袁曉娟/湖南省長沙市農(nóng)業(yè)綜合行政執(zhí)法局 410013

大腸桿菌疾病是一類傳染病籠統(tǒng)的總稱，致病菌是大腸埃希氏菌內(nèi)部的一些血清型，是非常重要的一類胚胎疾病。在整個生產(chǎn)活動中，禽類活動的所有周圍環(huán)境里都有大腸桿菌，這種疾病在幼雞以及成年雞大腸桿菌疾病在臨床上分為許多種類，其中包含大腸埃希氏菌致病性的卵黃性腹膜炎、關(guān)節(jié)炎、腦病、孵化率低、死胚、敗血癥、氣囊炎、心包炎、腫頭綜合征、腸炎等。雞群發(fā)病的概率是，致死的概率是[3]。由此可見，家禽大腸桿菌疾病的爆發(fā)嚴(yán)重損害了養(yǎng)殖戶的利益，造成了養(yǎng)殖戶經(jīng)濟上的巨大損失。

該病原體對于畜禽的生產(chǎn)安全造成了嚴(yán)重的損害，而最有效的防控措施就是消毒。本試驗通過測量幾種類型的消毒藥劑對于分離的病原菌的最小殺菌濃度、消毒藥劑的濃度、作用時間對消毒效果的影響，對大規(guī)模集約經(jīng)營養(yǎng)雞場現(xiàn)場進行消毒操作的實際效果觀測，為疫病的預(yù)防控制以及確定消毒的方案提供理論依據(jù)。

1 材料

1.1 試驗動物試驗用的染病雞來自某蛋雞企業(yè)養(yǎng)殖廠。

1.2 試驗材料LB培養(yǎng)基、伊紅美藍瓊脂培養(yǎng)基、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、TSA瓊脂培養(yǎng)基、腸桿菌科生化鑒定培養(yǎng)基，電熱恒溫培養(yǎng)箱、超凈工作臺、電子天平、高壓蒸汽滅菌鍋、恒溫空氣搖床、漩渦混合器、顯微鏡。

1.3 消毒藥劑百毒殺、84消毒液、菌毒靈、新潔爾滅、新歐福、氨酚。

2 方法

2.1 病料采集及涂片染色將送檢的病雞進行解剖，在無菌的環(huán)境中取具備明顯大腸桿菌病病變特點的組織器官比如氣囊、心包、肝表滲出物進行涂片，進行革蘭氏染色，顯微鏡下觀察，在無菌環(huán)境中用接種環(huán)把疑似的病料接種在液體培養(yǎng)基上，完成菌群擴增過程。

2.2 分離培養(yǎng)病原把接種過疑似菌種的培養(yǎng)基繼續(xù)接種在麥康凱瓊脂平板和伊紅美藍瓊脂平板上，37℃培養(yǎng)24h；再在無菌的環(huán)境中，挑取表面生長為紅色菌落的半個菌落接種在營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)基進行純培養(yǎng)，與此同時把另外半個菌落進行涂片，革蘭氏染色，顯微鏡下檢測；純培養(yǎng)物放置在4℃的冰箱以備之后使用。

2.3 消毒劑的配制將百毒殺、84、菌毒靈、新潔爾滅、氨酚、新歐福分別用滅菌生理鹽水按1:20、1:40、1:80、1:160、1:320、1:640的比例稀釋成為濃度各異的消毒試劑。

2.4 制備大腸桿菌菌懸液把已經(jīng)完成分離測定的大腸桿菌接種在營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基表面繼續(xù)進行擴大培養(yǎng)，取5mL滅菌生理鹽水加入培養(yǎng)基中，反復(fù)洗下菌苔至無菌管中，用漩渦混勻30s制成菌懸液，采用麥?zhǔn)媳葷峁軐⒕鷳乙合♂尀?07CFU/mL待測菌液，保存在4℃冰箱內(nèi)備用，12h內(nèi)使用。

2.5 消毒劑在不同時間內(nèi)的殺菌結(jié)果及最小殺菌濃度確定逐一取上述種類濃度各異的消毒試劑2ml跟大腸桿菌的菌懸液0.1ml進行均勻混合，經(jīng)過1min、10min、30min和1h、5h的時長，取菌液與消毒液的混合液0.5ml加入4.5ml中和劑的試管中混勻，經(jīng)中和作用10min，從中取0.1ml的樣本涂布在營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基里上，在37℃的恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)完成48h的培養(yǎng)，仔細觀察各濃度殺菌劑在不同時間內(nèi)的殺菌效果，以無菌生長的最低倍數(shù)作為該消毒劑在該時間內(nèi)對試驗菌的最小殺菌濃度。

3 結(jié)果

3.1 病料涂片染色鏡檢結(jié)果疑似病料經(jīng)涂片染色鏡檢查得出：革蘭氏陰性、無芽孢短桿菌，多單個或成對存在。

3.2 細菌培養(yǎng)特性及形態(tài)特征分離出來的菌株在每一種培養(yǎng)基上長成典型的大腸桿菌應(yīng)該呈現(xiàn)的菌落形態(tài)，可以判斷符合大腸桿菌典型的菌落形態(tài)特征。

3.3 消毒劑的消毒效果的測定結(jié)果百毒殺對某蛋雞企業(yè)養(yǎng)殖廠分離的大腸桿菌菌株的殺菌效果最好，1:160比例稀釋在5min內(nèi)可以達到殺菌率100%；1:80比例的菌毒靈在5min內(nèi)可以達到殺菌率100%；1:80比例的新潔爾滅在10min可以達到殺菌率100%；1:80比例的新歐福在5min可以達到殺菌率100%；1:40比例的氨酚在5min可以達到殺菌率100%。

4 討論

幾種消毒劑對大腸桿菌均具有殺菌能力，但稀釋倍數(shù)各不相同，殺菌能力與消毒劑濃度呈正相關(guān)，而且殺菌效果與殺菌時間呈正相關(guān);本次試驗中6種消毒劑對大腸桿菌的殺菌效果與殺菌時間有關(guān)，作用10min后6種消毒劑都可以達到殺菌率100%。百毒殺的稀釋比例相對來說也是最大的，所以在養(yǎng)殖場的日常消毒中，建議使用百毒殺，但是如果長時間使用單一消毒劑，養(yǎng)殖廠中致病細菌會逐漸產(chǎn)生耐藥性，因此建議菌毒凈和百毒殺定期交替使用。