/Parkin通路、調(diào)控相關(guān)蛋白的表達(dá)來(lái)促進(jìn)或抑制線粒體自噬水平，多途徑發(fā)揮對(duì)心肌細(xì)胞的保護(hù)作用，有效延緩、減輕MIRI疾病進(jìn)展。然而目前開(kāi)展的實(shí)驗(yàn)研究仍較為局限，主要問(wèn)題包括：對(duì)中藥提取成分研究較多，未見(jiàn)藥物配伍和復(fù)方湯劑的相關(guān)報(bào)道，沒(méi)有發(fā)揮中醫(yī)藥傳統(tǒng)治療優(yōu)勢(shì)；選用的中藥及有效部位種類不多，對(duì)藥材和化合物種群覆蓋不全面；實(shí)驗(yàn)不夠深入，對(duì)具體作用機(jī)制闡述不明確，除經(jīng)典通路和蛋白外其他機(jī)制涉及不多；MIRI實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ蛥⒉畈积R，沒(méi)有統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，等諸多問(wèn)題。筆者認(rèn)為中醫(yī)藥治療所倚的辨證論治和整體觀念理論是其最大特色和優(yōu)勢(shì)，中藥配伍和復(fù)方湯劑的靈活性更強(qiáng)，收獲療效更為多元，今后我們應(yīng)結(jié)合中醫(yī)理念，加強(qiáng)中藥復(fù)方的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)研究，進(jìn)一步闡明中醫(yī)藥發(fā)揮治療作用的復(fù)雜機(jī)制，為結(jié)合臨床治療提供更多的參考價(jià)值。