李睿 李革 張司敏 劉溪 蘇紅梅

[摘要] 目的 探討淋巴細胞特異蛋白1（LSP1）致病基因位點rs3817198多態(tài)性與乳癌臨床病理特征的相關(guān)性，為乳癌的診療提供新線索。方法 對105例乳癌病人及382例體檢健康者LSP1 rs3817198位點基因型進行檢測，分析乳癌臨床病理參數(shù)與基因型的相關(guān)性;Logistic回歸方法分析基因位點與乳癌發(fā)病風(fēng)險之間的關(guān)系。結(jié)果 乳癌組的初潮年齡小于健康對照組（t=5.291，P<0.05），無母乳喂養(yǎng)史、無生育史、腫瘤家族史與乳癌發(fā)病相關(guān)（χ2=3.930～7.265，P<0.05）。乳癌組與對照組LSP1 rs3817198位點的基因型分布差異有顯著性（χ2=8.100，P<0.05）。Logistic回歸分析顯示，LSP1 rs3817198位點TC、CC基因型增加乳癌的發(fā)病危險性（TC基因型：OR=2.017，95%CI=0.910～4.471，P<0.05;CC基因型：OR=2.684，95%CI=1.318～5.463，P<0.05）;絕經(jīng)、有哺乳史降低了乳癌發(fā)生風(fēng)險（絕經(jīng)：OR=0.998，95%CI=0.998～0.999，P<0.05;有哺乳史：OR=0.064，95%CI=0.010～0.408，P<0.05），而有腫瘤家族史及LSP1基因rs3817198位點TC、CC基因型增加了乳癌發(fā)生風(fēng)險（腫瘤家族史：OR=2.998，95%CI=1.456～6.172，P<0.05;CC+TC基因型：OR=3.051，95%CI=1.185～7.855，P<0.05）。基因型TC、CC乳癌病人的孕激素受體陰性率顯著高于基因型TT病人（χ2=5.970，P<0.05）。結(jié)論LSP1 rs3817198位點基因型TC、CC可能與乳癌預(yù)后不良有關(guān)，LSP1 rs3817198位點基因型可作為檢測婦女乳癌易感性的生物標(biāo)志物。

[關(guān)鍵詞] 淋巴細胞特異蛋白1;多態(tài)性，單核苷酸;乳房腫瘤;病理學(xué)，臨床

[中圖分類號] R737.9 ?[文獻標(biāo)志碼] A ?[文章編號] 2096-5532（2020）06-0719-04

doi：10.11712/jms.2096-5532.2020.56.174 [開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識碼（OSID）]

[網(wǎng)絡(luò)出版] https：//kns.cnki.net/kcms/detail/37.1517.R.20201016.1124.001.html;

[ABSTRACT] Objective To investigate the association of the polymorphism of the pathogenic gene locus rs3817198 of lymphocyte specific protein 1 （LSP1） with the clinicopathological features of breast cancer， and to provide new clues for the diagnosis and treatment of breast cancer. ?Methods The genotype of LSP1 rs3817198 locus was determined for 105 breast cancer patients and 382 healthy persons who underwent physical examination， and the association between clinicopathological parameters of breast cancer and genotype was analyzed. A Logistic regression analysis was used to investigate the association between this gene locus and the risk of breast cancer. ?Results The breast cancer group had a significantly younger age of menarche than the healthy control group （t=5.291，P<0.05）， and no history of breastfeeding， no history of childbirth， and a family history of tumor were associated with breast cancer （χ2=3.930-7.265，P<0.05）. There was a difference in the genotype distribution of LSP1 rs3817198 between the breast cancer group and the healthy control group （χ2=8.100，P<0.05）. The Logistic regression analysis showed that TC and CC genotypes of the LSP1 gene rs3817198 increased the risk of breast cancer （TC genotype： OR=2.017，95%CI=0.910-4.471，P<0.05; CC genotype： OR=2.684，95%CI=1.318-5.463，P<0.05）; menopause （OR=0.998，95%CI=0.998-0.999，P<0.05） and a history of breastfeeding （OR=0.064，95%CI=0.010-0.408） reduced the risk of breast cancer; a family history of tumor （OR=2.998，95%CI=1.456-6.172，P<0.05） and TC+CC genotype of the LSP1 gene rs3817198 （OR=3.051，95%CI=1.185-7.855，P<0.05） increased the risk of breast cancer. The breast cancer patients with TC and CC genotypes had a significantly higher negative rate of progesterone receptor than those with TT genotype （χ2=5.970，P<0.05）. ?Conclusion The TC and CC genotypes of the LSP1 gene rs3817198 may be associated with the poor prognosis of breast cancer， and the genotype of the LSP1 gene rs3817198 can be used as an important biomarker to detect womens susceptibility to breast cancer.

[KEY WORDS] lymphocyte specific protein 1; polymorphism， single nucleotide; breast neoplasms; pathology， clinical

乳癌為女性最常見惡性腫瘤之一，近年來其發(fā)病率逐年上升，居女性常見惡性腫瘤發(fā)病之首[1]。有研究顯示，2015年我國女性乳癌新發(fā)病例高達26.86萬，死亡6.95萬[2]，總發(fā)病數(shù)僅次于美國[3-4]。目前，乳癌的病因尚不明確，其發(fā)生和發(fā)展是一個復(fù)雜的多步驟過程，受多種因素的影響。有研究顯示，淋巴細胞特異蛋白1（LSP1）基因為乳癌易感性正相關(guān)基因，與正常乳房組織的生長、退化、纖維化以及乳房密度等有關(guān)[5-6]。本研究分析LSP1基因位點rs3817198單核苷酸多態(tài)性（SNP）與乳癌臨床病理特征的相關(guān)性，為乳癌的診療提供線索。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2013年6月—2018年1月于青島市市立醫(yī)院就診的乳癌病人105例（乳癌組），均為女性，年齡40～73歲，平均（51.28±11.29）歲。以同期年齡與其匹配的體檢健康者382例作為對照組。采集兩組研究對象血液樣本，收集兩組病人年齡、家族史等一般資料及乳癌組病人術(shù)后病理資料。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會審查通過，所有參與者均簽署知情同意書。

1.2 LSP1 rs3817198位點基因型檢測

根據(jù)GenBank dbSNP數(shù)據(jù)庫LSP1的SNP位點rs3817198設(shè)計引物和TaqMan探針進行基因位點檢測，其序列見表1。PCR反應(yīng)體積為25.0 μL，內(nèi)含：DNA模板50 ng，2×TaqMan Universal PCR Master Mix 10.0 μL（美國ABI公司），SNP位點PCR引物各0.5 μL，TaqMan探針各0.5 μL。反應(yīng)在PCR擴增儀（美國BioRad公司）中進行。擴增參數(shù)：95 ℃預(yù)變性5 min;95 ℃變性15 s，63 ℃退火1 min，共35個循環(huán)。用不同的熒光報告基團標(biāo)記的TaqMan探針分別與野生型和突變型基因雜交，結(jié)果由隨機軟件自動判讀。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 22.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)處理，計量資料用±s表示，數(shù)據(jù)間比較采用方差分析和秩和檢驗;計數(shù)資料比較采用χ2檢驗。采用Logistic回歸模型進行單因素分析，采用非條件邏輯回歸計算相對危險度的近似估計值優(yōu)勢比（OR）估計相關(guān)因素與乳癌發(fā)病的關(guān)聯(lián)度。

2 結(jié) ?果

2.1 兩組一般資料比較

乳癌組初潮年齡低于對照組，無母乳喂養(yǎng)史、未生育、有腫瘤家族史者占比高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=5.291，χ2=3.930～7.265，P<0.05）;兩組年齡、絕經(jīng)年齡、流產(chǎn)史等差異無顯著意義（P>0.05）。見表2。

2.2 LSP1 rs3817198位點基因型與乳癌關(guān)系

乳癌組與對照組LSP1 rs3817198位點的基因型分布差異有顯著性（χ2=8.100，P<0.05）。Logistic回歸分析顯示，LSP1 rs3817198位點TC、CC基因型增加乳癌的發(fā)病危險性（TC基因型：OR=2.017，95%CI=0.910～4.471，P<0.05;CC基因型：OR=2.684，95%CI=1.318～5.463，P<0.05）。見表3、4。

2.3 LSP1 rs3817198位點基因型與乳癌臨床病理參數(shù)關(guān)系

LSP1基因rs3817198位點基因型與乳癌病人的孕激素受體（PR）狀態(tài)顯著相關(guān)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=5.970，P<0.05），而與腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)、雌激素受體（ER）狀態(tài)、乳癌分子分型等無相關(guān)性 （P>0.05）。見表5。

2.4 乳癌致病危險因素的Logistic回歸分析

非條件Logistic回歸分析顯示，絕經(jīng)狀態(tài)、有哺乳史、腫瘤家族史、LSP1 rs3817198位點基因型等與乳癌發(fā)病相關(guān)，其中絕經(jīng)、有哺乳史降低了乳癌患病風(fēng)險（絕經(jīng)：OR=0.998，95%CI=0.998～0.999，P<0.05;有哺乳史：OR=0.064，95%CI=0.010～0.408，P<0.05），而有腫瘤家族史以及LSP1基因rs3817198位點TC、CC基因型增加了乳癌發(fā)生的風(fēng)險（腫瘤家族史：OR=2.998，95%CI=1.456～6.172，P<0.05;CC+TC基因型：OR=3.051，95%CI=1.185～7.855，P<0.05）。見表6。

3 討 ?論

乳癌嚴(yán)重危害女性的健康，其發(fā)生、發(fā)展受多種因素影響，其發(fā)病機制尚不明確，可能與基因和環(huán)境密切相關(guān)。個體因環(huán)境刺激產(chǎn)生的生理反應(yīng)可被多種遺傳變異調(diào)節(jié)。近年來研究表明，一小段基因變異可引起無數(shù)表型，從而在一定環(huán)境下影響疾病的易感性。SNP主要是指在基因組水平上由單個核苷酸變異所引起的DNA序列多態(tài)性，其在人群中的發(fā)生頻率大于1%，包括單堿基的轉(zhuǎn)換、顛換，它是人類可遺傳的變異中最常見的一種[7]。2007年，EASTON等[5]通過全基因組研究首次發(fā)現(xiàn)，位于LSP1基因的第10內(nèi)含子rs3817198位點與乳癌的發(fā)生相關(guān)[8]。LSP1是在造血細胞系和內(nèi)皮細胞中特異表達的一種與微絲結(jié)合的骨架蛋白。LSP1基因位于11號染色體，編碼淋巴細胞、中性粒細胞、內(nèi)皮細胞內(nèi)的F肌動蛋白結(jié)合蛋白，同時調(diào)節(jié)中性粒細胞的運動、纖維蛋白原基質(zhì)蛋白的黏附以及穿越內(nèi)皮細胞層等[9]。國內(nèi)對此基因的研究較少。本研究結(jié)果顯示，乳癌組LSP1基因rs3817198位點的基因型分布與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義，其基因型CC、TC可顯著增加乳癌的患病風(fēng)險。

本文研究結(jié)果顯示，哺乳時間長、初潮年齡晚為乳癌的保護因素，可能與經(jīng)產(chǎn)婦的乳房組織的增殖減弱、孕期激素水平的改變有關(guān)[10-11];而無生育史、月經(jīng)初潮年齡早與乳癌的發(fā)病有關(guān)，其作用機制可能與機體長時間處于較高水平性激素的環(huán)境有關(guān)，這與多個流行病學(xué)研究結(jié)果一致[12-14]。本研究未發(fā)現(xiàn)絕經(jīng)年齡與乳癌的發(fā)病危險有關(guān)。乳癌的發(fā)病受遺傳、環(huán)境、生活方式等的影響，而這些因素在不同地區(qū)存在差異，這可能是導(dǎo)致國內(nèi)外甚至不同地區(qū)的研究結(jié)果不完全相同的原因之一[2，15]。本文非條件Logistic回歸分析顯示，絕經(jīng)狀態(tài)、哺乳史、腫瘤家族史、LSP1基因rs3817198位點CC+TC基因型與乳癌發(fā)病相關(guān)，其中絕經(jīng)、有哺乳史降低了乳癌的發(fā)病風(fēng)險，而有腫瘤家族史、LSP1 CC+TC基因型為發(fā)生乳癌的危險因素。

本文LSP1基因rs3817198位點基因型與乳癌臨床病理相關(guān)性研究結(jié)果顯示，基因型TC+CC的PR陰性率顯著高于TT基因型者，而兩組ER狀態(tài)差異無統(tǒng)計學(xué)意義，可能與ER、PR等在乳癌原發(fā)腫瘤與復(fù)發(fā)腫瘤組織間表達存在差異有關(guān)，提示我們在進一步研究中需限定研究對象條件[16-17]。本文結(jié)果顯示，LSP1 rs3817198位點基因多態(tài)性與PR陰性有關(guān)，而PR陰性的乳癌病人常預(yù)后不良[18-20]，提示LSP1基因rs3817198位點基因型TC+CC可能與預(yù)后不良有關(guān);而LSP1 rs3817198位點基因多態(tài)性與乳癌分子分型無顯著相關(guān)性，分析原因可能是不同突變基因?qū)Σ煌愋汀⒉煌A段的乳癌的作用并不一致[21-23]。此外，本研究存在局限性，即選取的乳癌組樣本數(shù)量相對較少，結(jié)果存在一定的偏倚，下一步研究需增加樣本量，進一步明確基因突變與乳癌的組織學(xué)分級、分子分型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、5年存活率等的相關(guān)性。

綜上所述，絕經(jīng)、有哺乳史降低了乳癌的患病風(fēng)險，而有腫瘤家族史及LSP1基因rs3817198位點基因型TC+CC則增加了乳癌發(fā)生的風(fēng)險，LSP1基因rs3817198位點基因多態(tài)性與PR陰性表達有關(guān)，LSP1基因rs3817198位點基因型TC+CC可能與預(yù)后不良有關(guān)。LSP1基因rs3817198位點多態(tài)性可能為乳癌發(fā)病的獨立因素。

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（本文編輯 黃建鄉(xiāng)）