翟明翚，許 芮，郝東宇，王 穎，蘇立強

(齊齊哈爾大學化學與化學工程學院，黑龍江 齊齊哈爾 161006)

手性藥物對映體因其藥理作用的差異，可能會對人體產(chǎn)生毒副作用或代謝負擔[1]。對手性藥物進行拆分研究，是藥學領域最熱門的課題之一。鹽酸依替福林(Etilefrine hydrochloride)能升高血壓[2]，升壓作用維持時間較長，是治療低血壓的常用藥。鹽酸依替福林有一個手性中心，結構式見圖1。據(jù)文獻報道，其R 對映體具有較強的藥理活性，而S 對映體的活性較弱[3]，如果消旋體給藥，會增大藥劑量，給人體帶來代謝負擔。為了確保用藥更有效、更安全，有必要對鹽酸依替福林對映體進行拆分研究。

圖1 鹽酸依替福林分子結構式Fig.1 Chemical structure of Etilefrine hydrochloride

HP-β-CD 沒有毒性，水溶性好，具有較好的立體選擇性和較強的手性識別能力。藥物對映體進入其空腔與之作用，可以形成色譜行為差異較大的非對映體包合物[4]，實現(xiàn)藥物對映體的分離。本文以HP-β-CD 作為手性流動相添加劑，采用高效液相色譜手性流動相添加劑法，對鹽酸依替福林進行了拆分，在最佳色譜條件下，鹽酸依替福林對映體能夠良好分離。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

P200 Ⅱ高效液相色譜系統(tǒng)，TM-1901 紫外可見分光光度計，AS3120 超聲波清洗器，GM 隔膜真空泵。

乙腈（色譜純）、超純水（實驗室制備）、羥丙基-β-環(huán)糊精、鹽酸依替福林。

1.2 樣品溶液的配制

稱取0.0250g 的鹽酸依替福林藥品溶解于水中，定容至50mL 容量瓶中，備用。使用前經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾，超聲脫氣。

1.3 紫外檢測波長的確定

準確稱取一定量的鹽酸依替福林，將其溶于50mL 超純水中，用超純水作為參比溶液，使用紫外可見分光光度計對樣品進行波長掃描，并經(jīng)實驗測試，確定最佳紫外檢測波長。

1.4 流動相的配制

準確稱取一定量的HP-β-CD，將其溶解在100mL 一定配比的乙腈-水中，經(jīng)0.45μm 微孔濾膜進行過濾，并超聲脫氣。

2 結果與討論

2.1 手性添加劑濃度對分離度的影響

手性流動相添加劑法拆分藥物對映體，主要依賴于流動相中手性添加劑與對映體之間作用力的強弱，因此，手性添加劑的濃度是一個很重要的參數(shù)。

本文對HP-β-CD 的濃度進行了優(yōu)化選擇，考察范圍為9～35mmol·L-1。隨著HP-β-CD 濃度增加，其與對映體相互作用的機會增多，手性識別能力增強，形成對映體的色譜行為差異大，分離度增大。由圖2 可知，HP-β-CD 濃度由9mmol·L-1逐漸增加到26mmol·L-1，分離度逐漸增大；濃度增加到35mmol·L-1時，分離度又略有下降。這是因為HP-β-CD 濃度過高時，沒有形成包合物的HP-β-CD，會與包合物競爭硅膠上的作用點，使得對映體的分離度降低。結果表明，HP-β-CD 的最佳濃度為26mmol·L-1。

圖2 HP-β-CD 濃度對分離度的影響Fig.2 Effect of different concentrations of HP-β-CD

2.2 有機修飾劑含量對分離度的影響

如表1 所示，當乙腈比例在10%～25%之間時，隨著乙腈比例增加，流動相的極性由強變弱，保留時間縮短，選擇性系數(shù)和分離度逐漸增大。繼續(xù)增加乙腈比例到30%，選擇性系數(shù)和分離度逐漸下降，這可能是因為乙腈與對映體分子競爭HP-β-CD 的空腔，降低了鹽酸依替福林與HP-β-CD 的疏水作用[5]，使得HP-β-CD 對鹽酸依替福林的立體選擇性降低。結果表明，當流動相為乙腈∶水=25∶75（V/V）時，分離效果最佳。

表1 流動相配比對分離度的影響Table 1 Effect of organic modifier on the resolution

2.3 流速對分離度的影響

本文考察了流速對拆分效果的影響。如圖3 所示，流速在0.10～1.00mL·min-1范圍內，分離度呈先上升后下降的趨勢。這是由于低流速主要影響的是柱內動力學中的分子擴散項，當流速增加時，分子擴散現(xiàn)象減弱，柱效增加，分離度增大；高流速時，影響柱內動力學的主要因素為傳質阻力項，流速增加，傳質阻力項增加，柱效下降，分離度變小。當流速為0.3mL·min-1時，分子擴散項和傳質阻力項的影響最小，柱效最高，分離度最大。

圖3 流速對分離度的影響Fig. 3 Effect of the flow rate on the resolution

圖4 pH 值對分離度的影響Fig .4 Effect of mobile phase pH on the resolution

2.4 pH 值對分離度的影響

本文考察了流動相pH 值在3.0～6.0 范圍內對鹽酸依替福林拆分的影響。如圖4 所示，分離度隨pH 值的增加呈現(xiàn)先增加后減小的趨勢。pH 值較低時，羥丙基-環(huán)糊精的質子化作用減小，它所帶的負電荷會大大減少，與鹽酸依替福林對映體之間的靜電作用下降，分離度也隨之變小。pH 值較高時，樣品分子解離的數(shù)量會變少，使得主客體之間的靜電作用減弱，分離度變小。pH 值為4.08 時，靜電作用最強，能形成較穩(wěn)定的包合物，分離效果最好。

3 結論

本文以羥丙基-β-環(huán)糊精作為手性添加劑，對鹽酸依替福林進行了拆分，并優(yōu)化了色譜分離條件。當流動相為乙腈∶水=25∶75（V/V）、HP-β-CD 濃度為26mmol·L-1、流速為0.30 mL·min-1時，鹽酸依替福林對映體能良好分離，分離度為1.46。該方法操作簡單，經(jīng)濟實用，易于普及。