孔維恒 槐 碩 邱 燁 王 翔 祝天宇 劉 鑫* 郝 欣 李盈盈

(1.中國海關(guān)科學(xué)技術(shù)研究中心, 北京 100026；2.北京林電偉業(yè)電子技術(shù)有限公司, 100097；3.北京北分瑞利分析儀器(集團)有限責(zé)任公司, 北京 100095; 4.全國海關(guān)信息中心, 北京 100026)

1 引言

人參具有較高的保健、藥用價值，具有“百草之王”的美譽，具有補益脾肺、生津養(yǎng)血、安神益智等多種功效[1]，在全球范圍內(nèi)被廣泛應(yīng)用于改善心血管循環(huán)、提高免疫力、抗腫瘤等治療[2-4]。皂苷是人參中的主要活性成分之一，目前,國內(nèi)外學(xué)者已經(jīng)從人參屬植物中發(fā)現(xiàn)了一百多種人參皂苷類化合物[5],其含量分析測定方法有很多，其中高效液相色譜法的應(yīng)用較為普遍。

在全球主要國家藥典中收載的人參藥材質(zhì)量標注多以Rg1、Re、Rb1的含量為指標進行質(zhì)量控制[6]，為了對人參制劑或藥材的質(zhì)量更精確的把控，本實驗在參考國家藥典，應(yīng)用高效液相色譜法對包含Rg1、Re、Rb1、Rd、Rc、Rf、Rb2、Rb3的8種人參皂苷實現(xiàn)了分離、建立了適用于8種人參含量測定的分析方法。

2 實驗部分

2.1 儀器與設(shè)備

實驗中所采用的儀器與設(shè)備詳細信息見表1。

表1 儀器與設(shè)備

2.2 實驗試劑

實驗中所使用的試劑詳細信息見表2。

表2 實驗試劑

2.3 色譜條件

色譜柱：C18色譜柱(4.6mm×250mm，5μm)；柱溫：25℃；流動相：乙腈(A)-0.1% 磷酸水溶液(B)；進樣量：20μL。梯度洗脫程序見表3。

表3 梯度洗脫程序

2.4 標準溶液的配制

2.4.1標準儲備液

分別準確稱取Rg1、Re、Rf、Rb1、Rc、Rb2、Rb3、Rd，16.27mg、19mg、6.56mg、8.95mg、6.51mg、6.87mg、8.51mg、7.56mg于10mL容量瓶中，用色譜級甲醇定容，備用。

2.4.2標準溶液

分別準確取50μL、500μL、800μL、2500μL標準儲備液，用甲醇定容至5mL，制備成8種皂苷混合工作曲線的4個濃度點，另取5mL標準儲備液(2.4.1)為第5個濃度點。過0.45μm有機濾膜，裝入液相進樣瓶中，備用。

3 結(jié)果與討論

3.1 色譜分離

在擬定的色譜條件下，8種人參皂苷的色譜峰可基本分離(圖1)。

圖1 8種人參皂苷的分離色譜圖

3.2 線性關(guān)系考察

按照2.4.2制備好的各濃度標準，分別進樣20μL，得到標準曲線結(jié)果見表4。

表4 線性考察結(jié)果

3.3 儀器精密度

取0.1mg/mL的8種人參皂苷混合標樣，重復(fù)進樣5次進行HPLC測試，計算8種皂苷的峰面積RSD值均小于1%，結(jié)果見圖2及表5。

圖2 精密度測試

表5 精密度測試數(shù)據(jù)

3.4 空白加標回收試驗

本方法的準確性通過空白加標回收試驗來考察。分別制備低、中、高3個不同濃度的8種皂苷的混合標液，加入到甲醇溶液中，進樣3次取平均值。同時甲醇溶液進樣3次作為空白數(shù)據(jù)，試驗數(shù)據(jù)見表6。

表6 空白加標回收試驗數(shù)據(jù)

4 實驗總結(jié)

本實驗中，通過使用SY-9100液相色譜儀，在25℃柱溫條件下，采用梯度洗脫程序，實現(xiàn)了對8種人參皂苷的分離測定。為了保證實驗方法的準確性，對儀器的精確度、8種皂苷的線性、空白加標回收等指標進行測定。實驗結(jié)果表明，標準曲線線性良好，相關(guān)系數(shù)均大于0.999。0.1mg/mL的8種人參皂苷混合標樣重復(fù)5次進樣的測量結(jié)果，峰面積RSD<1.0%，儀器的精密度優(yōu)越?？瞻准訕嘶厥赵囼?，分別在甲醇中加入了低、中、高個濃度進行定量測試，回收率均在93.42%～108.58%，說明該方法具有良好的穩(wěn)定性及準確度。