王榮慧，吳 虹 ，王夢(mèng)蝶，鄧 然，王 言，戴學(xué)靜，占 翔，孫明慧，卜妍紅，張 衡

(1.安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，安徽 合肥 230012； 2.新安醫(yī)學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，安徽 合肥 230012；3. 中藥復(fù)方安徽省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，安徽 合肥 230012)

中藥梔子是茜草科植物梔子GardeniajasminoidesEllis的干燥成熟果實(shí)，具有廣泛的藥理學(xué)作用[1]。梔子含有梔子苷、綠原酸、藏紅花素等活性成分[2]，具有保肝利膽、抗炎、抗抑郁、抗氧化、神經(jīng)保護(hù)等多種藥理活性，對(duì)糖尿病肝臟損傷、抑郁癥、自身免疫性疾病有一定的防治作用[3-4]。其中，梔子苷作為中藥梔子的主要活性成分在治療肝臟疾病方面發(fā)揮了重要的作用。然而，近年來(lái)研究表明，梔子苷具有肝臟毒性，這使得梔子苷的應(yīng)用受到了一定的限制，阻礙了臨床處方中梔子的廣泛使用?，F(xiàn)就梔子苷對(duì)肝臟的保護(hù)與致毒作用機(jī)制作一綜述，為梔子的臨床應(yīng)用提供參考。

1 梔子苷對(duì)肝臟保護(hù)作用研究

肝臟是人體內(nèi)最大的器官，也是新陳代謝最主要的器官，具有一定的解毒作用。一般藥物主要通過該器官代謝，藥物本身或其代謝產(chǎn)物會(huì)對(duì)肝臟造成不同程度的損傷[5]，常見于藥源性肝損傷。此外，一些不良的生活習(xí)慣、病原體感染、代謝障礙等，也會(huì)對(duì)肝臟造成一定的損傷。在研究過程中，大多數(shù)動(dòng)物肝損傷性模型是由四氯化碳(carbon tetrachloride, CCl4)所構(gòu)建。CCl4是一種毒性物質(zhì)，具有促進(jìn)肝臟脂肪沉積以及小葉中央壞死的作用。Tian等[6]研究發(fā)現(xiàn)，茵陳蒿湯具有肝臟保護(hù)作用，其成分中梔子苷含量最高，由此推斷在一定劑量范圍內(nèi)，梔子苷是茵陳蒿湯的主要藥效物質(zhì)，對(duì)肝損傷具有一定的保護(hù)作用。而吳歡等[7]對(duì)正常大鼠灌胃60 mg/kg 梔子苷后，發(fā)現(xiàn)腎臟與肝臟藥物濃度最高，且梔子苷有較好的生物利用度，在體內(nèi)有較好的吸收。

梔子苷對(duì)肝臟的保護(hù)作用，是通過不同的機(jī)制效應(yīng)來(lái)實(shí)現(xiàn)的。其中對(duì)乙酰氨基酚(acetaminophen, APAP)對(duì)肝細(xì)胞具有明顯的毒性損傷作用，能夠造成藥源性肝損傷。Yang等[8]觀察梔子苷對(duì)APAP造成的急性肝損傷模型小鼠的影響，結(jié)果顯示，梔子苷能夠通過下調(diào)CYP2E1肝微粒體酶活性，同時(shí)抑制TLR4/NF-κB信號(hào)通路的表達(dá)，減少前炎癥因子的釋放，進(jìn)一步減弱免疫性肝損傷，從而有效地保護(hù)肝細(xì)胞免受藥物的毒性影響。

梔子苷在臨床相關(guān)肝臟疾病的治療中發(fā)揮重要作用。肝纖維化是肝細(xì)胞外間隙Ⅰ型膠原蛋白沉積增多的結(jié)果，會(huì)導(dǎo)致肝實(shí)質(zhì)和肝結(jié)構(gòu)的破壞。轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(transforming growth factor β1, TGF-β1)在肝纖維化的發(fā)病機(jī)制中起著至關(guān)重要的作用，是膠原蛋白生成的有力誘導(dǎo)劑。小鼠體外研究結(jié)果表明，梔子苷對(duì)TGF-β1誘導(dǎo)的Ⅰ型膠原表達(dá)有明顯的抑制作用，且信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白Smad 2/3、細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(extracellular signal regulated kinase, ERK)和蛋白激酶B(protein kinase B, PKB)即AKT的磷酸化幾乎完全阻斷。Smad 2/3已被證明是TGF-β1誘導(dǎo)上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化的關(guān)鍵效應(yīng)因子。由此可以推測(cè)，梔子苷能抑制TGF-β1誘導(dǎo)的肝纖維化，這種效應(yīng)可能與抑制TGF-β1/Smad及ERK/MAPK信號(hào)通路有關(guān)[9]。

Rong等[10]對(duì)缺血性再灌注模型造成的肝臟損傷進(jìn)行研究，結(jié)果表明梔子苷能夠誘導(dǎo)PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路的激活，其中mTOR能夠進(jìn)一步抑制炎癥和細(xì)胞凋亡，對(duì)肝臟損傷具有一定的保護(hù)作用。此外，有研究顯示梔子苷對(duì)該類肝臟損傷的保護(hù)作用與其減少氧化應(yīng)激，抑制相關(guān)細(xì)胞凋亡相關(guān)[11]。

李原明[12]觀察梔子提取物對(duì)酒精性肝臟損傷模型大鼠的影響，結(jié)果顯示梔子提取物可能通過下調(diào)炎癥因子水平，如腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor α, TNF-α)、白介素6(interleukin 6, IL-6)，同時(shí)促進(jìn)脂肪代謝，清除肝組織內(nèi)自由基等，發(fā)揮保肝作用。

2 梔子苷的肝毒性研究

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，梔子苷致大鼠出現(xiàn)明顯肝損傷的劑量為300 mg/kg，換算為60 kg人體用量約為16.48 mg/kg，而臨床中推薦梔子苷治療劑量約為10 mg/kg(依據(jù)梔子苷在梔子中含量為1.8%～6%換算得到)，推測(cè)梔子苷造成的肝毒性與臨床治療劑量相關(guān)[13]。

2.1 肝毒性表現(xiàn) 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中具有明顯肝毒性的大鼠，通常表現(xiàn)為精神萎靡不振，皮毛不凈，墊料藍(lán)染等[14]。病理學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，肝毒性表現(xiàn)為肝臟質(zhì)量增加，局灶性壞死和肝細(xì)胞的明顯炎癥浸潤(rùn)等[15]。此外，由于肝細(xì)胞受損，細(xì)胞膜通透性增加，天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(aspartic aminotransferase, AST)，谷氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alanine aminotransferase, ALT)由細(xì)胞內(nèi)逸出導(dǎo)致血清中響應(yīng)值增高。由于檢測(cè)結(jié)果較為靈敏，甘氨酸N-甲基轉(zhuǎn)移酶(glycine N-methyl transferase, GNMT)和糖原磷酸化酶(glycogen phosphorylase, PYGL)可作為早期出現(xiàn)肝毒性生物標(biāo)志物[16]。

2.2 肝毒性原因 梔子苷已被證實(shí)具有保肝利膽的作用，但在某些條件下，梔子苷對(duì)肝臟的作用，可轉(zhuǎn)變?yōu)橥耆喾吹闹露咀饔谩?/p>

不同種屬動(dòng)物對(duì)梔子苷肝毒性的表現(xiàn)存在差異。劉琦等[17]給予小鼠梔子苷灌胃處理后，發(fā)現(xiàn)小鼠在430 mg/kg劑量下肝毒性不明顯，在860 mg/kg劑量下才出現(xiàn)明顯的中毒表現(xiàn)。而Tian等[13]研究顯示，當(dāng)梔子苷劑量大于280 mg/kg時(shí)，肝毒性表現(xiàn)已經(jīng)較為明顯。

不同給藥途徑造成肝臟損傷的程度存在差異。楊明等[18]比較梔子苷3種不同給藥方式對(duì)肝臟造成毒性損傷的影響，發(fā)現(xiàn)肌肉注射的梔子苷生物利用度最高，滴鼻的梔子苷生物利用度次之，灌胃的梔子苷生物利用度最低。王智勇等[19]實(shí)驗(yàn)研究顯示，梔子苷灌胃、口服的給藥方式相比較滴鼻、肌肉注射的給藥方式對(duì)肝臟指數(shù)影響較大，顯著增加肝臟質(zhì)量，由此認(rèn)為梔子苷口服、灌胃對(duì)肝臟的毒性較大。

不同劑量梔子苷對(duì)肝臟的作用存在明顯差異性。梔子苷體內(nèi)代謝分析研究顯示，28～100 mg/kg梔子苷對(duì)肝臟具有保護(hù)作用；對(duì)比不同給藥劑量后發(fā)現(xiàn)，梔子苷對(duì)大鼠半數(shù)致死劑量為1 431.1 mg/kg，且肝毒性呈劑量依賴性，劑量越大，毒性越大[20]，即過量梔子苷能夠產(chǎn)生肝毒性。Wei等[21]從基因水平上探究過量劑量梔子苷產(chǎn)生毒性反應(yīng)的機(jī)制，發(fā)現(xiàn)梔子苷在治療劑量與過量劑量中具有不同的靶轉(zhuǎn)錄因子，治療劑量下的梔子苷能夠抑制HNF-1ɑ、HNF-4ɑ及PPAR-ɑ靶轉(zhuǎn)錄因子；過量劑量下的梔子苷與能夠引起肝臟損傷靶轉(zhuǎn)錄因子Atf、Jun、Hmga、Irf及Etv的激活相關(guān)，深入闡明梔子苷產(chǎn)生肝毒性的原因與其給藥劑量相關(guān)。

另有研究提出，梔子苷出現(xiàn)肝毒性主要是由其代謝產(chǎn)物京尼平二醛中間體造成的，而腸道中pH值能夠決定這一產(chǎn)物合成，推測(cè)肝毒性呈pH依賴性[22]。

2.3 肝毒性機(jī)制 梔子苷肝毒性機(jī)制可能與其半縮醛結(jié)構(gòu)相關(guān)，Che等[15]對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行改造，通過甲基化梔子苷的C-1位，得到梔子苷衍生物甲基京尼平，實(shí)驗(yàn)中大劑量使用該新合成的產(chǎn)物，毒性作用明顯減弱且藥效不變。另外，在腸道菌群的作用下，梔子苷能夠水解為京尼平(genipin, GP)，GP又可再與一些親核分子結(jié)合，造成肝臟毒性。水解后的GP又可自發(fā)地轉(zhuǎn)變?yōu)槎┲虚g體，共價(jià)結(jié)合肝蛋白游離賴氨酸殘基的伯胺基團(tuán)，在梔子苷肝毒性中起關(guān)鍵作用，且毒性與結(jié)合賴氨酸后的GP含量相關(guān)[22]。

中藥對(duì)肝細(xì)胞的氧化損傷主要檢測(cè)指標(biāo)有活性氧(reactive oxygen species, ROS)、丙二醛(malondialdehyde, MDA)、總超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、谷胱甘肽(glutathione, GSH)等，其中MDA與SOD在肝細(xì)胞損傷協(xié)調(diào)機(jī)制中起著關(guān)鍵作用。通過對(duì)梔子苷在體內(nèi)代謝初步分析發(fā)現(xiàn)，梔子苷在腸道菌群下水解得到的GP可引起ROS含量增加，進(jìn)一步導(dǎo)致缺血再灌注肝損傷[11,24]。也有研究表明，梔子苷所致肝毒性可能與氧化應(yīng)激有關(guān)，梔子苷以861 mg/kg劑量給大鼠灌胃，肝組織中MDA水平上升，SOD水平下降，而小劑量組未有明顯差異[20]。然而，另有研究發(fā)現(xiàn)，梔子苷以840 mg/kg劑量給小鼠灌胃，MDA水平較正常組并未有明顯差異[25]。這也提示梔子苷造成氧化應(yīng)激反應(yīng)引起的肝臟毒性可能與受試對(duì)象不同相關(guān)，且與劑量呈正相關(guān)，僅大劑量的梔子苷可能會(huì)出現(xiàn)肝毒性，而一般臨床用藥劑量不會(huì)出現(xiàn)氧化應(yīng)激反應(yīng)造成的肝損傷。

肝臟中含有藥物代謝所需的許多酶類，其中CYP3A2是一類重要的CYP酶亞型，參與多種內(nèi)源性、外源性物質(zhì)的代謝，其活性高低與藥物的療效或毒性反應(yīng)密切相關(guān)。周淑娟等[26]對(duì)梔子苷造成肝毒性的大鼠進(jìn)行毒理學(xué)研究分析，發(fā)現(xiàn)在62.5 mg/kg梔子苷干預(yù)下，肝微粒體酶CYP3A2活性較高，而在250 mg/kg梔子苷干預(yù)下，CYP3A2酶活力反而降低。同時(shí)，300 mg/kg梔子苷能夠使肝微粒體酶CYP7A1失調(diào)，提示梔子苷造成肝毒性的機(jī)制與藥物代謝酶的失調(diào)相關(guān)。此外，300 mg/kg劑量的梔子苷會(huì)導(dǎo)致膽汁酸合成增加，而膽汁酸的淤積會(huì)進(jìn)一步導(dǎo)致線粒體損傷，激發(fā)ROS和活性氮物質(zhì)誘導(dǎo)的病理效應(yīng)，引起肝臟損傷[13]。

綜上所述，梔子苷造成肝毒性的機(jī)制與其半縮醛結(jié)構(gòu)相關(guān)。在人體腸道菌群的作用下，梔子苷能夠水解為GP，GP的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)也可進(jìn)一步造成肝臟損傷。由此推測(cè)，梔子苷代謝物GP可能為肝毒性的物質(zhì)基礎(chǔ)。大劑量梔子苷給藥，會(huì)引起氧化應(yīng)激反應(yīng)，導(dǎo)致肝臟損傷。藥物代謝酶活性異常可能是梔子苷引起肝毒性的機(jī)制之一。同時(shí)，膽汁酸的淤積、線粒體損傷，可進(jìn)一步引起一系列的病理效應(yīng)，加劇肝臟的損傷。

目前，已有學(xué)者對(duì)梔子苷致肝毒性進(jìn)行分子水平上的研究，利用毒理基因組學(xué)對(duì)與肝臟毒性相關(guān)基因進(jìn)行篩選，確立了5個(gè)可能與肝毒性相關(guān)的靶基因，分別為Bcl2、Aldob、Norb2、Cyp2C23、Collα1，這5個(gè)標(biāo)志基因的確證，為日后深入研究梔子苷肝毒性機(jī)制奠定了基礎(chǔ)[27]。

3 結(jié)語(yǔ)

梔子作為傳統(tǒng)中藥廣泛應(yīng)用于臨床，其活性成分梔子苷已被證實(shí)可用于多種疾病的治療，包括自身免疫性疾病、心血管疾病等。目前，臨床中尚未出現(xiàn)有關(guān)梔子苷不良反應(yīng)的報(bào)道，但在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示其具有肝毒性。梔子苷具有保肝利膽的藥理活性，對(duì)多種原因的肝臟損傷有良好的防治作用，而其肝毒性則限制梔子的臨床應(yīng)用。梔子苷對(duì)肝臟的毒性作用與其用藥劑量、受試對(duì)象、給藥途徑以及腸道的pH值的差異相關(guān)。這也提示，梔子的臨床用藥需要制定合理的用藥劑量、用藥周期，切勿過量。因患者個(gè)體具有差異性，在臨床用藥過程中，需進(jìn)行血藥濃度監(jiān)測(cè)，制定個(gè)體化給藥方案，在發(fā)揮梔子治療作用的同時(shí)，避免不良反應(yīng)的發(fā)生。相關(guān)研究表明，口服給藥對(duì)于肝臟毒性的影響較大，由此，可以借助藥物輔料的方式，開發(fā)更為安全的藥物劑型。

國(guó)內(nèi)外對(duì)梔子苷保肝利膽的作用研究較多，而對(duì)梔子苷代謝產(chǎn)物的研究較少，其代謝產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)、代謝途徑、藥理作用等有待進(jìn)一步評(píng)價(jià)。梔子苷具體的保護(hù)作用機(jī)制尚未明確，需進(jìn)行更加全面的評(píng)價(jià)與研究，以闡明其藥理作用的真正分子基礎(chǔ)。目前，有關(guān)梔子苷肝毒性作用研究較少，基本停留于動(dòng)物或者細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中。前期研究提示，梔子苷肝毒性種屬差異性較為明顯，對(duì)人出現(xiàn)肝毒性的劑量還未明確。此外，一些研究認(rèn)為梔子苷在腸道菌群作用下水解得到的GP為肝毒性物質(zhì)基礎(chǔ)。梔子苷進(jìn)入體內(nèi)后受β-葡萄糖苷酶作用轉(zhuǎn)化為GP的量是否會(huì)影響肝臟毒性？梔子苷與其代謝產(chǎn)物GP對(duì)肝臟具有雙重作用，其作用途徑與其在體內(nèi)血藥濃度是否相關(guān)？其作用機(jī)制及其分子基礎(chǔ)是什么？這些都有待于進(jìn)一步研究。