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        GC-MS分析四川主產(chǎn)地竹葉花椒的揮發(fā)性成分

        2020-12-21 09:44:04徐雙美楊森李澤娜楊丹陳鴻平劉友平
        中國調(diào)味品 2020年12期

        徐雙美,楊森,李澤娜,楊丹,陳鴻平,劉友平

        (成都中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院,成都 611137)

        1 概述

        竹葉花椒(ZanthoxylumarmatumDC.)為蕓香科(Rutaceae)花椒屬(Zanthoxylum)植物。近年來,以竹葉花椒及其栽培品種為主的青花椒產(chǎn)業(yè)迅速發(fā)展,在四川省已經(jīng)形成的川西、川中、攀西3個花椒特色優(yōu)勢種植區(qū)中,除了以漢源為代表的川西為紅花椒集中區(qū)外,以鹽邊縣、鹽源縣、金陽等為代表的攀西地區(qū)和以平昌縣、通江縣、渠縣等為代表的川中地區(qū)都為竹葉花椒集中區(qū),且多為地方收載品種[1]。在使用方面,竹葉花椒品種可作為藥用植物、觀賞植物、烹飪用途的重要來源,因此這種植物不僅用于制藥,如驅(qū)蟲、腹痛、牙痛、消化不良等[2-5],也用于調(diào)味品和香料工業(yè)[6-7]。

        不同產(chǎn)地竹葉花椒中揮發(fā)性物質(zhì)的組成和含量易受氣候條件(日照時間、降水量、干燥度、氣溫等)以及土壤特性等的影響而存在差異,因此,近年來對各品種花椒的揮發(fā)性物質(zhì)也進行了一系列的研究。如Liu等[8]分析鑒定出竹葉花椒32種香味活性化合物,其中芳樟醇的氣味活性值(OAV)最高,對香氣貢獻最大。Nirmala Phuyal等[9]發(fā)現(xiàn)尼泊爾竹葉花椒葉揮發(fā)性組分中含量較高的3種主要有芳樟醇、檸檬烯和十一烯-2-酮。王思思等[10]將4大產(chǎn)區(qū)紅花椒樣品分為三類,即西南地區(qū)一類,西北地區(qū)一類,華東、華北一類。袁華偉等[11]也從香辛料花椒中鑒定出主要揮發(fā)性成分芳樟醇。蒲鳳琳等[12]發(fā)現(xiàn)藥典記載的青、紅花椒主要揮發(fā)性物質(zhì)為芳樟醇,但青花椒中的含量高于紅花椒。

        2 實驗部分

        2.1 儀器與試劑

        GC-MS-QP 2010 Ultra氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀、AOC-5000 Plus頂空進樣器、Agilent 19091S-433柱(30.0 m×0.25 mm×0.25 μm) 美國Agilent公司;AUW220D分析天平 賽多利斯科學(xué)儀器有限公司;CNW 20 mm鉗口20 mL平底透明頂空樣品瓶。α-Al2O3粉末為分散劑(批號:Lot.No. JF4A,日本島津公司)。

        2.2 樣品收集

        竹葉花椒樣品見表1。

        表1 竹葉花椒樣品Table 1 The samples of Zanthoxylum armatum DC.

        續(xù) 表

        2.3 樣品制備

        精密稱取竹葉花椒粉末(過60目篩)1.00 g,置于20 mL頂空瓶中,密封,置于靜態(tài)頂空進樣器中,在180 ℃下加熱60 min。

        2.4 氣相色譜-質(zhì)譜條件[13]

        2.4.1 頂空條件

        頂空保溫平衡溫度:180 ℃;頂空保溫平衡時間:30 min;水平往復(fù)振蕩器振蕩速率:250 r/min;進樣針溫度:100 ℃;進樣量:1.0 mL;進樣針沖洗時間:2 min。

        2.4.2 色譜條件

        色譜柱:Agilent 19091S-433柱(30.0 m×0.25 mm×0.25 μm);進樣口溫度:109 ℃;載氣:高純氦氣;升溫程序:50 ℃開始以2 ℃/min升至120 ℃,保持35 min,以5 ℃/min升至240 ℃,保持27 min;線速度:36.5 cm/s;分流比:20∶1;進樣體積:1 mL。

        2.4.3 質(zhì)譜條件

        離子源:EI;離子源溫度:230 ℃;電子能量:70 eV;電離電壓:1.0 kV;接口溫度:250 ℃;質(zhì)量掃描范圍:45~500 m/z,掃描時間:2.50~60.00 min;溶劑延時:2 min。

        2.4.4 數(shù)據(jù)處理

        數(shù)據(jù)采用Excel 2013及SPSS 20.0進行相似度評價以及主成分分析等處理。圖形采用Origin 2015繪制。

        2.5 結(jié)果與分析

        2.5.1 頂空GC-MS揮發(fā)性成分檢測結(jié)果

        22個產(chǎn)地竹葉花椒樣品揮發(fā)性成分的總離子流圖見圖1,結(jié)果見表2(按平均含量高低列出)。

        圖1 不同產(chǎn)地揮發(fā)性成分總離子流圖Fig.1 The total ion flow diagram of volatile components from different places of origin

        表2 不同產(chǎn)地揮發(fā)性成分相對含量Table 2 The relative content of volatile components from different places of origin

        續(xù) 表

        續(xù) 表

        2.5.2 初步統(tǒng)計分析

        由表2可知,22個產(chǎn)地累計鑒別出75個成分,其中S21通江縣樣品鑒定出的揮發(fā)油成分數(shù)最多,有37個,其次是S14鹽源縣和S16三臺縣樣品有30個,S15渠縣、S17夾江縣樣品有27個,S11大英縣、S12米易縣、S13平昌縣有26個,22個產(chǎn)地共有揮發(fā)性成分有11個,這些共有成分的總相對含量超過82%,表明這22個產(chǎn)地的揮發(fā)性成分相似。

        選取共有成分化合物做百分比堆積柱形圖(見圖2),這11種化合物在各地樣品揮發(fā)性成分總量中占比達82.89%~94.69%,并且主要為烯類、醇類。

        圖2 四川22個產(chǎn)地竹葉花椒共有成分百分比堆積圖Fig.2 The total composition percentage of 22 Zanthoxylum armatum DC. samples from different producing areas in Sichuan Province

        由圖2可知,芳樟醇、檸檬烯和側(cè)柏烯在各個產(chǎn)地占的比值都比其他組分大,因此竹葉花椒的主要揮發(fā)性成分有芳樟醇、檸檬烯和側(cè)柏烯,而S18寧南縣樣品的芳樟醇相對含量最高,為56.54%;S14鹽源縣樣品的檸檬烯相對含量最高,為44.46%;S22德昌縣樣品的側(cè)柏烯相對含量最高,為21.89%??芍?2個不同產(chǎn)地樣品揮發(fā)性主要成分含量差異較為明顯。

        2.5.3 多元統(tǒng)計分析2.5.3.1 主成分分析

        按照KMO(Kaiser-Meyer-Olkin)和Bartlett球形度檢驗結(jié)果,選取22個樣品全部共有成分組成11×22階矩陣進行主成分分析。此時的KMO檢驗結(jié)果為0.648,非常接近0.7(Kaiser給出的一般KMO度量標準),可以進行因子分析。將選取的數(shù)據(jù)導(dǎo)入SPSS 20.0中進行主成分分析,得載荷圖(見圖3),2個主成分的方差貢獻率分別為93.417%和4.548%,累計方差貢獻率為97.965%。

        圖3 22個產(chǎn)地竹葉花椒主成分分析載荷圖Fig.3 The load diagram of principal component analysis of Zanthoxylum armatum from 22 places of origin

        由圖3可知,采用主成分分析法可以將22個種植區(qū)樣品分成兩類。第一類C1有S1、S2、S3、S5、S9、S12、S13、S21,第二類C2有S4、S6、S7、S8、S10、S11、S14、S15、S16、S17、S18、S19、S20、S22。即C1有峨眉山、平昌縣、瀘縣、南充營山縣、南充儀隴縣、米易、平昌縣、通江縣,C2有洪雅縣、冕寧縣、德昌縣、布拖縣、大英縣、鹽源縣、達州渠縣、綿陽三臺縣、樂山夾江縣、寧南縣、西昌縣、金陽縣、由此看出,C1類產(chǎn)地多集中于川中地區(qū),C2類產(chǎn)地多集中于攀西地區(qū),并且涼山彝族自治州也都集中于C2類。

        2.5.3.2 相似度評價

        為得到聚類分析中兩個類別內(nèi)各樣品的相似度,使用SPSS 20.0做Pearson相關(guān)性分析,得相關(guān)系數(shù)矩陣表(見表3)。

        表3 竹葉花椒揮發(fā)性成分相關(guān)系數(shù)矩陣Table 3 The correlation coefficient matrix of volatile components in Zanthoxylum armatum

        由表3可知,第一類樣品的相似度在0.883~0.995之間,第二類樣品的相似度在0.701~0.999之間。根據(jù)各成分的標準偏差,芳樟醇、側(cè)柏烯和檸檬烯的標準偏差最大且含量最高,所以芳樟醇、側(cè)柏烯和檸檬烯在這兩類樣品中的含量差異是造成上述分類結(jié)果的主要原因。同時第二類中雖然S14鹽源縣和S22德昌縣屬于同一個州,但其芳樟醇、側(cè)柏烯和檸檬烯的相對含量差異較大,導(dǎo)致它們的相似度只有0.701。

        2.5.3.3 兩個類別差異分析

        得出22個樣品表現(xiàn)出具有明顯差異的兩個類別C1和C2,分別對這兩個類別進行統(tǒng)計對比,發(fā)現(xiàn)C1類樣品的成分一共有37個,而C2類的有27個,C1和C2類相對含量前三的均是芳樟醇、檸檬烯、側(cè)柏烯,其次是β-月桂烯、γ-松油烯。C1類中芳樟醇、檸檬烯、側(cè)柏烯的平均總相對含量均高于C2類,由于C1類產(chǎn)地多集中于川中地區(qū),C2類產(chǎn)地多集中于攀西地區(qū),川中地區(qū)的揮發(fā)性組分和含量可能高于攀西地區(qū)。在非共有成分上,C1類有共同成分乙酸芳樟酯,C2類有共同成分α-松油醇,同時C2類中的涼山彝族自治州還有共同成分順式羅勒烯、萜品醇、乙酸芳樟酯、大根香葉烯D。

        2.5.4 結(jié)論與討論

        利用頂空-氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)檢測出四川22個產(chǎn)地揮發(fā)性成分75個,其中共有成分11種,分別包含有醇類物質(zhì)1種、烯類物質(zhì)9種、烯烴物質(zhì)1種,含量較高的共有成分有:芳樟醇、檸檬烯、側(cè)柏烯,其次是β-月桂烯、γ-松油烯。總相對含量超過82%,表明這22個產(chǎn)地的揮發(fā)性成分相似,但是主要成分含量相差較大,使得其在統(tǒng)計結(jié)果上呈現(xiàn)出有差異的兩個類別,C1類產(chǎn)地多集中于川中地區(qū),C2類產(chǎn)地多集中于攀西地區(qū)。C1類樣品的成分一共有37個,而C2類的有27個,C1和C2類相對含量前三的均是芳樟醇、檸檬烯、側(cè)柏烯,其次是β-月桂烯、γ-松油烯。C1類中芳樟醇、檸檬烯、側(cè)柏烯的平均總相對含量均高于C2類,在非共有成分上,C1類有共同成分乙酸芳樟酯,C2類有共同成分α-松油醇,因此,這兩個成分可能是區(qū)分不同產(chǎn)地竹葉花椒的關(guān)鍵化合物。

        竹葉花椒揮發(fā)性組分的不同賦予其特有的香氣特征。11種特征物中,芳樟醇具有催眠、抗抑郁、抗氧化以及抗衰老等作用,并伴有清甜的花香和木香,檸檬烯有檸檬果香,側(cè)柏烯有殺蟲劑味,β-月桂烯有清涼、中藥味,萜品烯有甜味,松油醇有清香、樹脂香,α-蒎烯有松木香、樹脂香,α-水芹烯有柑橘香、清香、黑胡椒香,γ-松油烯有柑橘香、萜香,石竹烯有辛香、木香、柑橘香、樟腦香,α-松油醇有類似紫丁香的清香,這22個產(chǎn)地的共有成分均是香氣活性成分。C1類芳樟醇、檸檬烯、側(cè)柏烯、β-月桂烯相對含量較高,說明其香氣偏花香和木香。有研究表明,竹葉花椒藥材揮發(fā)油樣品主要含有芳樟醇、檸檬烯、乙酸芳樟酯等[14],與本文研究的主要揮發(fā)性組分基本一致。在比較不同產(chǎn)地揮發(fā)性成分的區(qū)別上,魏泉增等[15]發(fā)現(xiàn)乙酸芳樟酯和乙酸松油酯可能是區(qū)分不同產(chǎn)地花椒的關(guān)鍵化合物。

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