劉艷 徐春志 景書灝 陳紅 袁翠霞 楊峰 張海 楊源/貴州省貴陽市動物疫病預(yù)防控制中心 550000
本病的病原體為雞毒支原體(Mycoplasma Gallisepticum,MG),又稱霉形體,屬于軟皮體綱支原體目支原體科支原體屬,直徑為250~500nm,無細(xì)胞壁,因而有柔軟的形態(tài),是目前發(fā)現(xiàn)的最小的原核微生物。由于MG沒有細(xì)胞壁,MG感染機(jī)體是通過表面的黏附蛋白吸附于宿主上呼吸道上皮細(xì)胞,通過細(xì)胞因子和TLRs(Toll-like receptors)介導(dǎo),使宿主細(xì)胞受損和凋亡,纖毛脫落,繼而引發(fā)宿主的炎癥反應(yīng),由此感染宿主呼吸道,建立慢性感染;然后通過血液循環(huán),累及全身的組織、器官。
2.1 MG分離鑒定MG的分離培養(yǎng)較困難,其培養(yǎng)基所需營養(yǎng)成分復(fù)雜,目前己研制出了如Frey氏培養(yǎng)基等多種用于MG分離的培養(yǎng)基,其中還需加入20%的馬血清、10%的酵母浸出液以及抑制雜菌的生長的醋酸鉈和青霉素。當(dāng)接種的固體培養(yǎng)基在顯微鏡下觀察到典型的“煎蛋狀”菌落時則可初步確定分離到了MG,此時可利用血清學(xué)或分子學(xué)檢測來進(jìn)一步確診。但該方法所需時間長,難度大,有較大局限性,很難廣泛應(yīng)用。
2.2 血清學(xué)方法MG的血清學(xué)診斷方法較多,有常見的酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA),平板凝集試驗(SPA)、血凝抑制(HI)試驗等,SPA試驗具有快速、敏感等優(yōu)點,缺點是易出現(xiàn)假陽性。HI試驗在用于診斷雞群MG感染時特異性好,但MG的最低檢出限較高,因此檢測結(jié)果可能出現(xiàn)假陰性,通常只作為預(yù)判或輔助診斷。ELISA相較于其他血清學(xué)診斷方法,其特異性、敏感性都更有優(yōu)勢,應(yīng)用較廣。目前,存在的主要問題是制備支原體單克隆抗體的成本較高,因此該類檢測試劑的價格通常較高。
2.3 分子生物學(xué)技術(shù)分子生物學(xué)方法有著高效、敏感、特異等眾多優(yōu)點,目前已廣泛應(yīng)用于各類畜禽疾病的診斷。如今,PCR檢測MG技術(shù)較成熟,結(jié)果可靠性高,已有多種用于雞群MG診斷的PCR方法被報道,如Gharibi等人設(shè)計了185bp特異性引物用于檢測MG,經(jīng)臨床驗證方法真實可行。Raviv Z等設(shè)計了針對MGc2基因的檢測引物,特異性高,與其他類型的支原體不存在交叉反應(yīng)。趙杰等開發(fā)了MG的套式PCR檢測方法,結(jié)果發(fā)現(xiàn)檢測MG靈敏度高,且與MS無交叉性。在臨床檢測MG時熒光PCR的敏感性比普通PCR更有優(yōu)越性,羅思思等人開發(fā)了MG的二重?zé)晒釶CR,可鑒別診斷MG強(qiáng)毒株和弱毒株,檢測靈敏度可達(dá)10拷貝/μL,檢出率高。大多數(shù)禽支原體還可根據(jù)其獨特的限制性片段長度多態(tài)性(RFLP)來區(qū)分,但該方法僅限于鑒定禽支原體的純培養(yǎng)物。
3.1 疫苗預(yù)防
3.1.1 滅活疫苗滅活疫苗一般無需特殊保存,在使用時安全方便。目前MG滅活疫苗有F株、R株、S6株等不同毒株類型,就保護(hù)力而言,F(xiàn)株滅活疫苗效果最好,在使用時,一般需要多次皮下注射來加強(qiáng)免疫。TanL等的研究發(fā)現(xiàn)一種MG源的GroEL抗血清對MG有很好的殺滅作用,因此后續(xù)對MG滅活疫苗的開發(fā)可將該蛋白作為切入點。
3.1.2 弱毒疫苗目前國內(nèi)養(yǎng)殖戶在對雞群進(jìn)行CRD預(yù)防是多采用弱毒疫苗,針對MG的預(yù)防現(xiàn)采用的活疫苗多為F株疫苗,F(xiàn)株疫苗使用廣泛,經(jīng)長期臨床使用驗證其致病力較低,對雞群有很好的保護(hù)力,有研究證明該疫苗使用還能提高產(chǎn)蛋量。因此,F(xiàn)株疫苗是預(yù)防MG的優(yōu)良候選。但近年有研究發(fā)現(xiàn)F株疫苗有散毒的風(fēng)險,有的還可經(jīng)蛋垂直傳播給下一代。除F株外,現(xiàn)在還有TS-11、6/85、K株,就安全性而言,這些疫苗株優(yōu)于F株,但在保護(hù)力方面略遜之,其中又以TS-11使用最多,該疫苗株對產(chǎn)蛋雞的產(chǎn)蛋性能影響有限,因此,可作為產(chǎn)蛋雞預(yù)防MG的首選疫苗。