1 臨床癥狀及病因分析

布魯氏桿菌屬的牛種布魯氏桿菌是奶牛布魯氏桿菌病的病原，該病具有很強(qiáng)的傳染性，種別不同的布魯氏桿菌既可以感染牛宿主，還可以進(jìn)行惡性病菌轉(zhuǎn)移。潛伏期為2周～6個(gè)月。母牛流產(chǎn)是本病的主要癥狀，常發(fā)生于懷孕第5～8個(gè)月，產(chǎn)出死胎或軟弱犢牛。流產(chǎn)時(shí)除表現(xiàn)分娩征象外，常有生殖道發(fā)炎癥狀，陰道粘膜發(fā)生粟粒大小的紅色結(jié)節(jié)，流出灰白色粘性分泌物。胎衣往往滯留，流產(chǎn)后持續(xù)排出惡露，呈污灰色或棕紅色，可持續(xù)2～3周，常發(fā)生子宮內(nèi)膜炎、乳房炎。大多數(shù)母牛只流產(chǎn)1次。公牛常發(fā)生睪丸炎或關(guān)節(jié)炎、滑膜囊炎，有時(shí)可見陰莖紅腫，睪丸和附睪腫大。

2 獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室診斷方法及注意事項(xiàng)

2.1.1 虎紅平板凝集試驗(yàn) 虎紅平板凝集試驗(yàn)是一種簡單快捷的診斷方法，可在4min內(nèi)通過對凝集反應(yīng)結(jié)果的觀察作出患病診斷，這種診斷法通常應(yīng)用于陽性牛的初步篩選中。

實(shí)驗(yàn)方法，取一潔凈的板，畫成20mm×20mm的方格，每一格分別滴入等量的被檢血和虎紅抗原（約0.03mL，使用時(shí)先將抗原瓶搖動(dòng)，使之均勻懸?。?，攪動(dòng)血清和抗原使其混勻觀察結(jié)果。最后，結(jié)果判定如果在4min內(nèi)出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象者，判為陽性，反之則為陰性。

2.1.2 試管凝集反應(yīng) 這是我國當(dāng)下現(xiàn)行的適用于實(shí)驗(yàn)室操作的法定診斷法。被檢血清的稀釋，一般情況下奶牛血清作1:50、1:100、1:200和1:400四個(gè)稀釋度。被檢奶牛血清凝集價(jià)為1:100時(shí)，判定為陽性反應(yīng)；血清凝集價(jià)為1:50時(shí)判定為可疑反應(yīng)。

2.1.3 奶牛布病快速診斷試紙條 該方法屬于后期研發(fā)出的新型快速診斷法，也被成為膠體金法快速診斷試紙，具有快速、簡單和特異性高的特點(diǎn)，檢測準(zhǔn)確性與試管凝集試驗(yàn)的相符高達(dá)97.8%，一般情況下該種方法在初檢時(shí)應(yīng)用得較多。

2.1.4 ELISA 檢測法 相比于試管凝集反應(yīng)診斷和虎紅平板凝集試驗(yàn)，ELISA抗體檢測法在病理上陰性或陽性的判定上更能排除其他感染因素影響，大大降低了主觀判定伴隨的隨機(jī)性和不確定性。

2.2 細(xì)菌學(xué)診斷 最具可靠性和準(zhǔn)確性的實(shí)驗(yàn)室診斷方法就是分離布魯氏桿菌。從陰道分泌物、尿液、胎衣、膿汁、血液和臟器等組織做成涂片，選用沙黃、美藍(lán)鑒別法進(jìn)行染色，通過油鏡鏡檢觀察顏色變化，被染為紅色的即是布魯氏桿菌，呈現(xiàn)為藍(lán)色的是其他細(xì)菌。

3 布氏桿菌病檢測的生物安全問題

按照病原微生物名錄及生物安全評價(jià)， 對于布魯氏菌免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)、涂片、顯微觀察需在二級生物安全實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行操作；動(dòng)物感染實(shí)驗(yàn)需在動(dòng)物三級生物安全實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行；活菌分離、培養(yǎng)離心、菌種凍干需在三級生物安全實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行。對于二級及以上生物安全實(shí)驗(yàn)室必須配備生物安全柜，用于防護(hù)可能產(chǎn)生的氣溶膠。因此在進(jìn)行奶牛布氏菌相關(guān)操作時(shí)應(yīng)在生物安全柜中規(guī)范操作，做到對實(shí)驗(yàn)人員、實(shí)驗(yàn)環(huán)境和實(shí)驗(yàn)樣本的三重防護(hù)。

4 奶牛布魯氏桿菌病防控措施

第一，強(qiáng)化飼養(yǎng)管理。在落實(shí)定期進(jìn)行衛(wèi)生消毒的基礎(chǔ)上，提升飼喂科學(xué)性，適當(dāng)增加微生物制劑增強(qiáng)對奶牛體內(nèi)病原微生物的抑制作用，提高機(jī)體免疫力。第二，加大檢測力度。要對新購入的奶牛進(jìn)行嚴(yán)格的檢疫工作，在2月以上隔離飼養(yǎng)過程中對其進(jìn)行布魯氏桿菌病檢測，經(jīng)過重復(fù)檢驗(yàn)后結(jié)果均為陰性才能正式入場；要保證以正規(guī)渠道購買健康公牛凍精；牛群的日常管理要做好定期全群檢測，及時(shí)發(fā)現(xiàn)病牛并采取離場隔離等措施，通過反復(fù)的檢查和淘汰來凈化牛群。第三，以犢牛為切入口培養(yǎng)健康牛群?；诹己脟?yán)密的隔離條件，從健康公牛處獲取精液完成人工受精，經(jīng)過5～10d母牛初乳人工喂養(yǎng)后再進(jìn)行健康牛乳或者巴氏滅菌乳喂養(yǎng)。分別在第5個(gè)月和第9個(gè)月進(jìn)行免疫生物學(xué)檢測，結(jié)果均為陰性才可送入健康牛群。第四，構(gòu)建完整的牛場管理制度。以避免交叉感染為目的做到一畜一針的疫苗注射、一畜一消毒的人工受精器具；一旦有陽性奶牛被檢測出，就用濃度為2%的氫氧化鈉和濃度為15%的石灰乳對病牛污染的活動(dòng)場所以飼養(yǎng)道具等進(jìn)行消毒；對流產(chǎn)胎兒、羊水、產(chǎn)道分泌物以及胎衣等要給予妥善的消毒處理。

結(jié)束語：布魯氏桿菌的致病機(jī)理較為復(fù)雜，具有多樣性的免疫反應(yīng)，常用的診斷方法有血清凝集反應(yīng)、細(xì)菌學(xué)反應(yīng)、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)以及ELISA等檢測技術(shù)。近年來布魯氏桿菌病的發(fā)病率呈上升趨勢，這對我國畜牧業(yè)的持續(xù)穩(wěn)定發(fā)展而言可謂是一個(gè)巨大的威脅，甚至可能成為嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題。本文通過對病因和診斷方式的分析，就防控措施提出個(gè)人意見，愿為飼養(yǎng)和檢驗(yàn)工作提供一些借鑒信息。