陳俐靜，陳卓，李娜，孫亞偉，李紅波，宋雯雯，張楊，姚剛

（1新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院, 烏魯木齊 830052；2新疆畜牧科學(xué)院畜牧研究所，烏魯木齊 830011）

0 引言

【研究意義】肉牛養(yǎng)殖業(yè)是新疆畜牧業(yè)主導(dǎo)產(chǎn)業(yè)，新疆褐牛及其雜交牛是新疆肉牛業(yè)主導(dǎo)品種之一。目前，新疆褐牛及其雜種后代總存欄數(shù)約為150萬(wàn)頭，純種新疆褐牛占總數(shù)的 30%左右[1]。隨著人們生活質(zhì)量的提高，牛肉作為重要的肉食品，優(yōu)質(zhì)、高檔牛肉供不應(yīng)求[2-3]。牛肉的食用品質(zhì)主要包括嫩度、多汁性和風(fēng)味[4]。而影響畜肉品質(zhì)的因素有很多，其中肌內(nèi)脂肪（intramuscular fat，IMF），又稱(chēng)為大理石花紋，其含量會(huì)影響牛肉的食用品質(zhì)[5-6]。高水平的 IMF含量很可能會(huì)增加油脂含量和肌紅蛋白的氧化[7]，進(jìn)而影響肉色。適當(dāng)?shù)靥岣?IMF含量，可以提高肌肉的嫩度、多汁性等食用品質(zhì)[8]。因此，調(diào)控IMF的沉積成為提高肉品質(zhì)的一個(gè)重要途徑[9]?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】瘦素（leptin，LEP）基因多態(tài)性已經(jīng)被作為肉牛的大理石紋、背膘厚度、嫩度、胴體重、牛肉質(zhì)量評(píng)價(jià)等性狀的候選基因[10]。SCHENKEL等[11]研究發(fā)現(xiàn)肉牛產(chǎn)肉率、背膘厚度和嫩度與 LEP基因顯著相關(guān)。說(shuō)明 LEP可作為評(píng)定肉品質(zhì)及肉質(zhì)脂肪沉積的指標(biāo)。脂肪酸合成酶（fatty acid synthesase，F(xiàn)AS）在脂肪代謝中主要作用是合成長(zhǎng)鏈脂肪酸，而激素敏感酯酶（hormone-sensitive lipase，HSL）則是脂肪分解的關(guān)鍵限速酶[12]。FAS、HSL和脂蛋白脂酶（lipoprotein lipase，LPL）基因mRNA表達(dá)與皮下脂肪、IMF沉積存在密切相關(guān)[13-14]。HILLER等[13]研究發(fā)現(xiàn)FAS、LPL和HSL基因mRNA表達(dá)與皮下脂肪、IMF沉積存在密切相關(guān)。JEONG等[14]研究了韓國(guó)肉牛16個(gè)脂肪代謝相關(guān)基因，證明FAS、LPL和HSL基因表達(dá)與IMF代謝均呈顯著相關(guān)，其中LPL基因上調(diào)可增加脂肪細(xì)胞膜對(duì)脂肪酸的攝取，從而增加IMF沉積。脂肪酸結(jié)合蛋白 4（fatty acid-binding protein 4，F(xiàn)ABP4）是脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白，能在脂肪細(xì)胞中沉積甘油三酯，增加IMF的含量。FABP4基因與肉牛IMF沉積、大理石紋形成密切相關(guān)[15-17]。【本研究切入點(diǎn)】由于新疆褐牛遺傳背景復(fù)雜，其IMF沉積能力、大理石紋含量、嫩度等與脂肪代謝相關(guān)的肉品質(zhì)形成機(jī)理等方面缺乏與國(guó)內(nèi)外優(yōu)良肉牛品種的比較研究?！緮M解決的關(guān)鍵問(wèn)題】本試驗(yàn)選取新疆褐牛與安格斯肉牛進(jìn)行屠宰性狀、肉品質(zhì)及其脂代謝相關(guān)基因的比較研究，探明新疆褐牛與安格斯肉牛上述關(guān)鍵體脂代謝基因mRNA和蛋白表達(dá)的脂肪組織和品種差異性，為今后改善新疆褐牛的肉品質(zhì)性狀奠定科學(xué)基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

本研究動(dòng)物飼養(yǎng)試驗(yàn)在新疆某集約化肉牛養(yǎng)殖場(chǎng)進(jìn)行。2016年12月選取生長(zhǎng)發(fā)育正常、健康，品種特征明顯的新疆褐牛（Xinjiang brown cattle，XBC）和純種安格斯牛（Angus beef cattle，ABC）3月齡斷奶公犢各7頭，單獨(dú)分欄組群，專(zhuān)人負(fù)責(zé)，按照該場(chǎng)統(tǒng)一飼養(yǎng)管理方式飼養(yǎng)，于2018年9月達(dá)到24月齡后進(jìn)行屠宰。

1.2 儀器設(shè)備與試劑

儀器設(shè)備：背膘測(cè)定儀（Mylab Touch vet）；顯微鏡（NIKON）；電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（DHG-9140A）；半自動(dòng)切片機(jī)（LEICA CM3050 S）；Motic顯微成像系統(tǒng)（Advance 3.5軟件）；光學(xué)顯微鏡BA400（Motic實(shí)業(yè)集團(tuán)有限公司）；離心機(jī)5415D（Eppendrof）；PCR儀PTC-225（Bio-Rad）；凝膠成像系統(tǒng)CBC/UVP I-D001（CapitalBio）；實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀（Applied Biosystems）；超聲波細(xì)胞破碎儀JY92-2D（寧波新芝生物科技股份有限公司）；立式壓力蒸汽滅菌器LDZX-30KBS（上海申安醫(yī)療器械廠）；恒溫培養(yǎng)振蕩器TS-2102C（上海智城分析儀器制造有限公司）；酶標(biāo)儀DG5031（上海齊欣有限公司）。

試劑：苦味酸購(gòu)自臺(tái)山粵橋試劑有限公司；固體石蠟、蘇木素、尹紅、中性樹(shù)膠均購(gòu)自中國(guó)上海標(biāo)本模型廠；mirVana miRNA Isolation Kit、r-Taq 酶、cDNA第一鏈合成試劑盒、SYBR Green PCR Master Mix、Micro Amp Optical 96-well Reaction Plate、Micro Amp Optical Adhesive Covers 4311971均購(gòu)自abm（Master Mix-EL）公司；RIPA裂解液、BCA蛋白定量試劑盒、蛋白變性緩沖液、SDS-PAGE凝膠試劑盒、化學(xué)發(fā)光顯色液均購(gòu)自 Thermo Fisher公司；小鼠抗beta-actin單克隆抗體ab6276、小鼠抗LPL單克隆抗體ab21356、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記山羊抗小鼠ab97240均購(gòu)自Abcam公司；大鼠抗FAS單克隆抗體05-351購(gòu)自 Merck Millipore公司；兔抗 HSL單克隆抗體NBP1-76735購(gòu)自Novus公司；辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記山羊抗大鼠abs20031購(gòu)自Absin公司；辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記山羊抗兔111-305-003購(gòu)自Jackson公司。

1.3 方法

1.3.1 采樣 前述24月齡XBC和ABC各7頭試驗(yàn)牛在屠宰前一天，采用背膘儀活體測(cè)定背膘厚度、眼肌面積和肌內(nèi)脂肪參數(shù)，并進(jìn)行活體稱(chēng)重，記錄耳標(biāo)號(hào)。試驗(yàn)牛經(jīng)待宰圈12 h禁食后，進(jìn)入屠宰車(chē)間自動(dòng)化屠宰，測(cè)定胴體及產(chǎn)肉性狀。并采集背最長(zhǎng)肌和皮下脂肪等相關(guān)樣品液氮保存后于實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行后續(xù)指標(biāo)測(cè)定。

1.3.2 胴體性狀

胴體重：除去頭、皮、尾、蹄、內(nèi)臟所余體軀重量；

凈肉重：胴體除去骨胳之后的凈肉和脂肪的重量；

屠宰率=胴體重/活重×100%；

凈肉率=凈肉重/活重×100%；

肉骨比=胴體凈肉重/骨骼重×100%。

用背膘儀測(cè)量肌間脂肪、背膘厚度、眼肌面積。

1.3.3 肉品質(zhì)性狀 利用色度儀對(duì)每塊背最長(zhǎng)肌測(cè)定肉色，分別記錄肉樣的亮度（L*）值、紅度（a*）值和黃度（b*）值；IMF根據(jù)《食品中脂肪的測(cè)定》（GB 5009.6—2016）測(cè)定；水分根據(jù)《食品中水分的測(cè)定》（GB 2019.3—2016）測(cè)定；灰分根據(jù)《食品中灰分的測(cè)定》（GB 5009.4—2016）測(cè)定；剪切力根據(jù)《肉嫩度的測(cè)定 剪切力測(cè)定法》（NY/T 1180—2006）測(cè)定。

1.3.4 肌肉及皮下脂肪形態(tài)學(xué)測(cè)定 肌肉及皮下脂肪制備常規(guī)石蠟切片，H.E染色[18]。利用 Motic Advanced 3.5顯微成像系統(tǒng)觀察并測(cè)量肌肉及皮下脂肪，借助FastStone Capture軟件[19]計(jì)算細(xì)胞單位面積及數(shù)量。

1.3.5 脂代謝相關(guān)基因的mRNA表達(dá)

（1）組織樣本總RNA提取

1）在液氮預(yù)冷砂漿中取30—50 mg最長(zhǎng)的肌肉樣品，充分研磨成液氮，加入1 mL Trizol，混勻后冰上靜置5 min裂解并轉(zhuǎn)入新EP管。

2）加入0.2 mL預(yù)冷過(guò)的氯仿，混勻15—30 s，冰上靜置2—3 min。

3）4℃離心，12 000g×15 min，分層。

4）吸清液400—500 μL并加入0.5 mL異丙醇，將管中液體輕輕混勻，-80℃靜置30 min。

5）4℃離心，12 000g×15 min。

6）棄上清，加入75%乙醇（冰冷）1 mL，振搖，4℃離心，12 000g×5 min。

7）棄上清，短暫離心，棄剩余上清。

8）加入適量（20—30 μL）DEPC（Rnase Free）H2O溶解RNA，測(cè)濃度，儲(chǔ)存-80℃。

（2）基因組消化和反轉(zhuǎn)錄 基因組消化的反應(yīng)體系：1 μg 總 RNA，2 μL 5×gDNA buffer，42℃、3 min。

反轉(zhuǎn)錄用cDNA第一條鏈合成試劑盒反轉(zhuǎn)錄1 μg總RNA成cDNA，反應(yīng)體系：2 μL 10×Fast-RT Buffer，2 μL FQ-RT Primer Mix，1μL RT Enzyme Mix，5 μL RNase-Free Water，加入消化產(chǎn)物總體積20 μL，反應(yīng)條件：42℃、15 min，95℃、3 min，-80℃保存。

（3）熒光定量PCR引物 使用DNAMAN軟件設(shè)計(jì)引物[20]，由生工生物工程（上海）股份有限公司合成，信息見(jiàn)表1。

（4）檢測(cè) LEP、FAS、FABP4、HSL、LPL基因轉(zhuǎn)錄水平測(cè)定 利用Power SYBR Green PCR Master Mix試劑盒和Quant Studio Flex Real Time PCR system儀器進(jìn)行相對(duì)定量。反應(yīng)體系如表2。

表1 引物信息Table 1 Primer information

表2 熒光定量PCR反應(yīng)體系Table 2 RT-PCR reaction system

反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性 10 min，95℃、15 s，95℃、1 min，40個(gè)循環(huán)。每個(gè)試驗(yàn)組設(shè)定3個(gè)重復(fù)，擴(kuò)增結(jié)束用ABI 7500 Fast軟件收集CT值并用2-△△CT分析目的基因表達(dá)水平，用內(nèi)參基因Beta-actin矯正。

（5）實(shí)時(shí)熒光定量PCR產(chǎn)物電泳檢測(cè)擴(kuò)增特異性

取擴(kuò)增產(chǎn)物 4 μL 與 4 μL 2×Loading buffer混勻，電泳條件為120 V，15 min。

1.3.6 肌肉與皮下脂肪組織Western blot測(cè)定

（1）提取總蛋白方法參照RIPA裂解液說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

（2）用酶標(biāo)板法測(cè)定蛋白濃度，操作參照 BCA蛋白定量試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

（3）制膠槽灌入分離膠，無(wú)水乙醇?jí)浩侥z平面，待分離膠凝固后加入濃縮膠。凝固后每孔加40 mg蛋白，電壓80 V，待蛋白跑過(guò)濃縮膠將電壓調(diào)成120 V，直到溴酚藍(lán)指示劑跑至分離膠底部。

（4）取電泳分離條帶，參照蛋白Marker切下目的基因和內(nèi)參條帶。按照濾紙、凝膠、PVDF膜、濾紙的順序，每層之間不能有氣泡。確保正負(fù)極連接正確，電壓120 V開(kāi)始轉(zhuǎn)膜。

（5）將PVDF膜放入5%脫脂奶粉室溫封閉2 h。封閉后PVDF膜用TBST緩沖液浸洗3次，每次5 min，分別加入第一抗體（均按1﹕1 000稀釋?zhuān)┲糜诿撋珦u床4℃孵育過(guò)夜。次日取出PVDF膜用TBST緩沖液浸洗5次，每次5 min，加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的第二抗體（均按1﹕1 000稀釋?zhuān)?，置于脫色搖床室溫孵育2 h。

（6）按照ECL顯色液說(shuō)明書(shū)配制顯色液，避光顯色 1 min，用化學(xué)發(fā)光凝膠系統(tǒng)曝光后，確定最佳曝光條件、采集圖像。用Image J軟件處理目的條帶，計(jì)算灰度值，以 Beta-actin為管家基因計(jì)算目的條帶的相對(duì)表達(dá)量。

1.4 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤（Mean±SE）表示。采用GraphPad Prism 5.0（GraphPad Software公司，美國(guó)圣地亞哥）統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)兩品種間進(jìn)行獨(dú)立樣本非配對(duì) T檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析并作圖。兩組間不同小寫(xiě)字母表示P<0.05，不同大寫(xiě)字母表示P<0.01。

2 結(jié)果

2.1 XBC和ABC胴體性狀比較

由表 3可見(jiàn)，XBC凈肉率極顯著高于 ABC（P<0.01），而背膘厚度顯著低于 ABC（P<0.05）。XBC與ABC體重、胴體重、凈肉重、骨重、屠宰率、肉骨比、肌間脂肪等胴體性狀品種間無(wú)顯著差異（P>0.05）。

2.2 XBC和ABC肉品質(zhì)性狀比較

由表 4可見(jiàn)，XBC肉色亮度 L*顯著低于 ABC（P<0.05），XBC肉色澤偏暗，其余肉色a*、b*均差異不顯著（P>0.05）。XBC與ABC水分、灰分、IMF、嫩度均差異不顯著（P>0.05）。

2.3 XBC和ABC背最長(zhǎng)肌及皮下脂肪組織形態(tài)比較

由表5、圖1所示，XBC肌纖維直徑和單根肌纖維橫截面積均顯著大于ABC（P<0.05），而肌纖維密度無(wú)明顯差異（P>0.05）。由表6、圖2所示，XBC皮下脂肪單位面積脂肪細(xì)胞個(gè)數(shù)極顯著多于 ABC（P<0.01），而皮下脂肪細(xì)胞面積兩品種牛之間差異不顯著（P>0.05）。

表3 XBC和ABC胴體性狀比較Table 3 Comparison of carcass traits between XBC and ABC

表4 XBC和ABC部分肉品質(zhì)性狀比較Table 4 Comparison of meat quality traits between XBC and ABC

圖1 XBC與ABC背最長(zhǎng)肌斷面，H.E染色（10×20）Fig. 1 Slice of longissimus dorsi in XBC and ABC, H.E stain(10×20)

2.4 XBC和ABC背最長(zhǎng)肌和皮下脂肪組織中脂代謝相關(guān)基因的mRNA表達(dá)

由圖3可知，XBC與ABC背最長(zhǎng)肌和皮下脂肪5個(gè)基因mRNA表達(dá)量差異不顯著（P>0.05）。

圖2 XBC與ABC皮下脂肪切片，H.E染色（10×20）Fig. 2 Slice of the subcutaneous fats in XBC and ABC, H.E stain (10×20)

2.5 XBC和ABC FAS、HSL、LPL蛋白在背最長(zhǎng)肌和皮下脂肪組織中的表達(dá)差異

如圖4所示，利用Western blot檢測(cè)XBC與ABC背最長(zhǎng)肌和皮下脂肪組織中LEP、FABP4、HSL、LPL、FAS蛋白表達(dá)水平，只檢測(cè)到FAS、HSL、LPL蛋白表達(dá)，與預(yù)期條帶一致。由圖5可知，XBC背最長(zhǎng)肌組織中FAS的蛋白表達(dá)量極顯著低于ABC（P<0.01），HSL蛋白表達(dá)量也顯著低于ABC（P<0.05）；而皮下脂肪組織中只有 HSL蛋白表達(dá)量顯著低于 ABC（P<0.05）。

表5 XBC和ABC背最長(zhǎng)肌肌纖維組織學(xué)測(cè)量Table 5 Histological measurement results of longissimus dorsi in XBC and ABC

表6 XBC和ABC皮下脂肪組織細(xì)胞面積和數(shù)量比較Table 6 Comparison of the cell area and the quantity of adipose tissue between XBC and ABC

圖3 兩品種牛背最長(zhǎng)肌與皮下脂肪中LEP、HSL、LPL、FAS、FABP4基因mRNA相對(duì)表達(dá)量Fig. 3 The mRNA expression levels of LEP, HSL, LPL, FAS and FABP4 gene in longissimus dorsi and subcutaneous fat between XBC and ABC

圖4 Western blot檢測(cè)FAS、HSL、LPL蛋白的表達(dá)水平Fig. 4 The expression level of FAS, HSL and LPL proteins detected by Western blot

3 討論

3.1 XBC和ABC胴體性狀比較

胴體性狀是評(píng)價(jià)肉牛產(chǎn)肉性能的重要指標(biāo)。張明[21]比較了安西雜牛（黑安格斯?！廖鏖T(mén)塔爾牛）與西門(mén)塔爾牛凈肉率和背膘厚度，結(jié)果顯示安西雜牛的凈肉率和背膘厚度顯著高于西門(mén)塔爾牛，并且表明安西雜牛產(chǎn)肉性能較好。本研究發(fā)現(xiàn) XBC凈肉率極顯著高于 ABC，而背膘厚度顯著低于 ABC。說(shuō)明不同品種牛之間胴體性狀確實(shí)存在差異，XBC產(chǎn)肉性能較好。

圖5 XBC和ABC背最長(zhǎng)肌與皮下脂肪中FAS、HSL、LPL蛋白相對(duì)表達(dá)量比較Fig. 5 The differential expression level of FAS, HSL and LPL proteins in longissimus dorsi and subcutaneous fat between XBC and ABC

王國(guó)富等[22]比較了36月齡ABC、海福特牛和中國(guó)西門(mén)塔爾牛3個(gè)品種牛的胴體性狀，結(jié)果顯示ABC和海福特牛背膘厚度極顯著高于中國(guó)西門(mén)塔爾牛，并說(shuō)明 ABC和海福特牛脂肪沉積能力可能比中國(guó)西門(mén)塔爾品種牛強(qiáng)。本研究發(fā)現(xiàn) XBC背膘厚度顯著低于ABC，說(shuō)明ABC的脂肪沉積能力可能較強(qiáng)。

3.2 XBC和ABC肉品質(zhì)性狀

肉品質(zhì)是涉及肉品的表觀、質(zhì)地、風(fēng)味的綜合性狀，主要衡量指標(biāo)包括肉色、風(fēng)味物質(zhì)、大理石花紋、嫩度、硬度、多汁性以及pH、系水力、肌肉纖維結(jié)構(gòu)等[23-25]。胡猛等[26]比較了荷斯坦公牛與西門(mén)塔爾牛、XBC及新疆土種牛的肉色，結(jié)果顯示荷斯坦奶公牛的肉色 L*顯著高于西門(mén)塔爾牛、XBC和新疆土種牛。閆向民等[27]比較了不同月齡 XBC的肉色，發(fā)現(xiàn)高月齡組肉色L*顯著小于低月齡組，且高月齡組肉色優(yōu)于低月齡組。本研究發(fā)現(xiàn) XBC肉色指標(biāo) L*顯著低于ABC，說(shuō)明XBC肉色優(yōu)于ABC。

肌纖維特性影響肉的嫩度，肌纖維直徑越小，纖維密度越大，則肉的嫩度越好。曹芝等[28]研究了草原紅牛及夏洛萊牛、西門(mén)塔爾牛、紅安格斯牛的高代雜種牛背最長(zhǎng)肌纖維組織學(xué)結(jié)構(gòu)的差異及與嫩度的關(guān)系，結(jié)果顯示紅安格斯雜交牛的肌纖維直徑最小，肌節(jié)長(zhǎng)度最長(zhǎng)，說(shuō)明其嫩度最好。本研究結(jié)果顯示XBC肌纖維直徑和單根肌纖維橫截面積均顯著大于ABC，提示與XBC相比，ABC嫩度較好。

脂肪組織的形成和在不同部位的沉積直接影響肉品質(zhì)和產(chǎn)肉性能，細(xì)胞大小與大理石花紋密切相關(guān)[29]。ALBRECHT等[30]研究表明11月齡以后牛的脂肪細(xì)胞數(shù)量相對(duì)穩(wěn)定，脂肪細(xì)胞的沉積主要是由于脂肪細(xì)胞體積的增大。本結(jié)果顯示XBC與ABC皮下脂肪組織細(xì)胞面積無(wú)顯著差異，可 XBC皮下脂肪組織中單位面積脂肪細(xì)胞個(gè)數(shù)極顯著多于ABC，提示XBC脂肪組織細(xì)膩程度高于ABC，這可能與XBC背膘厚度顯著低于ABC有關(guān)。

3.3 XBC和ABC 5種脂肪代謝調(diào)控相關(guān)基因及其產(chǎn)物的表達(dá)

大量研究表明，LEP可以促進(jìn)甘油三酯轉(zhuǎn)化，抑制脂肪酸從頭合成、刺激脂肪酸氧化來(lái)抑制脂質(zhì)在脂肪細(xì)胞中積累，因此LEP與肌內(nèi)脂肪的沉積有關(guān)。BONNET等[10]比較了 ABC、利木贊牛、日本和牛與安格斯雜交牛3個(gè)品種肌內(nèi)脂肪LEP基因mRNA表達(dá)水平，結(jié)果表明3個(gè)品種皮下脂肪組織中LEP基因mRNA表達(dá)差異不顯著。而FABP4也是影響牛肉和肌內(nèi)脂肪含量的候選基因之一[31]。魏勝娟等[32]研究FABP4對(duì)牛脂肪細(xì)胞分化影響時(shí)發(fā)現(xiàn)FABP4正向調(diào)控脂質(zhì)代謝。ALBRECHT等[30]連續(xù)檢測(cè)了10—22月齡日本和牛與荷斯坦牛皮下脂肪組織中FABP4mRNA表達(dá)水平，結(jié)果表明這一階段這兩個(gè)品種牛皮下脂肪組織中FABP4表達(dá)沒(méi)有變化。FAS作為甘油三酯合成過(guò)程的關(guān)鍵酶，F(xiàn)AS基因表達(dá)水平的高低對(duì)肌內(nèi)脂肪的沉積會(huì)產(chǎn)生一定的影響。曲桂娟等[33]比較了3種雜交牛背最長(zhǎng)肌FASmRNA表達(dá)量，發(fā)現(xiàn)在3個(gè)品種間FASmRNA表達(dá)差異不顯著。本試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果顯示 XBC與 ABC皮下脂肪與背最長(zhǎng)肌中LEPmRNA、FABP4mRNA和FASmRNA表達(dá)均無(wú)品種間顯著差異，這可能與本試驗(yàn)測(cè)定的XBC和ABC肌內(nèi)脂肪含量無(wú)顯著差異有關(guān)。但戢爽[34]在比較延邊黃牛和延黃牛FASmRNA表達(dá)中發(fā)現(xiàn)延黃牛顯著高于延邊黃牛的結(jié)果與前述研究者和筆者的結(jié)果不一致，可能是因?yàn)槠贩N差異所致。

脂肪沉積是一個(gè)合成與分解動(dòng)態(tài)平衡過(guò)程，HSL基因和 LPL基因在脂肪分解過(guò)程起關(guān)鍵作用。REN等[35]報(bào)道在荷斯坦與夏洛來(lái)牛網(wǎng)膜脂肪和皮下脂肪組織中LPLmRNA表達(dá)差異不顯著，但未研究肌肉中的LPLmRNA表達(dá)。本結(jié)果表明XBC與ABC皮下脂肪中LPLmRNA表達(dá)差異不顯著，與上述結(jié)果相似。

3.4 XBC和ABC 5種脂肪代謝調(diào)控相關(guān)蛋白表達(dá)

趙稱(chēng)赫[36]研究表明蒙古牛肌內(nèi) FAS的活性相對(duì)較強(qiáng)。其實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明蒙古牛背最長(zhǎng)肌FAS表達(dá)量顯著高于西門(mén)塔爾，F(xiàn)AS表達(dá)量與肌內(nèi)脂肪含量存在正相關(guān)。本結(jié)果與上述研究結(jié)果一致。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)XBC背最長(zhǎng)肌組織中FAS蛋白表達(dá)量極顯著低于ABC，可能與XBC背膘厚度顯著低于ABC有關(guān)，其相關(guān)性有待進(jìn)一步研究。

HSL是動(dòng)物脂肪代謝過(guò)程中的關(guān)鍵酶。有研究表明HSL與肌內(nèi)脂肪含量存在正相關(guān)，并且會(huì)促進(jìn)肌內(nèi)脂肪的沉積[37]。本結(jié)果表明XBC皮下脂肪組織中HSL蛋白表達(dá)量顯著低于ABC，背最長(zhǎng)肌組織中HSL蛋白表達(dá)量顯著低于安格斯牛，說(shuō)明 ABC脂肪沉積能力高于XBC。

LPL在脂蛋白的運(yùn)輸過(guò)程和能量代謝方面發(fā)揮著重要作用。BONNET等[10]報(bào)道利木贊牛皮下脂肪中LPL表達(dá)水平顯著高于安格斯，指出LPL表達(dá)可能存在種間差異性。王剛等[38]也驗(yàn)證豬肌肉組織中LPL表達(dá)與肌內(nèi)脂肪含量顯著正相關(guān)，且品種不同其LPL與肌內(nèi)脂肪含量相關(guān)程度不同。本結(jié)果表明XBC與ABC LPL在皮下脂肪和背最長(zhǎng)肌表達(dá)差異不顯著。

FAS和 HSL分別為胴體脂肪合成代謝與分解代謝過(guò)程中的限速酶。在本試驗(yàn)中 ABC在皮下脂肪和背最長(zhǎng)肌中FAS、HSL蛋白表達(dá)均顯著高于XBC。說(shuō)明ABC脂肪沉積能力強(qiáng)。

4 結(jié)論

本研究比較發(fā)現(xiàn)新疆褐牛產(chǎn)肉性能較好；但純種安格斯牛肉色較亮，且嫩度較好。純種安格斯牛脂肪沉積能力強(qiáng)。兩品種間脂代謝相關(guān)基因產(chǎn)物、脂肪酸合成酶和激素敏感酯酶蛋白差異可能與純種安格斯牛背膘厚度差異有關(guān)。