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        新疆南疆邊境地區(qū)優(yōu)勢蜱種及其基因多樣性分析

        2020-12-10 06:21:14唐莉娟卜三平
        吉林畜牧獸醫(yī) 2020年10期
        關(guān)鍵詞:縣市體表南疆

        唐莉娟,劉 丹,卜三平

        巴音郭楞職業(yè)技術(shù)學(xué)院,新疆庫爾勒 841000

        蜱主要寄生于動物體表,可通過直接叮咬傳播疾病。據(jù)報道,世界上已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了900多種蜱。目前我國共計121種硬蜱科,10種軟蜱科,但沒有納蜱。通過蜱蟲能夠傳播的病原體:病毒大約有126種、立克次體至少20種、原蟲和衣原體32種等。因此,加強對蜱傳疾病的相關(guān)研究是十分必要且刻不容緩的。

        新疆是中國陸地邊境線最長的省份之一,南疆地區(qū)就與吉爾吉斯斯坦、巴基斯坦、塔吉克斯坦、阿富汗、印度五個國家接壤。新疆除了擁有經(jīng)濟(jì)地理位置的優(yōu)勢之外,還擁有這一廣袤地區(qū)獨特的地理景觀以及豐富多樣的物種。因此,其體表蜱種受復(fù)雜的地理景觀影響豐富而又獨特,同時這些蜱種也是蜱傳疾病的媒介生物。但新疆地區(qū)(尤其是南疆)關(guān)于蜱傳病毒、細(xì)菌和寄生蟲種類和分子流行情況等本底數(shù)據(jù)仍不清楚。實時監(jiān)測新疆南疆邊境地區(qū)蜱傳疾病有利于國際間傳染病“聯(lián)防聯(lián)控”數(shù)據(jù)的共享。

        1 材料與方法

        1.1 蜱的采集

        201 9年3月~2020年6月,在新疆南疆皮山縣、葉城縣、烏什縣、烏恰縣、拜城縣5個縣市共采集家畜體表寄生蜱和游離蜱528只。將采集的蜱按采集時間和地點分類并且詳細(xì)標(biāo)記蜱蟲的數(shù)量、蜱的狀態(tài)(死蜱、活蜱、飽血蜱以及非飽血蜱)和宿主。

        1.2 蜱形態(tài)學(xué)鑒定分析

        使用普通光學(xué)顯微鏡和體視解剖顯微鏡對采集到的蜱蟲進(jìn)行形態(tài)學(xué)鑒定,鑒定標(biāo)準(zhǔn)主要參照Walker主編的《寄生蜱鑒定指南》[1]和于心主編的《新疆蜱類志》[2],

        1.3 蜱種分子生物學(xué)鑒定

        1.3.1 引物設(shè)計:通過閱讀大量文獻(xiàn)以及本實驗室前期對蜱蟲的研究成果,最終決定參考文獻(xiàn)中的已知引物,委托上海祥音生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成。

        1.3.2 PCR擴增:PCR總反應(yīng)體系25 μL:DNA模板1.5 μL,引物PF、PR各2 μL,10×PCR Buffer 2.4 μL,d NTP 2 μL,rTap酶0.6 μL,去離子水16.5 μL。擴增程序:94 ℃預(yù)變性5 min,94 ℃變性30 s,54 ℃退火30 s,72 ℃延伸30 s,37個循環(huán),72 ℃延伸8 min。ddH2O為陰性對照,PCR擴增產(chǎn)物在1.5%瓊脂糖凝膠電泳,觀察檢測目的片段的大小。

        2 結(jié)果

        2.1 各縣市蜱數(shù)量以及蜱種構(gòu)成

        本調(diào)查5個南疆縣市共采集528只蜱蟲,采樣結(jié)果顯示均為圖蘭扇頭蜱。

        2.2 PCR擴增結(jié)果

        16S rDNA、12S rDNA和COI基因片段由普通PCR擴增,蜱種擴增的片段分別在460 bp、400 bp和890 bp左右的位置出現(xiàn)目的條帶,與預(yù)期片段的大小一致。

        2.3 蜱線粒體基因擴增序列分析

        比對擴增到的蜱線粒體基因序列,可以證實本次采集到的5個縣市的寄生蜱分子生物學(xué)分析與形態(tài)學(xué)方法鑒定結(jié)果一致,均為圖蘭扇頭蜱。

        2.4 蜱種系統(tǒng)發(fā)育分析(見圖1)

        圖1 基于16S rDNA基因蜱種系統(tǒng)進(jìn)化樹分析

        3 討論

        蜱分為硬蜱科、軟蜱科和納蜱科三個科,截至目前為止,世界上蜱類有3科18屬約900種。其中,中國蜱類有2科10屬121種。一些學(xué)者主要調(diào)查分析了新疆各地區(qū)蜱類分布相關(guān)情況,所得結(jié)果有較高的參考價值。如王光雷等調(diào)查分析了1995年青河縣暴發(fā)的蜱傳疾病相關(guān)情況,結(jié)果表明此次蜱害的蜱種為草原革蜱;巴音查汗等對新疆和靜縣牦牛體表寄生的硬蜱進(jìn)行了鑒定及分析,其優(yōu)勢蜱種主要包括銀盾革蜱、草原革蜱、小亞璃眼蜱、丹氏血蜱和微小牛蜱;2006年,阿不力克木·阿布都熱西提等對塔里木盆地蜱類的群落進(jìn)行了分析研究,共采集獲得5屬10種蜱,其中只有拉合爾鈍緣蜱一種為軟蜱,其他均為硬蜱。然而,針對新疆南疆地區(qū)的蜱類調(diào)查至今缺乏比較全面系統(tǒng)的調(diào)查。本次采樣調(diào)查主要選擇了南疆地區(qū)的5個縣市,對南疆地區(qū)蜱蟲分布研究有著重要意義。

        南疆地區(qū)自然植被的地點主要是平原植被稀疏,山地垂直帶明顯,不同環(huán)境形成不同植物群落。本次采集的蜱種分布的地理環(huán)境主要是荒漠半荒漠草原、荒漠沙丘、沙漠綠洲等,蜱種分布主要為圖蘭扇頭蜱,證實了前期學(xué)者關(guān)于圖蘭扇頭蜱是新疆優(yōu)勢蜱種的結(jié)論。通過序列比對結(jié)果顯示:本研究獲得圖蘭扇頭蜱線粒體16S rDNA基因片段與基因庫對應(yīng)的蜱種同源性可達(dá)99.02%~100%,該結(jié)果證實了新疆南疆地區(qū)家畜體表寄生的主要蜱種是圖蘭扇頭蜱。使用Mega 6.06軟件基于16S rDNA基因的NJ樹分析得知,本研究采集到的圖蘭扇頭蜱與阿克蘇、阿拉爾采集的圖蘭扇頭蜱處與同一分支,但各采樣采集到的圖蘭扇頭蜱16S rDNA基因序列有所差異,存在顯著的基因多樣性。本實驗對今后繼續(xù)開展南疆地區(qū)蜱傳病原及蜱種基因多樣性研究具有重要意義。

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