單莉，陳莉，楊潔，徐晨昱，孟楣

作者單位：安徽中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥學(xué)部三級實(shí)驗(yàn)室，安徽 合肥230031

木瓜為薔薇科植物貼梗海棠Chaenomeles speciosa（Sweet）Nakai的干燥成熟果實(shí)［1］，早在《神農(nóng)本草經(jīng)》中記載：“木瓜，生夷陵”（夷陵，今湖北宜昌附近）；《本草經(jīng)集注》：“山陰蘭亭尤多，今處處有之，而宣城者為佳?！?；《本草乘雅半偈》中也有“木瓜處處有之，西雒者最勝，宣城者亦佳，山陰蘭亭尤多也?！钡挠涊d；《本草綱目》中有“木瓜處處有之，而宣城者為佳”的記載?？梢?，本草古籍中木瓜的產(chǎn)地為安徽、湖北等地。

現(xiàn)代木瓜的主要產(chǎn)區(qū)有安徽、湖北、重慶等地［2-3］，與本草古籍中的記載基本吻合。綜上所述，本課題組選擇安徽、湖北、重慶三地的木瓜進(jìn)行質(zhì)量比較。文獻(xiàn)研究顯示，木瓜中化學(xué)成分眾多［4-7］，不同產(chǎn)地木瓜質(zhì)量的比較中已進(jìn)行木瓜多糖含量、多種有機(jī)酸含量等的研究［8-10］，而針對有效成分齊墩果酸/熊果酸含量比值進(jìn)行研究的文獻(xiàn)較少，因此，本課題組于2017年6月至2018年6月以齊墩果酸、熊果酸的含量為指標(biāo)，采用高效液相色譜法（HPLC）進(jìn)行含量測定和SPSS軟件分析比較不同產(chǎn)地木瓜質(zhì)量，為木瓜藥材質(zhì)量評價(jià)提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1儀器美國Agilent1260高效液相色譜儀（DAD檢測器、四元低壓梯度泵、在線脫氣裝置和自動(dòng)進(jìn)樣器）；BP211D電子天平（SartoriusBP211D）；超聲波清洗器（KQ-300VDE，昆山市超聲儀器有限公司）；水浴鍋（HH-S，鞏義市英峪予華儀器廠）。

1.2試劑甲醇為色譜純；對照品：齊墩果酸（批號110709-201206）、熊果酸（批號110742-200314），均購于中國食品藥品檢定研究院；其余試劑均為分析純。38批（安徽產(chǎn)地19批，湖北產(chǎn)地13批，重慶產(chǎn)地6批）木瓜藥材經(jīng)安徽中醫(yī)藥大學(xué)中藥資源教研室彭華勝教授鑒定為皺皮木瓜Chaenomeles speciosa（Sweet）Nakai，基源均為貼梗海棠。

1.3實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 供試品制備 取干燥木瓜細(xì)粉約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理20 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足失去質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

1.3.2 對照品的制備 分別稱取齊墩果酸、熊果酸對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1毫升含齊墩果酸1.01 mg、熊果酸1.43 mg的混合對照品母液；精密量取混合對照品母液適量，加甲醇稀釋成每1毫升含齊墩果酸0.101 mg、熊果酸0.143 mg的混合對照品儲(chǔ)備液。

1.3.3 色譜條件［11-12］色譜柱：Agilent 5HC-C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇-水-冰醋酸-三乙胺（265∶35∶0.1∶0.05）等度洗脫；檢測波長：210 nm；流速：0.6 mL/min；柱溫：25℃；進(jìn)樣量：20μL。供試品色譜中齊墩果酸和熊果酸峰的保留時(shí)間與對照品的保留時(shí)間一致（圖1），理論塔板數(shù)按齊墩果酸峰計(jì)不低于5 000，分離度大于1.5。

圖1 對照品（A）與木瓜供試品（B）高效液相色譜圖

1.3.4 方法學(xué)考察 在“1.3.3”項(xiàng)下進(jìn)行方法學(xué)考察，齊墩果酸在檢測濃度范圍為0.020～0.202 g/L，熊果酸在檢測濃度范圍為0.029～0.286 g/L內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系，精密度試驗(yàn)良好，供試品中的齊墩果酸和熊果酸在24 h內(nèi)穩(wěn)定，本方法重復(fù)性良好。加樣回收率試驗(yàn)齊墩果酸平均回收率為100.04%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為1.65%，熊果酸平均回收率為99.45%，RSD為1.56%，表明結(jié)果可靠。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以xˉ±s表示，多組間比較方差齊性則采用單因素方差分析；方差不齊則采用Kruskal-Wallis非參數(shù)檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義則進(jìn)行多組間的兩兩比較。以Freeman-Halton檢驗(yàn)比較各產(chǎn)地達(dá)標(biāo)率。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1各產(chǎn)地木瓜含量測定結(jié)果比較Kruskal-Wallis非參數(shù)檢驗(yàn)表明湖北產(chǎn)地齊墩果酸含量顯著高于安徽、重慶兩產(chǎn)區(qū)（P＜0.05）；湖北產(chǎn)地熊果酸含量顯著低于安徽、重慶兩產(chǎn)區(qū)（P＜0.05）；安徽產(chǎn)地總含量顯著高于湖北、重慶兩產(chǎn)區(qū)（P＜0.05）。湖北產(chǎn)地總含量標(biāo)準(zhǔn)差最小，均一性較好；重慶產(chǎn)地總含量標(biāo)準(zhǔn)差最大，離散程度較大。見表1。

2.2各產(chǎn)地木瓜總含量達(dá)標(biāo)率在現(xiàn)行藥典標(biāo)準(zhǔn)（≥5.0 mg/g）下，安徽產(chǎn)區(qū)總含量達(dá)標(biāo)率高于重慶產(chǎn)區(qū)（P＜0.05）；提高標(biāo)準(zhǔn)（≥6.0 mg/g）表明安徽產(chǎn)區(qū)總含量達(dá)標(biāo)率高于湖北產(chǎn)區(qū)（P＜0.05）。見表2。

表1 各產(chǎn)地木瓜含量測定結(jié)果比較/

表1 各產(chǎn)地木瓜含量測定結(jié)果比較/

注：與湖北產(chǎn)地比較，aP＜0.05；與安徽產(chǎn)地比較，bP＜0.05

產(chǎn)地安徽湖北重慶H值P值齊墩果酸/熊果酸含量比值1.0±0.3a 5.6±1.0 2.1±2.8a 18.454＜0.001批數(shù)19 13 6齊墩果酸含量/（mg/g）3.2±0.8a 4.6±0.4 1.9±0.9a 19.962＜0.001熊果酸含量/（mg/g）3.4±0.9a 0.8±0.1 3.5±1.9a 18.246＜0.001總含量/（mg/g）6.6±1.2 5.5±0.4b 5.4±1.7b 11.377 0.003

表2 各產(chǎn)地木瓜齊墩果酸與熊果酸總含量不同標(biāo)準(zhǔn)下達(dá)標(biāo)率/%

3 討論

3.1產(chǎn)地對木瓜質(zhì)量的影響課題組在2009年對不同產(chǎn)地木瓜中齊墩果酸與熊果酸進(jìn)行過初步研究［13］，涉及皺皮木瓜及其不同亞型品種、光皮木瓜和榠楂等不同基源的含量比較，存在采樣量少和部分品種不是現(xiàn)行藥典收載品種等問題。隨著中藥木瓜的種植栽培技術(shù)的發(fā)展，皺皮木瓜得到廣泛的種植，故本次實(shí)驗(yàn)在前期研究基礎(chǔ)上，選擇基源為貼梗海棠的木瓜藥材，以齊墩果酸、熊果酸含量為指標(biāo)，不局限于宣城、資丘等地，擴(kuò)大采樣范圍，加大樣本量。研究表明，湖北產(chǎn)地木瓜的市場占有率較高，但其熊果酸含量較低；安徽產(chǎn)地木瓜藥材總含量最高，齊墩果酸、熊果酸含量均較高；重慶產(chǎn)地總含量離散程度較大，提示均一性較差；提高現(xiàn)行藥典標(biāo)準(zhǔn)（≥6.0 mg/g），安徽產(chǎn)地木瓜總含量達(dá)標(biāo)率高于湖北產(chǎn)地；綜上可知，安徽產(chǎn)地木瓜質(zhì)量較優(yōu)良，與古籍中記載的道地產(chǎn)區(qū)不謀而合。

3.2齊墩果酸/熊果酸含量比值對不同產(chǎn)地木瓜藥材的區(qū)分含量測定結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在現(xiàn)行藥典含量標(biāo)準(zhǔn)基礎(chǔ)上，安徽產(chǎn)地、湖北產(chǎn)地達(dá)標(biāo)率均為100%，不能對此2個(gè)產(chǎn)地木瓜進(jìn)行質(zhì)量劃分。本課題組在藥典總量控制的基礎(chǔ)上，考察了齊墩果酸/熊果酸含量比值，發(fā)現(xiàn)安徽產(chǎn)地木瓜中齊墩果酸與熊果酸含量比值為（1.0±0.3），接近1.0；而湖北產(chǎn)地木瓜中齊墩果酸與熊果酸含量比值（5.6±1.0），接近5.6；可作為兩主要產(chǎn)地的質(zhì)量劃分依據(jù)之一，彌補(bǔ)現(xiàn)行藥典對質(zhì)量控制的不足。本研究利用齊墩果酸/熊果酸含量比值可以將安徽產(chǎn)地與湖北產(chǎn)地木瓜進(jìn)行區(qū)分；但此次實(shí)驗(yàn)中重慶產(chǎn)地樣本量較少，未能明確其與安徽產(chǎn)地在比值上的差異性，將在后續(xù)的實(shí)驗(yàn)中進(jìn)一步研究。