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        常用消毒劑對雞場分離大腸桿菌的消毒效果研究

        2020-12-29 01:51:43袁曉娟湖南省長沙市農(nóng)業(yè)綜合行政執(zhí)法局410013
        獸醫(yī)導(dǎo)刊 2020年17期
        關(guān)鍵詞:病料涂片消毒劑

        袁曉娟/湖南省長沙市農(nóng)業(yè)綜合行政執(zhí)法局 410013

        大腸桿菌疾病是一類傳染病籠統(tǒng)的總稱,致病菌是大腸埃希氏菌內(nèi)部的一些血清型,是非常重要的一類胚胎疾病。在整個生產(chǎn)活動中,禽類活動的所有周圍環(huán)境里都有大腸桿菌,這種疾病在幼雞以及成年雞大腸桿菌疾病在臨床上分為許多種類,其中包含大腸埃希氏菌致病性的卵黃性腹膜炎、關(guān)節(jié)炎、腦病、孵化率低、死胚、敗血癥、氣囊炎、心包炎、腫頭綜合征、腸炎等。雞群發(fā)病的概率是,致死的概率是[3]。由此可見,家禽大腸桿菌疾病的爆發(fā)嚴(yán)重?fù)p害了養(yǎng)殖戶的利益,造成了養(yǎng)殖戶經(jīng)濟(jì)上的巨大損失。

        該病原體對于畜禽的生產(chǎn)安全造成了嚴(yán)重的損害,而最有效的防控措施就是消毒。本試驗(yàn)通過測量幾種類型的消毒藥劑對于分離的病原菌的最小殺菌濃度、消毒藥劑的濃度、作用時間對消毒效果的影響,對大規(guī)模集約經(jīng)營養(yǎng)雞場現(xiàn)場進(jìn)行消毒操作的實(shí)際效果觀測,為疫病的預(yù)防控制以及確定消毒的方案提供理論依據(jù)。

        1 材料

        1.1 試驗(yàn)動物試驗(yàn)用的染病雞來自某蛋雞企業(yè)養(yǎng)殖廠。

        1.2 試驗(yàn)材料LB培養(yǎng)基、伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、TSA瓊脂培養(yǎng)基、腸桿菌科生化鑒定培養(yǎng)基,電熱恒溫培養(yǎng)箱、超凈工作臺、電子天平、高壓蒸汽滅菌鍋、恒溫空氣搖床、漩渦混合器、顯微鏡。

        1.3 消毒藥劑百毒殺、84消毒液、菌毒靈、新潔爾滅、新歐福、氨酚。

        2 方法

        2.1 病料采集及涂片染色將送檢的病雞進(jìn)行解剖,在無菌的環(huán)境中取具備明顯大腸桿菌病病變特點(diǎn)的組織器官比如氣囊、心包、肝表滲出物進(jìn)行涂片,進(jìn)行革蘭氏染色,顯微鏡下觀察,在無菌環(huán)境中用接種環(huán)把疑似的病料接種在液體培養(yǎng)基上,完成菌群擴(kuò)增過程。

        2.2 分離培養(yǎng)病原把接種過疑似菌種的培養(yǎng)基繼續(xù)接種在麥康凱瓊脂平板和伊紅美藍(lán)瓊脂平板上,37℃培養(yǎng)24h;再在無菌的環(huán)境中,挑取表面生長為紅色菌落的半個菌落接種在營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)基進(jìn)行純培養(yǎng),與此同時把另外半個菌落進(jìn)行涂片,革蘭氏染色,顯微鏡下檢測;純培養(yǎng)物放置在4℃的冰箱以備之后使用。

        2.3 消毒劑的配制將百毒殺、84、菌毒靈、新潔爾滅、氨酚、新歐福分別用滅菌生理鹽水按1:20、1:40、1:80、1:160、1:320、1:640的比例稀釋成為濃度各異的消毒試劑。

        2.4 制備大腸桿菌菌懸液把已經(jīng)完成分離測定的大腸桿菌接種在營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基表面繼續(xù)進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng),取5mL滅菌生理鹽水加入培養(yǎng)基中,反復(fù)洗下菌苔至無菌管中,用漩渦混勻30s制成菌懸液,采用麥?zhǔn)媳葷峁軐⒕鷳乙合♂尀?07CFU/mL待測菌液,保存在4℃冰箱內(nèi)備用,12h內(nèi)使用。

        2.5 消毒劑在不同時間內(nèi)的殺菌結(jié)果及最小殺菌濃度確定逐一取上述種類濃度各異的消毒試劑2ml跟大腸桿菌的菌懸液0.1ml進(jìn)行均勻混合,經(jīng)過1min、10min、30min和1h、5h的時長,取菌液與消毒液的混合液0.5ml加入4.5ml中和劑的試管中混勻,經(jīng)中和作用10min,從中取0.1ml的樣本涂布在營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基里上,在37℃的恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)完成48h的培養(yǎng),仔細(xì)觀察各濃度殺菌劑在不同時間內(nèi)的殺菌效果,以無菌生長的最低倍數(shù)作為該消毒劑在該時間內(nèi)對試驗(yàn)菌的最小殺菌濃度。

        3 結(jié)果

        3.1 病料涂片染色鏡檢結(jié)果疑似病料經(jīng)涂片染色鏡檢查得出:革蘭氏陰性、無芽孢短桿菌,多單個或成對存在。

        3.2 細(xì)菌培養(yǎng)特性及形態(tài)特征分離出來的菌株在每一種培養(yǎng)基上長成典型的大腸桿菌應(yīng)該呈現(xiàn)的菌落形態(tài),可以判斷符合大腸桿菌典型的菌落形態(tài)特征。

        3.3 消毒劑的消毒效果的測定結(jié)果百毒殺對某蛋雞企業(yè)養(yǎng)殖廠分離的大腸桿菌菌株的殺菌效果最好,1:160比例稀釋在5min內(nèi)可以達(dá)到殺菌率100%;1:80比例的菌毒靈在5min內(nèi)可以達(dá)到殺菌率100%;1:80比例的新潔爾滅在10min可以達(dá)到殺菌率100%;1:80比例的新歐福在5min可以達(dá)到殺菌率100%;1:40比例的氨酚在5min可以達(dá)到殺菌率100%。

        4 討論

        幾種消毒劑對大腸桿菌均具有殺菌能力,但稀釋倍數(shù)各不相同,殺菌能力與消毒劑濃度呈正相關(guān),而且殺菌效果與殺菌時間呈正相關(guān);本次試驗(yàn)中6種消毒劑對大腸桿菌的殺菌效果與殺菌時間有關(guān),作用10min后6種消毒劑都可以達(dá)到殺菌率100%。百毒殺的稀釋比例相對來說也是最大的,所以在養(yǎng)殖場的日常消毒中,建議使用百毒殺,但是如果長時間使用單一消毒劑,養(yǎng)殖廠中致病細(xì)菌會逐漸產(chǎn)生耐藥性,因此建議菌毒凈和百毒殺定期交替使用。

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