蔡光輝 馬婧瑋 吳艷兵

摘要 建立了環(huán)氟菌胺在小麥植株和麥田土壤中的殘留檢測(cè)方法，并對(duì)其在小麥中的殘留量進(jìn)行了膳食攝入評(píng)估。樣品中環(huán)氟菌胺經(jīng)乙腈提取，氨基固相萃取柱凈化，氣相色譜檢測(cè)，外標(biāo)法定量。結(jié)果表明：在0.02～10 mg/kg添加水平下，環(huán)氟菌胺在小麥植株、小麥籽粒和土壤中的平均回收率在78%～119%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在0.63%～14%之間。小麥植株、小麥籽粒和土壤中環(huán)氟菌胺最低檢測(cè)濃度（LOQ）均為0.02 mg/kg。環(huán)氟菌胺在小麥植株中的消解符合一級(jí)動(dòng)力學(xué)方程，半衰期為1.5～5.1 d。按推薦有效劑量132 g/hm2施藥，在30～50 d采收間隔期環(huán)氟菌胺的殘留量均<0.2 mg/kg。環(huán)氟菌胺的普通人群國(guó)家估計(jì)每日攝入量（NEDI）是0.002 77 mg，占日允許攝入量（ADI）的6.93%左右，認(rèn)為對(duì)一般人群健康不會(huì)產(chǎn)生不可接受的風(fēng)險(xiǎn)。

關(guān)鍵詞 環(huán)氟菌胺; 小麥; 殘留檢測(cè); 膳食攝入評(píng)估

中圖分類(lèi)號(hào)： TQ 450.26

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼： A

DOI： 10.16688/j.zwbh.2019433

Abstract A method for the determination of cyflufenamid residues in wheat and soil was developed using gas chromatography. The dietary risk for Chinas population was evaluated based on the data of cyflufenamid residues in wheat. Cyflufenamid was extracted by acetonitrile and purified by NH2 column. The samples were detected by gas chromatography and quantified by using the external standard method. At the fortified level of 0.02-10 mg/kg， the average recoveries of cyflufenamid in wheat plants， wheat seeds and soil varied from 78% to 119%， with a relative standard deviation of 0.63%-14%. The limit of quantification （LOQ） of cyflufenamid in wheat plants， wheat seeds and soil was 0.02 mg/kg. The dissipations of cyflufenamid in wheat plants were consistent with the first-order kinetic equation with a half-life of 1.5-5.1 d. According to the recommended effective dose of 132 g/hm2， the residual amount of cyflufenamid was less than 0.2 mg/kg during the harvest interval of 30-50 d. The national estimated daily intake （NEDI） of cyflufenamid was 0.002 77 mg， accounting for about 6.93% of the daily ADI. The potential health risk induced by cyflufenamid was not significant based on the trial data of supervised residues.

Key words cyflufenamid; wheat; residue determination; risk assessment of dietary residue intake

環(huán)氟菌胺化學(xué)名稱(chēng)為（Z）-N-[α-（環(huán)丙甲氧亞氨基）-2，3-二氟-6-（三氟甲基）芐基]-2-苯乙酰胺，英文通用名為cyflufenamid，分子式為C20H17F5N2O[1-2]2。由日本曹達(dá)株式會(huì)社2002年在日本登記，2003年上市。該藥為酰胺類(lèi)殺菌劑，主要用于防治各種農(nóng)作物的白粉病，生化機(jī)制還不清楚，環(huán)氟菌胺通過(guò)抑制吸器的形成和發(fā)展，二次菌絲的生長(zhǎng)及分生孢子的形成而起到顯著的殺菌作用[3]。環(huán)氟菌胺是具有預(yù)防活性的殺菌劑，高劑量使用具有治療活性。

國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)對(duì)環(huán)氟菌胺報(bào)道較多的主要是其環(huán)境行為和在食品、蔬菜及水果中殘留的檢測(cè)方法。魏海峰[4]報(bào)道了環(huán)氟菌胺化學(xué)降解、光降解、土壤降解、土壤吸附與解吸附、土壤中遷移等環(huán)境行為。吳文鑄等[5]報(bào)道了環(huán)氟菌胺在不同土壤和水-沉積物體系中的降解特性，發(fā)現(xiàn)環(huán)氟菌胺在土壤中較穩(wěn)定，在水-沉積物系統(tǒng)中主要分布于沉積物中，對(duì)水體和土壤環(huán)境存在潛在風(fēng)險(xiǎn)。朱莉萍等[6]報(bào)道了蔬菜及水果中環(huán)氟菌胺氣相色譜的多殘留檢測(cè)方法;楊雯筌等[7]報(bào)道了氣相色譜-負(fù)化學(xué)離子源質(zhì)譜檢測(cè)胡蘿卜中環(huán)氟菌胺殘留量;李立等[8]報(bào)道了氣相色譜-質(zhì)譜檢測(cè)菠蘿、花生、玉米、紫蘇和茶葉中環(huán)氟菌胺殘留量;姜樺韜等[9]報(bào)道了液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS）檢測(cè)糙米中環(huán)氟菌胺殘留的分析方法;陳小龍等[10]報(bào)道了蔬菜、水果中環(huán)氟菌胺殘留量的液質(zhì)聯(lián)用檢測(cè)方法。國(guó)內(nèi)外關(guān)于小麥及小麥植株中環(huán)氟菌胺的殘留檢測(cè)方法、殘留安全性評(píng)價(jià)及小麥中殘留膳食攝入評(píng)估未見(jiàn)報(bào)道。本試驗(yàn)建立了氣相色譜測(cè)定小麥籽粒及其植株中環(huán)氟菌胺的殘留檢測(cè)方法，對(duì)小麥中的環(huán)氟菌胺殘留量進(jìn)行測(cè)定，對(duì)膳食攝入風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行評(píng)估，為評(píng)價(jià)環(huán)氟菌胺在小麥上的殘留安全提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試農(nóng)藥為11%環(huán)氟菌胺·戊唑醇懸浮劑（SC），由江蘇龍燈化學(xué)有限公司提供;供試作物小麥品種河南為‘花培5號(hào)，黑龍江2015年為‘龍輻18，2016年為‘龍輻19，北京為‘農(nóng)大211。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 田間試驗(yàn)設(shè)計(jì)

參照《農(nóng)藥殘留試驗(yàn)準(zhǔn)則》（NY/T 788-2004）的規(guī)定[11]，于2015年和2016年分別在河南省新鄉(xiāng)市平原新區(qū)王村、黑龍江省哈爾濱市南崗區(qū)紅旗鄉(xiāng)和北京市通州區(qū)漷縣鎮(zhèn)侯黃莊村進(jìn)行了環(huán)氟菌胺在小麥上的殘留消解動(dòng)態(tài)和最終殘留試驗(yàn)。試驗(yàn)設(shè)低劑量（有效成分66 g/hm2）區(qū)、高劑量（有效成分99 g/hm2）區(qū)、另設(shè)清水空白對(duì)照和消解動(dòng)態(tài)試驗(yàn)區(qū)，處理間設(shè)保護(hù)帶。試驗(yàn)設(shè)計(jì)、樣品采集及制備、樣品貯存見(jiàn)參考文獻(xiàn)[12-14]。

1.2.2 消解動(dòng)態(tài)試驗(yàn)

消解動(dòng)態(tài)試驗(yàn)設(shè)1個(gè)處理，3個(gè)重復(fù)。小麥返青期施藥（有效劑量為132 g/hm2），按用藥量?jī)端鶆驀婌F2～3遍。小麥植株樣本的采集：在施藥后2 h及1、3、5、7、10、14、21、28、35、45 d，隨機(jī)在試驗(yàn)小區(qū)內(nèi)用剪刀剪取地表以上的全株1 kg以上。于施藥前及施藥后21 d分別在對(duì)照小區(qū)內(nèi)采集小麥植株對(duì)照樣品。

土壤消解動(dòng)態(tài)試驗(yàn)與植株中消解動(dòng)態(tài)試驗(yàn)同時(shí)進(jìn)行。在試驗(yàn)區(qū)附近，選一塊50 m2的地塊，單獨(dú)施藥（有效劑量為7 333.3 g/hm2），施藥后2 h及1、3、5、7、10、14、21、28、35、45、60、90 d采樣，方法為用土鉆采用棋盤(pán)取樣或隨機(jī)取樣20個(gè)點(diǎn)，重量在1 kg左右，于施藥前及施藥后21 d分別在對(duì)照小區(qū)內(nèi)采集土壤對(duì)照樣品。

1.2.3 最終殘留試驗(yàn)

設(shè)兩個(gè)施藥劑量：低劑量和高劑量。低劑量有效成分為66 g/hm2，高劑量有效成分為99 g/hm2。各設(shè)2次和3次施藥，每個(gè)處理設(shè)3次重復(fù)，小區(qū)面積30 m2，按照試驗(yàn)設(shè)計(jì)時(shí)間進(jìn)行莖葉噴霧，施藥間隔期為10 d。末次施藥后間隔30、40、50 d分別采集小麥植株、小麥粒及土壤樣本。另設(shè)清水空白對(duì)照，處理間設(shè)保護(hù)帶。收獲時(shí)采集小麥和土壤的對(duì)照樣品。

1.3 樣品制備與分析

1.3.1 樣品制備

將田間采回的小麥植株樣本剪成1 cm以下的小段或切碎，小麥穗脫粒后用粉碎機(jī)磨成粉;田間取回的土壤樣品去除雜草、碎石。樣品均經(jīng)過(guò)充分混勻后，用四分法縮分后留樣，小麥植株、籽粒為250 g，土壤為500 g，低溫（-20℃）保存。

1.3.2 分析方法

1.3.2.1 試劑與儀器

試劑：環(huán)氟菌胺標(biāo)準(zhǔn)品（純度99.0%），德國(guó)Dr.Ehrenstorfer公司;乙腈（色譜純）、丙酮（分析純）、正己烷（色譜純）、乙酸乙酯（色譜純）、氨基固相萃取柱，賽默飛世爾科技公司，美國(guó);氯化鈉（分析純，140℃烘烤4 h），天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司，天津;超純水。

儀器：氣相色譜儀（島津2010plus，配備ECD檢測(cè)器）;水浴恒溫振蕩器（金壇市杰瑞爾電器有限公司）;超聲波清洗儀（昆山KQ-5200）;電加熱板（Lab Tech EH-20B）;離心機(jī)（湘儀L-550）;烘箱（齊欣DHG-9070A）;電子天平、精密移液槍以及其他實(shí)驗(yàn)室常用儀器設(shè)備。

1.3.2.2 樣品前處理

小麥植株的凈化：準(zhǔn)確稱(chēng)取小麥植株樣品1000 g （精確至0.01 g）于200 mL玻璃瓶中，加30 mL水，50 mL乙腈，于恒溫振蕩器下振蕩1 h后過(guò)濾至含有10 g氯化鈉的具塞量筒中，劇烈振蕩，隨后靜置1 h，取上清液25 mL于40℃電加熱板加熱至近干，待凈化。

土壤和小麥籽粒凈化：稱(chēng)取約5.00 g土壤樣品于150℃烘至恒重，測(cè)定土壤中的含水量。準(zhǔn)確稱(chēng)取土壤和小麥籽粒樣品各10.00 g（精確至0.01 g）于100 mL離心管中，加10 mL水，30 mL乙腈，于恒溫振蕩器下振蕩1 h后加入5 g氯化鈉，蓋上蓋子渦旋30 s，靜置1 h，于5 000 r/min離心5 min，取上清液15 mL于40℃電加熱板加熱至近干，待凈化。

1.3.2.3 凈化

將蒸干的殘留物用5 mL正己烷∶丙酮∶乙酸乙酯（1∶1∶1，體積比）溶解，加入已經(jīng)過(guò)5 mL正己烷∶丙酮∶乙酸乙酯（1∶1∶1，體積比）預(yù)淋洗的氨基固相萃取柱，收集淋洗液，再用15 mL正己烷∶丙酮∶乙酸乙酯（1∶1∶1，體積比）分3次洗脫，合并淋洗液，于40℃蒸干，用正己烷定容至2 mL，過(guò)0.22 μm濾膜，待測(cè)。

1.3.2.4 儀器條件

氣相色譜儀：島津2010-plus;色譜柱：RTX-5（30 m×0.25 mm×0.25 μm）;檢測(cè)器：ECD;進(jìn)樣口溫度：260℃，分流進(jìn)樣;檢測(cè)器溫度：300℃;分流比：30∶1;氣體流量：載氣（N2）3 mL/min;尾吹氣（N2）30 mL/min;進(jìn)樣量：1 μL;柱溫：180℃以20℃/min升至260℃保持10 min。

1.4 長(zhǎng)期膳食攝入風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

采用常用的估算消費(fèi)者長(zhǎng)期膳食暴露量的方法即國(guó)家估計(jì)每日攝入量（national estimated daily intake， NEDI）。NEDI按公式（1）計(jì)算，對(duì)應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)商（risk quotient，RQ）按公式（2）計(jì)算，風(fēng)險(xiǎn)商的倒數(shù)稱(chēng)為安全系數(shù)（safety factor，SF）。當(dāng) RQ≤1 時(shí)，表示慢性風(fēng)險(xiǎn)可以接受，RQ 越小，風(fēng)險(xiǎn)越小;當(dāng)RQ>1時(shí)，表示有不可接受的慢性風(fēng)險(xiǎn)，RQ 越大，風(fēng)險(xiǎn)越大。

式中：NEDI的單位為μg/（kg·d）;STMRi（supervised trials median residue）指第 i 級(jí)農(nóng)產(chǎn)品的規(guī)范試驗(yàn)殘留中值，單位為mg/kg;Fi為不同人群對(duì)第 i 級(jí)農(nóng)產(chǎn)品的膳食消費(fèi)量（food intake），單位為 g/d;bw 為人群平均體重，單位為kg。ADI（acceptable daily intake）為每千克體重的每日允許攝入量，單位為 mg/（kg·d）。

2 結(jié)果與分析

2.1 方法的準(zhǔn)確性、精密度和靈敏度

稱(chēng)取一定量的環(huán)氟菌胺標(biāo)準(zhǔn)品，用正己烷溶解定容制成1 000 mg/L的母液，再逐級(jí)稀釋為0.05、0.1、0.5、1、2 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液。以濃度（y，mg/L）-峰面積（x）作標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性方程為y=175 183.02x+17 363.93，R2=0.99，環(huán)氟菌胺的最小檢出量為5×10-14g。

在小麥植株、土壤和小麥籽粒的空白對(duì)照樣品中添加不同濃度的環(huán)氟菌胺標(biāo)準(zhǔn)溶液，搖勻，放置2 h后按照1.3提取方法處理。結(jié)果表明，添加濃度在0.02～10 mg/kg范圍內(nèi)，環(huán)氟菌胺在土壤、小麥植株和小麥籽粒的平均回收率分別為78%～103%、91%～119%和85%～99%。相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為29%～9.5%、0.63%～14%和0.77%～53%。環(huán)氟菌胺在小麥植株、土壤和小麥籽粒中的最低檢測(cè)濃度均為0.02 mg/kg，符合殘留分析要求。

2.2 殘留消解動(dòng)態(tài)

2015年和2016年環(huán)氟菌胺在小麥植株中消解動(dòng)態(tài)見(jiàn)表1。由表可知，三地環(huán)氟菌胺在小麥植株中的消解動(dòng)態(tài)均符合一級(jí)動(dòng)力學(xué)方程式，2015年和2016年河南省試驗(yàn)點(diǎn)環(huán)氟菌胺在小麥植株中的原始沉積量分別為0.17 mg/kg和0.54 mg/kg，消解半衰期分別為5.1 d和3.4 d;黑龍江省試驗(yàn)點(diǎn)環(huán)氟菌胺在小麥植株中2015年和2016年的原始沉積量分別為7.60 mg/kg和4.80 mg/kg，消解半衰期分別為1.5 d和2.0 d;北京試驗(yàn)點(diǎn)環(huán)氟菌胺在小麥植株中2015年和2016年的原始沉積量分別為0.48 mg/kg和0.74 mg/kg，消解半衰期分別為1.5 d和2.2 d。

河南省試驗(yàn)點(diǎn)環(huán)氟菌胺在土壤中2015年和2016年的原始沉積量分別為0.41 mg/kg和0.68 mg/kg;黑龍江省試驗(yàn)點(diǎn)環(huán)氟菌胺在土壤中2015年和2016年的原始沉積量分別為0.40 mg/kg和0.26 mg/kg;北京市試驗(yàn)點(diǎn)環(huán)氟菌胺在土壤中2015年和2016年的原始沉積量分別為0.33 mg/kg和0.20 mg/kg。結(jié)果表明：環(huán)氟菌胺在土壤中的殘留降解較慢，無(wú)明顯降解趨勢(shì)，無(wú)法擬合出消解曲線，不能計(jì)算其半衰期。

2.3 小麥植株、籽粒和土壤中環(huán)氟菌胺的最終殘留量

2015年-2016年，11%環(huán)氟菌胺·戊唑醇懸浮劑以低劑量66 g/hm2和高劑量99 g/hm2于小麥白粉病發(fā)病期施藥2～3次，最后1次施藥后30、40、50 d采集小麥植株、土壤和小麥籽粒分析檢測(cè)。試驗(yàn)結(jié)果如表2，河南小麥植株中環(huán)氟菌胺最終殘留量的范圍為<0.02～0.271 mg/kg、黑龍江小麥植株中環(huán)氟菌胺最終殘留量的范圍為<0.02～0074 mg/kg、北京小麥植株中環(huán)氟菌胺最終殘留量的范圍為<0.02～0.077 mg/kg，三地小麥籽粒和土壤中環(huán)氟菌胺最終殘留量均<0.02 mg/kg。

2.4 環(huán)氟菌胺膳食風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

我國(guó)和國(guó)際食品法典委員會(huì)均未制定環(huán)氟菌胺的最大殘留限量[15]。如果沒(méi)有合適的STMRi值，可以使用相應(yīng)的最大殘留限量值。參考衛(wèi)生部2002年發(fā)布的中國(guó)不同人群消費(fèi)膳食分組食譜，我國(guó)城鄉(xiāng)居民的面粉及其制品的每日攝入量為0.138 5 kg。本試驗(yàn)中小麥籽粒的三地殘留量均在0.02 mg/kg以下。我國(guó)規(guī)定環(huán)氟菌胺的每日允許攝入量（ADI）為0.04 mg/kg，我國(guó)居民的平均體重為63 kg，根據(jù)1.4中公式（1）和（2）可計(jì)算出環(huán)氟菌胺普通人群的國(guó)家估計(jì)每日攝入量是0.002 77 mg，

占日允許攝入量的6.93%左右，認(rèn)為環(huán)氟菌胺在小麥中的殘留對(duì)一般人群健康的影響在一個(gè)可接受的風(fēng)險(xiǎn)水平。

3 討論

從兩年三地環(huán)氟菌胺在小麥和土壤中的殘留消解試驗(yàn)結(jié)果可以看出，環(huán)氟菌胺在黑龍江和北京試驗(yàn)點(diǎn)的小麥植株的消解半衰期較為相近，分別為15～2.0 d和1.5～2.2 d，而河南試驗(yàn)點(diǎn)環(huán)氟菌胺在小麥植株中的消解半衰期為3.4～5.1 d。三地環(huán)氟菌胺在土壤中的殘留降解較慢，試驗(yàn)期內(nèi)無(wú)明顯降解趨勢(shì)，暫無(wú)法獲得其半衰期。環(huán)氟菌胺在三地土壤中的原始沉積量較為相近，但在小麥植株中河南試驗(yàn)點(diǎn)與其余兩地試驗(yàn)點(diǎn)消解半衰期差異較明顯。推測(cè)可能與三地的氣溫，降雨量，空氣濕度有差異有關(guān)。據(jù)報(bào)道環(huán)氟菌胺在環(huán)境中的降解與降雨、光照有很大關(guān)系，在土壤中的降解與含水量、溫度、微生物的種類(lèi)、土壤pH以及有機(jī)質(zhì)的含量等因素有很大關(guān)系[4]。在同一地的小麥植株上，當(dāng)施藥劑量和采收間隔期相同時(shí)，殘留量隨著施藥次數(shù)的增加而增加。

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（責(zé)任編輯：楊明麗）