姜 川

（沈陽醫(yī)學(xué)院，遼寧 沈陽 110034）

比格犬又稱“米格魯”，屬狩獵犬，是世界名犬之一，具有體型小發(fā)育快、性情溫順、嗅覺敏銳、運(yùn)動(dòng)能力佳等特點(diǎn)，受到養(yǎng)狗人士的推崇，曾被列為臺(tái)灣受歡迎的十大犬種之一。此外，比格犬也是近年來發(fā)現(xiàn)的較為理想的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型，具有實(shí)驗(yàn)可重復(fù)性、一致性、可比性等優(yōu)點(diǎn)，已普遍應(yīng)用于新藥臨床前毒理實(shí)驗(yàn)，基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究、放射病治療及實(shí)驗(yàn)外科等研究領(lǐng)域。

由于比格犬的炙手可熱，其大量繁育成為制約其發(fā)展的重要因素。比格犬單次發(fā)情，且乏情期長(zhǎng)達(dá)6～12個(gè)月；雖然外源激素可以誘導(dǎo)乏情期母犬發(fā)情，但發(fā)情的同步控制、超數(shù)排卵困難，確切的排卵和受精時(shí)間難以掌握。五子衍宗丸是中醫(yī)補(bǔ)腎益精的經(jīng)典名方，由枸杞子、菟絲子、五味子、覆盆子、車前子等中藥組成，其在改善和提高精子密度、治療不孕不育方面具有較好的療效，本實(shí)驗(yàn)主要探究了五子衍宗丸組方對(duì)公犬生殖能力的影響。

1 材料與方法

1.1 儀器與藥品

細(xì)胞計(jì)數(shù)儀［Bio Tech (IC1000)］，獸用血細(xì)胞分析儀（MEK-6450K）。五子衍宗丸(由枸杞子、菟絲子、覆盆子、五味子、車前子組成)由北京同仁堂股份有限公司同仁堂制藥廠生產(chǎn)。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

比格犬（Beagle犬）由北京希諾谷生物科技有限公司提供，選取16只性欲旺盛的2～3歲的比格公犬，平均體質(zhì)量12.36公斤。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及處理

比格公犬常規(guī)飼養(yǎng)5天后，隨機(jī)數(shù)表法將其分為對(duì)照組8只和五子衍宗丸組8只。對(duì)照組每天喂食全價(jià)飼料，自由采食；五子衍宗丸組用蒸餾水將成藥配制為混懸液，在全價(jià)飼料中拌料，根據(jù)人和犬的藥物等效劑量系數(shù)換算，五子衍宗丸組比格公犬飼喂藥30粒/只，每天2次，連續(xù)飼喂30天。母犬4只，誘導(dǎo)公犬爬跨。

1.4 觀察指標(biāo)及檢測(cè)方法

1.4.1 爬跨性行為 統(tǒng)計(jì)有爬跨性行為的比格公犬只數(shù)。

1.4.2 睪丸、附睪系數(shù) 比格公犬處死后，取出雙側(cè)睪丸和附睪稱重。并計(jì)算睪丸重量/體質(zhì)量為睪丸系數(shù)，附睪重量/體質(zhì)量為附睪系數(shù)。

1.4.3 精子品質(zhì)測(cè)定 給藥30天后采用按摩法采精，記錄采精量。取20微升精子懸液滴于載玻片上，倒置顯微鏡下鏡檢100個(gè)精子（5個(gè)視野），計(jì)數(shù)精子總數(shù)，向前快速運(yùn)動(dòng)、向前慢速運(yùn)動(dòng)、非向前運(yùn)動(dòng)和不運(yùn)動(dòng)精子數(shù)，計(jì)算精子密度、活力、活率和畸形率。

2 結(jié)果

2.1 比格公犬爬跨情況

兩組有爬跨性行為的比格公犬?dāng)?shù)量比較見表1。五子衍宗丸組有爬跨性行為的比格公犬?dāng)?shù)量為6.20±1.69，顯著高于對(duì)照組，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.2 睪丸、附睪系數(shù)

兩組比格公犬的睪丸、附睪系數(shù)比較見表2。結(jié)果顯示，五子衍宗丸組的睪丸、附睪系數(shù)與對(duì)照組相比，無明顯差異（P＞0.05）。

2.3 精子品質(zhì)測(cè)定

兩組比格公犬的精子品質(zhì)檢測(cè)情況見表3。結(jié)果顯示，五子衍宗丸組的采精量、精子密度、精子活力、精子活率與對(duì)照組相比都有顯著增高，精子畸形率明顯下降，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表1 兩組有爬跨性行為的比格公犬?dāng)?shù)量

表2 兩組比格公犬的睪丸、附睪系數(shù)比較

表3 兩組比格公犬的精子品質(zhì)測(cè)定

3 討論

3.1 比格犬繁殖體系現(xiàn)狀

現(xiàn)階段，我國(guó)寵物犬繁殖業(yè)仍處于較為初級(jí)的階段，犬繁殖作為寵物犬行業(yè)的上游產(chǎn)業(yè)，其對(duì)于整個(gè)寵物犬產(chǎn)業(yè)鏈具有十分重要的意義。比格犬作為最受歡迎的十大寵物犬犬種之一，其繁殖將直接影響我國(guó)寵物犬行業(yè)的發(fā)展。然而目前，比格犬繁殖行業(yè)人員魚龍混雜，飼養(yǎng)管理水平參差不齊，舍本逐利、不遵守科學(xué)繁殖、胡亂雜交的現(xiàn)象較為普遍。由于盲目迎合市場(chǎng)要求，常發(fā)生配種頻繁、營(yíng)養(yǎng)不科學(xué)、引入他系犬等情況，造成后代脫離原有品種及種公犬繁殖能力嚴(yán)重下降。另外，養(yǎng)殖戶普遍文化水平普遍偏低，學(xué)習(xí)能力較差，沒有科學(xué)的配種時(shí)間及方法，且比格犬的生活條件有限，其繁殖能力不能得到保障。

3.2 中藥組方五子衍宗丸

中藥五子衍宗丸最早源于唐代，《懸解錄》《新唐書·藝文志》等書中均有記載，被譽(yù)為古今第一種子方。方由枸杞子、菟絲子、五味子、覆盆子、車前子5種中藥組成，具有添精補(bǔ)髓、疏利腎氣、種嗣衍宗之功，主治腎虛精虧所致的腎氣不足、陽痿早衰、遺精早泄、尿后余瀝等癥?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，五子衍宗丸在生殖系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、腫瘤化療、抗衰老、提高免疫力、記憶力等方面均發(fā)揮重要作用。在生殖系統(tǒng)方面作用尤為明顯，可抑制睪丸細(xì)胞通路介導(dǎo)的細(xì)胞調(diào)亡過程，以及線粒體膜電位水平，從而提高睪丸細(xì)胞活率，增強(qiáng)精子活力，達(dá)到促進(jìn)生殖功能的作用。目前，五子衍宗丸多用在人和大小鼠上，偶有兔子，還未見在犬類上使用。韓亮等對(duì)五子衍宗丸治療腎精虧型男性不育進(jìn)行臨床觀察，發(fā)現(xiàn)五子衍宗丸可提高精液量、精子密度、精子活動(dòng)率，總有效率達(dá)81.7%，且對(duì)提高T、LH水平也有一定的作用；李培培等對(duì)五子衍宗丸影響夏季公兔生殖能力進(jìn)行研究，通過切片可明顯發(fā)現(xiàn)曲精小管排列緊密，管腔規(guī)則，附睪中精子面積增大，表明五子衍宗丸可以改善夏季公兔生殖能力低下的情況。

3.3 犬精液品質(zhì)檢查

母犬受胎率直接取決于公犬精液質(zhì)量，即公犬精液質(zhì)量的提高直接影響犬繁殖產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。精液受孕能力可通過客觀評(píng)價(jià)精子功能、觀察形態(tài)學(xué)指標(biāo)進(jìn)行評(píng)估。比格犬單次發(fā)情，且乏情期長(zhǎng)達(dá)6～12個(gè)月，故精液品質(zhì)的提高可有效提高受胎率，降低繁殖成本。精液品質(zhì)檢查主要包含對(duì)犬精液量、精子密度、精子活力和精子形態(tài)學(xué)這幾個(gè)方面的檢測(cè)。本實(shí)驗(yàn)表明，五子衍宗丸能明顯提高比格公犬的爬跨性行為次數(shù)，增加單次射精精子量、精子密度，提高精子活力和精子活率，精子畸形率明顯下降，顯著提高精液品質(zhì)。此外，睪丸、附睪系數(shù)一直是動(dòng)物毒理實(shí)驗(yàn)中常用的藥物安全評(píng)價(jià)指標(biāo)，睪丸、附睪系數(shù)增大表示發(fā)生充血、水腫或增生肥大等，表明藥物對(duì)生殖系統(tǒng)存在一定的毒理作用。本實(shí)驗(yàn)初步驗(yàn)證五子衍宗丸未對(duì)睪丸、附睪系數(shù)造成一定影響，其藥物安全性仍需其他藥理毒理實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證。