王永杰，王繁華

（鶴壁市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，河南 458030）

西咪替丁片主要用于治療十二指腸潰瘍、胃潰瘍、反流性食管炎、應(yīng)激性潰瘍及卓-艾氏（Zollinger-Ellison）綜合征等相關(guān)疾病，在臨床上應(yīng)用廣泛［1，2］。西咪替丁主要通過(guò)作用于胃壁細(xì)胞上的H2受體，競(jìng)爭(zhēng)性抑制組胺作用。抑制基礎(chǔ)胃酸分泌［3］。也還有相關(guān)報(bào)道，西咪替丁具有抗腫瘤和哮喘等作用［4］。《中國(guó)藥典》2015 年版中規(guī)定［5］，西咪替丁片中西咪替丁含量采用紫外-可見(jiàn)分光光度法測(cè)定，該法專(zhuān)屬性較低，靈敏度也不及高效液相色譜法。因此，采用具有更高靈敏度的高效液相色譜法進(jìn)行測(cè)定，可以更準(zhǔn)確地檢測(cè)此種藥品的含量。本試驗(yàn)通過(guò)采用反相高效液相色譜法來(lái)測(cè)定西咪替丁片中西咪替丁的含量，操作簡(jiǎn)單，回收率高，平行性好，可以作為一種測(cè)定西咪替丁含量的方法。

1 儀器和試藥

1.1 儀器 Waters e2695-2998 高效液相色譜儀（Empower 2 工作站），ME104T/02 電子分析天平（梅特勒-托利多集團(tuán)），賽多利斯arium?mini 超純水系統(tǒng)（德國(guó)賽多利斯集團(tuán)），XY4-180E 型超聲波清洗機(jī)（上海析宇儀器有限公司）。

1.2 試藥 西咪替丁對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)100158-201406，99.8%）；色譜純甲醇（天津市四友精細(xì)化學(xué)品有限公司），色譜純磷酸（北京邁瑞達(dá)科技有限公司），分析純磷酸二氫鉀（蘇州市久恒化工有限公司），水為試驗(yàn)室自制超純水。西咪替丁片（上海信誼天平藥業(yè)有限公司，0.2 g，批號(hào)190810、190315、190107）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 Waters e2695-2998 高效液相色譜儀（Empower 2 工作站），SunFire C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動(dòng)相：甲醇-0.01 mol/L 的磷酸二氫鉀（用磷酸調(diào)節(jié)pH 為3.5）（70∶30），流速：1.0 ml/min，進(jìn)樣體積：10 μl，柱溫：30 ℃，檢測(cè)波長(zhǎng)：221 nm。

2．2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取西咪替丁對(duì)照品約20 mg，置于100 ml 棕色量瓶中，加入流動(dòng)相少許，超聲使溶解，放冷，用流動(dòng)相稀釋至相應(yīng)刻度后作為對(duì)照品貯備液。取對(duì)照品貯備液5 ml，放置于20 ml 棕色量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至相應(yīng)刻度，作為對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 取西咪替丁片20 片，研細(xì)，精密稱(chēng)取細(xì)粉（含西咪替丁約50 mg），置于100 ml棕色量瓶中，加流動(dòng)相超聲10 min，溶解后放冷，用流動(dòng)相定容至相應(yīng)刻度，搖勻，濾過(guò)，取過(guò)濾的澄清溶液10 ml，放置于100 ml 棕色量瓶?jī)?nèi)，用流動(dòng)相稀釋至相應(yīng)刻度，備用。

2.2.3 陰性對(duì)照溶液的制備 取不含西咪替丁主藥的各輔料適量，按照本藥的處方比例制備成陰性對(duì)照品，按照“2.2.2”項(xiàng)下的方法制備成陰性對(duì)照溶液。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 取上述“2.2”項(xiàng)下的對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照溶液，按照“2.1”項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣，結(jié)果該色譜條件下的色譜峰峰形對(duì)稱(chēng)，理論板數(shù)為19 625，出峰時(shí)間約為6 min，符合2015 年版《中國(guó)藥典》的相關(guān)規(guī)定。見(jiàn)圖1。

2.4 線性關(guān)系試驗(yàn) 精密量取“2.2.1”項(xiàng)下的對(duì)照品貯備液1、5、10、15 和25 ml 分別置于25 ml 棕色量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，按照“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行試驗(yàn)，記錄色譜圖。以峰面積（Y）對(duì)濃度（X）進(jìn)行線性回歸分析，計(jì)算可得回歸方程為Y=5 436X+1 529（r=0.999 8），計(jì)算結(jié)果表明西咪替丁在7.98~199.60 μg/ml的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗(yàn) 取“2.2.1”項(xiàng)下對(duì)照品溶液，按照“2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6 次，分別記錄色譜圖，計(jì)算可得其RSD 為0.75%（n=6），試驗(yàn)結(jié)果表明，在文中設(shè)置的條件下，西咪替丁的精密度高。

圖1 陰性對(duì)照（A）對(duì)照品（B）供試品（C）高效液相色譜圖

2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取批號(hào)190810 的樣品6 份，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制成供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜圖，按西咪替丁的峰面積計(jì)算，供試品的RSD 為0.64%（n=6）?？梢钥闯?，在此種條件下供試品重復(fù)性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取批號(hào)為190810 的樣品，按照“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，室溫下避光放置。分別在0、1、3、5、9、15 和24 h 取樣，取樣后立即進(jìn)樣檢測(cè)，分別記錄其高效液相色譜圖，根據(jù)西咪替丁的峰面積計(jì)算其RSD 為0.76%。結(jié)果表明，在此種條件下制備的供試品溶液在室溫下放置24 h 內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 回收率試驗(yàn) 取含量已知的批號(hào)為190810 的樣品9 份（每份含西咪替丁約25 mg），分別加入西咪替丁對(duì)照品20.04、25.05 和30.06 mg（用西咪替丁對(duì)照品配制成5.01 mg/ml 的母液，分別精密量取4、5 和6 ml）各3 份，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制成供試品加標(biāo)回收溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，最后以西咪替丁的峰面積計(jì)算其回收率。結(jié)果西咪替丁平均回收率為99.96%，RSD 為0.16%。見(jiàn)表1。

2.9 樣品含量測(cè)定對(duì)比 取批號(hào)為190810、190315和190107 的3 批供試品各2 份，按照“2.2.2”項(xiàng)下方法分別制成供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)樣。另取上述3 批供試品各2 份，按照2015 年版《中國(guó)藥典》中規(guī)定的方法測(cè)定西咪替丁片的含量。分別計(jì)算其含量，對(duì)計(jì)算結(jié)果進(jìn)行比較。見(jiàn)表2。

表1 西咪替丁回收率試驗(yàn)結(jié)果

表2 不同方法測(cè)定西咪替丁片含量結(jié)果

3 討論

3.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 按照“2.2.1”和“2.2.2”項(xiàng)下方法制備對(duì)照品溶液和供試品溶液，對(duì)其進(jìn)行紫外掃描檢測(cè)，最后發(fā)現(xiàn)在221 nm 的波長(zhǎng)處有最大吸收，因此選用了此波長(zhǎng)作為最后的檢測(cè)波長(zhǎng)。

3.2 流動(dòng)相的選擇 通過(guò)查詢(xún)文獻(xiàn)，發(fā)現(xiàn)有采用甲醇-水-乙腈、甲醇-水、乙腈-鹽等系統(tǒng)［6－8］作為流動(dòng)相，本文對(duì)此也進(jìn)行了試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)不是峰形不對(duì)稱(chēng)，就是出峰時(shí)間較晚，在本文設(shè)置的條件下，出峰時(shí)間約為6 min，峰形也對(duì)稱(chēng)，理論板數(shù)較高，因此采用了甲醇-0.01 mol/L磷酸二氫鉀（用磷酸調(diào)節(jié)pH 為3.5）（70∶30）作為最后的流動(dòng)相。

通過(guò)含量測(cè)定結(jié)果比較，發(fā)現(xiàn)紫外和液相所測(cè)得結(jié)果基本相同，但是高效液相的分離度更好，靈敏度高，自動(dòng)化程度也高。因此，本文通過(guò)試驗(yàn)所得到的高效液相色譜方法可以用于測(cè)定西咪替丁片含量。