□ 熱比古麗·沙吾提 王甜 新疆維吾爾自治區(qū)水產(chǎn)科學(xué)研究所 農(nóng)業(yè)部西北地區(qū)漁業(yè)資源環(huán)境科學(xué)觀測(cè)試驗(yàn)站

引言

本文從人員、環(huán)境、儀器設(shè)備、培養(yǎng)基、樣品的采集這五個(gè)方面闡述了影響水質(zhì)微生物檢驗(yàn)的相關(guān)因素，并從各個(gè)環(huán)節(jié)著手，希望通過(guò)加強(qiáng)水質(zhì)微生物檢測(cè)的質(zhì)量控制來(lái)提高微生物檢驗(yàn)工作的質(zhì)量，進(jìn)而保證檢驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

1 常見水質(zhì)微生物檢測(cè)結(jié)果的影響因素

1.1 人員

微生物檢驗(yàn)人員上崗前應(yīng)接受與其所承擔(dān)的工作任務(wù)相適應(yīng)的培訓(xùn)，并對(duì)培訓(xùn)技能進(jìn)行資格確認(rèn)后取得上崗證。檢驗(yàn)人員需熟悉所承擔(dān)檢驗(yàn)項(xiàng)目的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)、規(guī)范和操作規(guī)程，能獨(dú)立負(fù)責(zé)并正確評(píng)價(jià)檢測(cè)結(jié)果；熟練掌握所用儀器設(shè)備的性能和使用方法，并嚴(yán)格按照操作規(guī)程進(jìn)行操作；還應(yīng)熟悉微生物檢驗(yàn)檢測(cè)安全操作知識(shí)和消毒知識(shí)。

1.2 儀器設(shè)備

微生物實(shí)驗(yàn)室的儀器設(shè)備應(yīng)以一臺(tái)一檔的方式建立檔案，檔案則應(yīng)當(dāng)包含其基本信息。此外，每臺(tái)儀器應(yīng)安排保管人員負(fù)責(zé)儀器設(shè)備的保管和日常維護(hù)。目前，微生物實(shí)驗(yàn)室常用的儀器設(shè)備包括：冰箱、培養(yǎng)箱、高壓滅菌器、超凈工作臺(tái)、顯微鏡、溫度計(jì)、紫外燈等。使用儀器設(shè)備的人員必須熟悉和掌握操作規(guī)程，防止操作不當(dāng)造成事故。

1.3 環(huán)境設(shè)施

水質(zhì)微生物檢測(cè)很大程度上會(huì)受環(huán)境影響，因此需要做到如下幾點(diǎn)。第一，保持實(shí)驗(yàn)室內(nèi)良好的通風(fēng)和無(wú)塵狀態(tài)—為減少灰塵、大氣流、溫度變化等因素產(chǎn)生的影響，安裝空調(diào)是解決這些影響因素的最佳方式之一。第二，每次接種前，需將無(wú)菌室用紫外燈消毒30分鐘，消毒完畢后關(guān)閉紫外燈，等待30分鐘后人員方可進(jìn)入無(wú)菌室；人員進(jìn)入無(wú)菌室后需打開超凈工作臺(tái)后方可工作；工作完畢后需再次將紫外燈打開殺菌。第三，微生物檢驗(yàn)室應(yīng)盡量避免外來(lái)人員出入，以減少空氣流動(dòng)，避免不潔空氣的帶入。第四，在樣品移至無(wú)菌室前，須先將采樣瓶體外壁用酒精棉擦拭，然后換上無(wú)菌工作服和拖鞋，戴好手套、口罩等，再將其移至無(wú)菌室內(nèi)，從而避免與實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部環(huán)境發(fā)生交叉污染。第五，無(wú)菌室應(yīng)定期進(jìn)行沉降菌的測(cè)試和環(huán)境的驗(yàn)證，環(huán)境合格后才能開展檢測(cè)工作。沉降菌的測(cè)試方法[1]為，采用大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基（TSA）配制的培養(yǎng)皿采樣后，置于30～35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時(shí)間不少于2d。每批培養(yǎng)基均應(yīng)設(shè)置對(duì)照試驗(yàn)，以檢驗(yàn)培養(yǎng)基本身是否被污染。

1.4 樣品的采集和保存

1.4.1 樣品的采集

水樣應(yīng)使用121℃經(jīng)15min高壓滅菌處理的玻璃瓶采集。同一水源且同一時(shí)間采集幾類檢測(cè)指標(biāo)的水樣時(shí)，應(yīng)先采集供檢測(cè)微生物指標(biāo)的水樣，且采樣時(shí)應(yīng)直接采集，不得用水樣涮洗已滅菌的采樣瓶，以避免手指和其他物品沾污瓶口[2]。

1.4.2 樣品保存

采集的水樣應(yīng)立即送檢，時(shí)間不得超過(guò)2小時(shí)。如無(wú)法及時(shí)送檢，應(yīng)將樣品置于冰箱中，但不得超過(guò)24小時(shí)，否則會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果[3]。

1.5 培養(yǎng)基的制備

培養(yǎng)基是促使微生物生長(zhǎng)繁殖、分離微生物純種，以及鑒別微生物的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。培養(yǎng)基的制備是微生物檢測(cè)工作中最為重要的環(huán)節(jié)之一。培養(yǎng)基經(jīng)過(guò)稱量-調(diào)整pH值-加熱煮沸-過(guò)濾-分裝容器-滅菌-備用等一系列制備過(guò)程后，應(yīng)能達(dá)到微生物生長(zhǎng)所需的要求，如未能達(dá)到要求，微生物就不容易生長(zhǎng)或不生長(zhǎng)。由于培養(yǎng)基富含營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，易被污染或變質(zhì)，故配好后不宜久置，最好現(xiàn)配現(xiàn)用。此外，培養(yǎng)基的質(zhì)量、配制過(guò)程及保存方式都會(huì)直接影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

2 水質(zhì)微生物檢測(cè)結(jié)果的質(zhì)量控制

2.1 提高檢驗(yàn)人員的素質(zhì)水平

檢驗(yàn)人員自身素質(zhì)水平的高低會(huì)直接影響到微生物檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，因此可采取以下控制措施。

①檢驗(yàn)人員要嚴(yán)格規(guī)范檢驗(yàn)操作流程，在實(shí)驗(yàn)中對(duì)每個(gè)操作步驟、每個(gè)檢測(cè)環(huán)境都做到嚴(yán)密監(jiān)控。

②提高每位檢驗(yàn)人員的素質(zhì)和專業(yè)技能，經(jīng)常針對(duì)檢驗(yàn)人員進(jìn)行專業(yè)知識(shí)和操作技能的培訓(xùn)，確保每位檢驗(yàn)人員以高度的責(zé)任心做好每個(gè)檢驗(yàn)環(huán)節(jié)，從而提高微生物檢驗(yàn)的準(zhǔn)確性。

③采集樣品時(shí)要嚴(yán)格控制樣品質(zhì)量，因?yàn)闃悠焚|(zhì)量的好壞將直接影響最終檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。因此，在進(jìn)行檢驗(yàn)樣品的采集、處理、運(yùn)送及儲(chǔ)存時(shí)，一定要按照操作流程嚴(yán)格操作，這樣才能夠有效提高檢驗(yàn)的質(zhì)量。

2.2 做好培養(yǎng)基的質(zhì)量控制

①每一批新購(gòu)進(jìn)的培養(yǎng)基一定要由專人仔細(xì)核對(duì)其名稱、規(guī)格、數(shù)量、成分、外觀特征、批號(hào)、保質(zhì)期等是否符合要求，并做好記錄[4]。

②每次配制好的培養(yǎng)基應(yīng)填寫好《培養(yǎng)基配置記錄表》，且必須選取部分培養(yǎng)基放置于36±1℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24小時(shí)，無(wú)雜菌生長(zhǎng)即可待用。如發(fā)現(xiàn)破裂、水分侵入、色澤異常、有菌生長(zhǎng)等，均應(yīng)挑出棄用。

③已制備好的的培養(yǎng)基不宜保存過(guò)久，應(yīng)存放于4℃冰箱內(nèi)。同時(shí)，每批培養(yǎng)基應(yīng)注明名稱及配置日期。

2.3 加強(qiáng)檢測(cè)環(huán)境及儀器設(shè)備的管理

微生物實(shí)驗(yàn)室應(yīng)具備監(jiān)測(cè)和控制環(huán)境條件的能力—組織人員對(duì)環(huán)境進(jìn)行監(jiān)控，并保存好相應(yīng)的環(huán)境監(jiān)控記錄。同時(shí)，應(yīng)保證工作環(huán)境滿足檢驗(yàn)檢測(cè)工作的要求—當(dāng)環(huán)境條件不利于檢驗(yàn)檢測(cè)工作的開展時(shí)，應(yīng)停止檢驗(yàn)檢測(cè)活動(dòng)，在進(jìn)行有效處置后方可恢復(fù)。在水質(zhì)微生物檢測(cè)工作中，工作環(huán)境要滿足相關(guān)檢驗(yàn)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)或技術(shù)規(guī)范的要求，特別要對(duì)無(wú)菌室進(jìn)行定期消毒，確保檢驗(yàn)環(huán)境的無(wú)菌狀態(tài)，從而保證檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

凡對(duì)檢驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性有顯著影響的儀器設(shè)備，在投入使用前必須經(jīng)過(guò)法定計(jì)量機(jī)構(gòu)的檢定或校準(zhǔn)。此外，使用中的儀器設(shè)備需按規(guī)定時(shí)間定期檢定并進(jìn)行日常維護(hù)，確保其功能正常并防止性能退化，進(jìn)而保證檢驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果的質(zhì)量。

2.4 實(shí)驗(yàn)室間質(zhì)量控制

為了保證檢驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，實(shí)驗(yàn)室除內(nèi)部質(zhì)量控制外，還需建立實(shí)驗(yàn)室間質(zhì)量控制制度。開展實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)能不斷提高實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)能力，監(jiān)控實(shí)驗(yàn)室的持續(xù)能力，從而識(shí)別并縮小實(shí)驗(yàn)室之間檢測(cè)結(jié)果的差異，提高各實(shí)驗(yàn)室間的微生物檢驗(yàn)質(zhì)量，進(jìn)而獲得可比性較高的準(zhǔn)確檢驗(yàn)結(jié)果。