隱孢子蟲(chóng)是主要寄生在哺乳動(dòng)物胃腸道上皮細(xì)胞刷狀緣的一種寄生原蟲(chóng),被感染后能夠引起人和動(dòng)物發(fā)生腹瀉。隱孢子蟲(chóng)在全世界范圍內(nèi)都有報(bào)道,各個(gè)年齡階段都動(dòng)物都可感染,嚴(yán)重的可以造成死亡。
目前已知的隱孢子蟲(chóng)達(dá)20多種,包括安氏隱孢子蟲(chóng)、牛隱孢子蟲(chóng)、貝氏隱孢子蟲(chóng)、微小隱孢子蟲(chóng)等。犢牛感染的隱孢子蟲(chóng)種主要有微小隱孢子蟲(chóng)、安氏隱孢子蟲(chóng)、牛隱孢子蟲(chóng)和瑞氏隱孢子蟲(chóng)。有研究表明,1907年Tyzzer在小鼠腸道中首次發(fā)現(xiàn)了隱孢子蟲(chóng),1971年在美國(guó)首次報(bào)道了牛隱孢子蟲(chóng)病。1986年在我國(guó)蘭州地區(qū)首次發(fā)現(xiàn)了犢牛隱孢子蟲(chóng)病,隨后我國(guó)其他地區(qū)也報(bào)道了牛隱孢子蟲(chóng)感染。
犢牛感染隱孢子蟲(chóng)后主要表現(xiàn)為精神沉郁、厭食和腹瀉,被感染犢牛的糞便呈灰白色或黃褐色,含有大量纖維素、血液和粘液,之后呈透明水樣糞便,嚴(yán)重的可引發(fā)死亡。奶牛隱孢子蟲(chóng)病的流行給我國(guó)奶牛養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)了巨大的經(jīng)濟(jì)損失,影響奶牛養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展,同時(shí)造成了畜產(chǎn)品質(zhì)量的下降。
隨著近年來(lái)我國(guó)牛進(jìn)口數(shù)量急劇增加,牛隱孢子蟲(chóng)病已成為當(dāng)前嚴(yán)重危害我國(guó)養(yǎng)殖業(yè)的傳染病之一,應(yīng)引起我們的高度重視。
1.1 實(shí)驗(yàn)室診斷
1.1.1 糞便采樣 對(duì)肉眼觀(guān)察有腹瀉、消瘦的犢牛進(jìn)行新鮮糞便采樣,每只犢牛采集約50g糞便分別裝在干凈的塑料袋內(nèi),登記奶牛場(chǎng)名稱(chēng),記錄好奶牛的年齡、品種,做好編號(hào)。
1.1.2 糞便處理及染色鏡檢 將采集的糞樣置于燒杯中,加入適量水,攪拌均勻后用160目銅篩過(guò)濾。濾液置于錐形量杯中3000r/min離心,棄去上清液,留下管底糞渣。將處理過(guò)的糞渣加飽和蔗糖溶液攪拌均勻,置于離心機(jī)中以3000r/min離心5min,吸取表層液于燒杯中,加6~10倍蒸餾水?dāng)噭?,再次置于離心機(jī)中以3000r/min離心10min,吸棄上清液,沉淀物中加2.5%重鉻酸鉀溶液清洗,收集卵囊,用鐵環(huán)沾取沉淀液于載玻片上,然后進(jìn)行應(yīng)用改良抗酸染色法染色,用玻片夾夾持涂片標(biāo)本,滴加石炭酸復(fù)紅2~3滴,在火焰高處徐徐加熱,切勿沸騰,出現(xiàn)蒸汽即暫時(shí)離開(kāi),若染液蒸發(fā)減少,應(yīng)再加染液,以免干涸,加3~5min,待標(biāo)本冷卻后用水沖洗。然后3%鹽酸乙醇脫色30~60s,用水沖洗。最后用堿性亞甲藍(lán)溶液復(fù)染1min,水洗,用吸水紙吸干后用顯微鏡觀(guān)察。
1.1.3 蟲(chóng)種鑒定 根據(jù)卵囊特征,在顯微鏡下觀(guān)察卵囊的大小、形態(tài)、形狀指數(shù)、顏色、有無(wú)卵膜孔、極帽的大小、形狀及有無(wú),有無(wú)孢子囊以及孢子囊的形態(tài)、大小,有無(wú)斯氏體、有無(wú)極粒,有無(wú)內(nèi)外殘?bào)w等,進(jìn)行卵囊種類(lèi)的鑒定。
1.2 免疫學(xué)診斷 隨著分子生物學(xué)技術(shù)研究進(jìn)展的不斷突破,在獸醫(yī)臨床中免疫學(xué)診斷越來(lái)越被得到廣泛應(yīng)用,免疫學(xué)診斷具有特異性強(qiáng)、敏感性高的特點(diǎn)。在對(duì)隱孢子蟲(chóng)進(jìn)行診斷時(shí)除了常見(jiàn)的實(shí)驗(yàn)室診斷之外還有酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)、間接免疫熒光法(IFA)、單克隆抗體(McAb)技術(shù)以及流式細(xì)胞技術(shù)(FC)等也被廣泛使用。目前獸醫(yī)臨床中普遍采用EIISA法測(cè)定宿主血清中特異性抗體,這種方法敏感度高,很少出現(xiàn)假陽(yáng)性,能提高確診率。
PCR不僅可用于各種樣品的檢測(cè),而且可用于區(qū)分隱孢子蟲(chóng)卵囊的類(lèi)型、鑒別蟲(chóng)種、判斷其來(lái)源,對(duì)于控制傳染源和疾病的流行具有重要的實(shí)用價(jià)值。PCR診斷試劑盒的問(wèn)世進(jìn)一步簡(jiǎn)化了操作過(guò)程,降低了檢測(cè)費(fèi)用,被廣泛使用于規(guī)?;B(yǎng)殖場(chǎng)對(duì)于隱孢子蟲(chóng)病的診斷與篩選。
犢牛隱孢子蟲(chóng)病在國(guó)內(nèi)外廣泛流行,但不同國(guó)家不同地區(qū)的犢牛隱孢子蟲(chóng)感染情況不盡相同,通常認(rèn)為隱孢子蟲(chóng)對(duì)宿主的感染多發(fā)生在潮濕、溫暖的季節(jié),但是不同地區(qū)隱孢子蟲(chóng)病的高發(fā)期不盡相同,有研究表明隱孢子蟲(chóng)在四個(gè)季節(jié)間的感染率差異不顯著。
眾多研究表明,已使用過(guò)上百種藥物對(duì)犢牛隱孢子蟲(chóng)病開(kāi)展治療,但任何一中藥物對(duì)該病的治療都沒(méi)有明確的治療效果,預(yù)防成為了防止?fàn)倥k[孢子蟲(chóng)病發(fā)生的重要手段。有文獻(xiàn)報(bào)道,使用高免牛初乳喂養(yǎng)犢牛,可使其體內(nèi)產(chǎn)生不完全保護(hù)性免疫,可使血清中的特異性抗體明顯升高,并能明顯縮短腹瀉的持續(xù)時(shí)間和卵囊排放時(shí)間。但需要注意的是,上述提到的高免牛初乳是需通過(guò)對(duì)孕牛進(jìn)行人工免疫所獲得的,而自然感染隱孢子蟲(chóng)母牛的牛乳對(duì)犢牛隱孢子蟲(chóng)病無(wú)明顯的防治效果。還有文獻(xiàn)報(bào)道,在小牛在出生后的第10~14d口服磺胺二甲嘧啶可有效防止?fàn)倥k[孢子蟲(chóng)的發(fā)生和混合感染。
犢牛隱孢子蟲(chóng)病的傳播途徑廣泛,帶蟲(chóng)宿主、被卵囊污染的水源、飼料等都可成為該病的傳染源,消化道是主要的傳播途徑。在做好犢牛自身預(yù)防的同時(shí),還要加強(qiáng)對(duì)圈舍扥定期清掃和消毒,控制圈舍的環(huán)境衛(wèi)生,科學(xué)選擇消毒藥物。