黃衛(wèi)國(guó)

摘 要：建立了LC-MS/MS快速測(cè)定飲料中甜蜜素的方法，該方法樣品處理簡(jiǎn)單，較傳統(tǒng)方法可直接進(jìn)樣，干擾較少，在0.05～5.0μg/mL范圍內(nèi)線性良好（r=0.9994），回收率在90.5～98.2%之間，重復(fù)性較好，適合于不含脂肪和蛋白質(zhì)的飲料中甜蜜素的快速檢測(cè)。

關(guān)鍵詞：LC-MS/MS;甜蜜素;飲料

0 引言

甜蜜素（Sodium cyclamate），學(xué)名為環(huán)己基氨基磺酸鈉，化學(xué)式為（C6H11NHSO3Na），分子量201.2，作為人工合成的非營(yíng)養(yǎng)型甜味劑，其甜度為蔗糖的30倍，由于價(jià)格較蔗糖便宜，在食品生產(chǎn)中廣泛用于蜜餞、醬菜、飲料、糕點(diǎn)等。飲料中的甜蜜素傳統(tǒng)檢測(cè)方法采用氣相色譜法和高效液相色譜法，氣相色譜法利用甜蜜素與亞硝酸在硫酸介質(zhì)中反應(yīng)生產(chǎn)環(huán)己醇亞硝酸酯，然后用氣相色譜分離氫火焰離子化檢測(cè)器檢測(cè)分析;高效液相色譜法則將甜蜜素在強(qiáng)酸溶液中與次氯酸鈉反應(yīng)，生成二氯環(huán)己胺，再用正庚烷萃取后通過高效液相色譜進(jìn)行測(cè)定;該兩種檢測(cè)方法實(shí)際操作過程繁瑣，耗時(shí)較長(zhǎng)，基體干擾大[1]。為提高檢測(cè)效率，本實(shí)驗(yàn)建立了反相LC-MS/MS快速測(cè)定飲料中甜蜜素的方法，該方法前處理簡(jiǎn)單，可快速測(cè)定，用于實(shí)際樣品檢測(cè)，結(jié)果令人滿意。

1 材料與方法

1.1 試劑

乙腈（色譜純）、乙酸銨（10mmol/L）、甜蜜素標(biāo)準(zhǔn)品、0.45μm微孔濾膜。

1.2 儀器

分析天平、島津超高效液相色譜LC30A、AB SCIEX三重四極桿質(zhì)譜儀API-4000。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 質(zhì)譜分析條件

ESI離子源，NEG掃描，IS：-4500V，GS1：45Psi，CUR：

20Psi，GS2：55Psi，TEM：600℃，CAD：6mL/min，MRM模式。

1.3.2 色譜分析條件

色譜柱為安捷倫ZORBAXExtend-C18，150mm×2.1mm（內(nèi)徑），粒度5μm，流動(dòng)相為85%乙酸銨（10mmol/L）-15%乙腈，流速0.2mL/min，進(jìn)樣體積5.0μL，柱溫為室溫。

1.3.3 樣品處理

稱取飲料樣品1g于燒杯中，加少量水加熱攪拌，趁熱轉(zhuǎn)移到250mL容量瓶中，用超純水定容，取上清液用0.45μm水相膜過濾，濾液直接用液質(zhì)聯(lián)用儀分析。

2 結(jié)果與討論

2.1 質(zhì)譜條件選擇

采用ESI負(fù)離子模式檢測(cè)，用針泵吸取0.05μg/mL甜蜜素連續(xù)進(jìn)樣，通過調(diào)節(jié)去簇電壓（DP）確定其母離子為178m/z，與理論分子失去一個(gè)鈉離子的質(zhì)荷比[M-Na]-吻合，再通過調(diào)節(jié)碰撞氣能量（CE）確定其子離子為79m/z，最后通過掃描確定質(zhì)譜MRM參數(shù)如表1。

2.2 色譜條件選擇

由于甜蜜素屬于強(qiáng)極性物質(zhì)，故采用反相C18柱分析，實(shí)驗(yàn)中選取安捷倫ZORBAX Extend-C18，150mm×2.1mm（內(nèi)徑），粒度5μm色譜柱，根據(jù)2.1質(zhì)譜條件，考察表2中不同的乙酸銨--乙腈流動(dòng)相出峰情況。

各流動(dòng)相的出峰結(jié)果如圖1，其中a、b、c、d條件下出峰較快，有峰拖尾的現(xiàn)象;g條件下保留時(shí)間過長(zhǎng)，出峰慢且峰型不好;而e、f條件下e的出峰緊湊，相較f峰型好，保留時(shí)間在2.6min左右，符合快速分析要求，因此確定最佳的色譜流動(dòng)相為e，即85%乙酸銨（10mmol/L）-15%乙腈溶液。

2.3 線性范圍和檢出限

在上述確定的實(shí)驗(yàn)條件下，對(duì)濃度為0.05、0.1、0.5、1.0、5.0μg/mL的甜蜜素標(biāo)樣進(jìn)行測(cè)定，以峰面積對(duì)甜蜜素濃度作線性分析，得校準(zhǔn)曲線方程Y=164107X+2487，相關(guān)系數(shù)r=0.9994，以三倍信噪比作為檢出限，得出本方法甜蜜素的檢出限為0.04μg/mL。

2.4 加標(biāo)回收率

分別選取空白果汁飲料和涼茶飲料試樣各6份，向其添加甜蜜素標(biāo)樣0.1mg，按照前面方法處理定容于250mL的容量瓶中，測(cè)定其甜蜜素的含量，以此計(jì)算其加標(biāo)回收率。結(jié)果計(jì)算得到果汁飲料中甜蜜素的加標(biāo)回收率在90.5～95.2%之間，平均回收率為92.8%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.85%;涼茶飲料中甜蜜素的加標(biāo)回收率在94.0～98.2%之間，平均回收率為96.0%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.67%?？傮w而言，在飲料中的甜蜜素的加標(biāo)回收率高于90%，具體結(jié)果見表3。

2.5 樣品測(cè)定

選取市面上標(biāo)識(shí)含有甜蜜素的某品牌蘋果醋，稱取1.0752g樣品，定容于250mL容量瓶，按本實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行檢測(cè)，測(cè)得樣品稀釋后濃度為0.532μg/mL，計(jì)算得到該果凍甜蜜素含量為0.124g/kg，該結(jié)果低于國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)[2]要求0.65g/kg，說明該方法適合于果汁、涼茶、蘋果醋等不含脂肪和蛋白質(zhì)的飲料中甜蜜素的檢測(cè)。

3 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)利用LC-MS/MS建立測(cè)定飲料中甜蜜素的方法，與傳統(tǒng)檢測(cè)方法相比，該方法的樣品處理簡(jiǎn)單，分析時(shí)間大大縮短，同時(shí)檢測(cè)過程干擾少，重復(fù)性好，減少假陽性的可能，適用于不含脂肪和蛋白質(zhì)的飲料中甜蜜素的快速檢測(cè)。

參考文獻(xiàn)：

[1] GB1886.37-2015.食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品添加劑環(huán)己基氨基磺酸鈉（又名甜蜜素）[S].國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)，2015.

[2] GB2760-2014.食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)[S].國(guó)家衛(wèi)生計(jì)生委，2014.