文│倪和民 王相國（北京農(nóng)學(xué)院）

鄧曉彬 朱寬峰 蔣凡（北京田園奧瑞生物科技有限公司）

趙俊金（全國畜牧總站）

金通 吳承武 王文強(qiáng)（南京農(nóng)業(yè)大學(xué)淮安研究院）

劉燊 劉建（江西正邦養(yǎng)殖有限公司）

一、范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了豬冷凍精液的術(shù)語與定義、質(zhì)量要求、制作程序、檢驗(yàn)規(guī)則及檢查方法、包裝、貯存與運(yùn)輸。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于豬冷凍精液產(chǎn)品。

二、規(guī)范性引用文件

下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB 4143-2008牛冷凍精液；GB/T 5458液氮生物容器；GB 23238-2009種豬常溫精液。

三、術(shù)語和定義

GB 23238-2009界定的以及下列術(shù)語和定義適用于本文件。

1.精子。具有活動(dòng)性含有遺傳物質(zhì)的雄性細(xì)胞，它可以將遺傳信息攜帶給卵母細(xì)胞。

2.精液。由精子和精清兩部分組成。

3.精子活力。在37℃環(huán)境下前向運(yùn)動(dòng)精子占總精子數(shù)的百分率。

4.畸形精子。頭、體、尾的形態(tài)變異的精子。頭部畸形有巨大頭、無定形、雙頭等；體部畸形有體部粗大、折裂、不完整等；尾部畸形有卷尾、雙尾、缺尾等。

5.冷凍精液。經(jīng)特殊工藝處理，經(jīng)超低溫冷凍后可在液氮中（-196℃）長期保存種豬精液。

6.精子密度。每毫升精液的精子數(shù)。

四、要求

1.原精液要求。

（1）種豬。來源于具有種用價(jià)值，體型外貌和生產(chǎn)性能等符合種用要求，三代系譜資料齊全，體質(zhì)健康，不患有國家或農(nóng)業(yè)農(nóng)村部已發(fā)布的《動(dòng)物防疫法》中所明確的二類疾病的種豬。

（2）商品用或其他用種豬。應(yīng)符合國家相關(guān)規(guī)定。

（3）原精液。色澤為灰白色或乳白色，精子活力≥85%，精子密度≥1億個(gè)/毫升，精畸形率≤5%。

2.豬冷凍精液要求。

（1）外觀。細(xì)管無裂痕，兩端封口嚴(yán)密。

（2）劑型、劑量。0.5毫升細(xì)管/支。

（3）每劑量凍精解凍后要求。精子活力≥60%。前向運(yùn)動(dòng)精子數(shù)≥3億個(gè)。精子畸形率≤20%。

五、抽樣

按照GB 23238-2009中第5章進(jìn)行。

六、試驗(yàn)方法

1.冷凍精液試樣制備。

（1）樣品貯存。存放冷凍精液的低溫容器質(zhì)量應(yīng)符合GB/T 5458規(guī)定，使用前經(jīng)過清洗后加入新鮮液氮，樣品浸泡在液氮中。取放樣品時(shí)在空中暴露時(shí)間不得超過5秒。由專人保管樣品，樣品不允許脫離液氮，抽樣登記單與樣品隨行。樣品包裝、標(biāo)記應(yīng)保持原樣。

（2）樣品解凍檢測(cè)。三支細(xì)管分別直接置于50℃恒溫水浴中解凍16秒，解凍三支混合精液后，取精液約50微升置于載玻片上加蓋玻片，立即放在載物臺(tái)上，溫度保持37℃，用精子質(zhì)量分析系統(tǒng)（TYCASA）檢測(cè)分析，也可用200X～400X顯微鏡觀察活力，每樣片觀察3個(gè)視野，進(jìn)行全面評(píng)定。檢驗(yàn)有效時(shí)限為解凍后5～60分鐘。

2.測(cè)定。外觀測(cè)定。采用目測(cè)法進(jìn)行。劑量、精子活力、前向運(yùn)動(dòng)精子數(shù)、精子畸形率的測(cè)定按GB 23238-2009附錄A中規(guī)定的方法進(jìn)行。

七、檢驗(yàn)規(guī)則

1.檢驗(yàn)分類。按GB 23238-2009中6.2進(jìn)行，其中常規(guī)檢驗(yàn)項(xiàng)目中為本標(biāo)準(zhǔn)4.2.1和4.2.2；型式檢驗(yàn)項(xiàng)目中為本標(biāo)準(zhǔn)4.2.1～4.2.3。

2.判定。按GB 23238-2009中第7章進(jìn)行。

八、標(biāo)志、包裝

1.標(biāo)志。

（1）品種。公豬的品種以代號(hào)表示，具體品種代號(hào)見附錄A。

（2）內(nèi)容。細(xì)管凍精應(yīng)在管壁（或包裝袋）上印制以下內(nèi)容，并且印制標(biāo)識(shí)要清楚：生產(chǎn)廠家；公豬品種；公豬號(hào)；生產(chǎn)日期或批次；質(zhì)檢員。

2.包裝。采用塑料管或滅菌紗布袋包裝。

九、貯存、運(yùn)輸

1.貯存。

（1）豬冷凍精液應(yīng)存放在液氮生物容器中，液氮生物容器應(yīng)在使用前后徹底檢查和清洗。清理時(shí)，先用中性洗滌劑刷洗，再用40～45℃溫水沖洗干凈，在室溫下放置48小時(shí)以上再充入液氮。

（2）應(yīng)經(jīng)常檢查液氮生物容器的狀況，如發(fā)現(xiàn)液氮消耗顯著增加或容器外掛霜等異常情況，應(yīng)立即更換。長期貯存凍精的容器，應(yīng)定期清理和洗涮。

（3）取放冷凍精液之后，應(yīng)保證凍精置于液氮面以下，再蓋好容器塞，防止液氮蒸發(fā)或異物浸入。

（4）取放凍精過程中，只能將提放凍精的提桶或包裝物提到容器頸的基部，不得提到頸口外，動(dòng)作要迅速；若離開液氮面10秒尚未取放完，應(yīng)放回液氮中浸泡一下再繼續(xù)取放。貯存的凍精需要向另一個(gè)容器轉(zhuǎn)移時(shí)，在容器外停留時(shí)間不得超過5秒。

（5）大型液氮生物容器，應(yīng)有凍精分類存放位置的詳細(xì)圖表，分別注冊(cè)，登記清楚，防止不同品種的凍精混淆。

2.運(yùn)輸。

（1）在移動(dòng)液氮罐時(shí)應(yīng)把握其手柄，輕拿輕放，防止碰撞傾斜，保護(hù)好真空抽氣閥。

（2）裝車運(yùn)輸時(shí)，貯存凍精的生物容器不可橫放、疊放或倒置，要鋪墊厚軟墊子，適當(dāng)固定，并根據(jù)運(yùn)輸條件用厚紙箱或木箱裝好，牢固地系在車上，以免顛簸沖撞。

（3）運(yùn)輸凍精時(shí)，應(yīng)有專人負(fù)責(zé)，辦好交接手續(xù)（應(yīng)附帶精液運(yùn)輸、交接卡片）。途中應(yīng)及時(shí)檢查和添加液氮。

附錄A

公豬品種代號(hào)見表A。

表A 公豬品種代號(hào)