韓旭 葉飛

【摘?? 要】 本試驗(yàn)通過(guò)選取雞腸道中的菌種并對(duì)其進(jìn)行篩選，培養(yǎng)和鑒定，利用乳酸菌產(chǎn)酸有“溶鈣圈”特性利用MRS+CaCO3選擇培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)挑選，初步認(rèn)為菌株可能為乳酸菌屬。

【關(guān)鍵詞】 腸道;乳酸菌;篩選

中圖分類(lèi)號(hào)：S859.1????????????? 文獻(xiàn)識(shí)別碼：A?????????????? 文章編號(hào)：2096-1073（2020）11-0052-53

[Abstract] In this experiment， bacterial strains in the chicken intestinal tract were selected and screened for culture and identification. The culture and selection of culture medium by MRS+CaCO3 were conducted based on the acid production of lactobacillus with the "callysocytic" property. It was preliminarily believed that the bacterial strains might be lactobacillus.

[Key words] intestinal tract; Lactic acid bacteria; screening

乳酸菌是一種無(wú)芽孢的革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌，這些細(xì)菌在自然界中極其廣泛，其中大多數(shù)是人與動(dòng)物一種重要的微生物群，具有必要的生理功能，主要存在于人與動(dòng)物的腸道內(nèi)在道中，它有助于消化和吸收各種腸道內(nèi)的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，并調(diào)節(jié)腸道內(nèi)的pH值。雞腸粘膜上皮細(xì)胞表面及周?chē)じ捷^大乳酸菌的數(shù)量。本試驗(yàn)主要通過(guò)選取雞腸道中的菌種并對(duì)其進(jìn)行篩選、培養(yǎng)和鑒定，以進(jìn)一步確定其歸屬，對(duì)于研究雞腸道乳酸菌的功能有重要意義。

1? 材料與方法

1.1? 試驗(yàn)材料

10-15日齡的雞五只購(gòu)自吉林市九站街;酵母膏、牛肉膏、胰蛋白胨由北京奧博星生物技術(shù)有限公司提供;其他試驗(yàn)儀器設(shè)備及試劑均由吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院生物技術(shù)實(shí)驗(yàn)室提供。

1.2? 試驗(yàn)方法

1.2.1? 乳酸菌的分離??? 在超凈工作臺(tái)中，解刨分離雞盲腸內(nèi)黏膜表面附著的內(nèi)容物，將其融于無(wú)菌水中，保持試管中腸道內(nèi)容物稀釋度為10-1，取此試管中的1mL加入到裝有9mL生理鹽水的試管中，依次進(jìn)行梯度稀釋為10-1～10-6。然后取出稀釋度為10-4、10-5、10-6稀釋濃度的200ul內(nèi)容物懸液加于MRS-CaCO3選擇固體培養(yǎng)基上，涂布器將其均勻平布。帶培養(yǎng)基充分吸收菌懸液后，編號(hào)為S-1、S-2放入CO2培養(yǎng)箱中5%CO2濃度下，37℃倒置培養(yǎng)至平皿上有乳白色菌落。

1.2.2? 菌株革蘭氏染色鑒定??? 結(jié)晶紫進(jìn)行初染1min，用蒸餾水進(jìn)行沖洗→碘液再媒染1min，用蒸餾水進(jìn)行沖洗→乙醇再脫色30s，用蒸餾水進(jìn)行沖洗并用吸水紙吸取水分→番紅復(fù)染1min，用蒸餾水進(jìn)行沖洗，用吸水紙干燥后，觀察菌體形態(tài)與菌體染色情況。若為藍(lán)紫色則為G+菌，若為紅色則為G-菌。由于乳酸桿菌為G+菌，則可以判斷可能為乳酸桿菌。

1.2.3? 菌種各項(xiàng)能力指標(biāo)測(cè)定??? 產(chǎn)酸能力：將純化的菌株劃線(xiàn)接種于MRC-CaCO3培養(yǎng)基上，放入CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每日測(cè)定MRC-CaCO3培養(yǎng)基上透明圈的直徑，記錄相應(yīng)培養(yǎng)天數(shù)，乳酸菌產(chǎn)酸能力=透明圈直徑/天數(shù)，以比值的數(shù)值大小來(lái)判斷菌株產(chǎn)酸的能力。

生化指標(biāo)：挑取革蘭氏染色后鑒定為陽(yáng)性的菌株，對(duì)其進(jìn)行過(guò)氧化氫酶、硝酸鹽還原試驗(yàn)、明膠液化試驗(yàn)。

耐膽鹽能力：取12滅菌裝有7ml液體MRS培養(yǎng)基的試管，加入膽鹽后分別達(dá)到0.1%、0.3%和0.5%的濃度，然后將培養(yǎng)并計(jì)數(shù)的菌液加入MRS培養(yǎng)基中，使培養(yǎng)基中的乳酸菌數(shù)達(dá)到106CFU/ml，放二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)48h，用平板涂布法計(jì)算乳酸菌在該條件下的存活數(shù)。

2? 結(jié)果與分析

2.1? 菌種形態(tài)及革蘭氏染色反應(yīng)

觀察菌株的菌落形態(tài)，并對(duì)菌株進(jìn)行革蘭氏染色鑒定，結(jié)果見(jiàn)表1。表1顯示，其中有2株為G+桿菌，分別為L(zhǎng)-1和L-3。

2.2? 菌株各項(xiàng)能力指標(biāo)測(cè)定結(jié)果

菌株產(chǎn)酸能力測(cè)定、生化鑒定、耐膽鹽測(cè)定結(jié)果分別見(jiàn)表2、表3、表4。表2表明此兩菌株具有產(chǎn)酸能力;表3表明兩菌株均不能在接觸酶試驗(yàn)中產(chǎn)生氣泡，均不能還原硝酸鹽，不能液化明膠，試驗(yàn)結(jié)果為陰性，可初步認(rèn)為是乳酸桿菌屬;表4表明兩菌株能適應(yīng)0.1%～0.5%的膽鹽濃度。

3? 結(jié)論

本試驗(yàn)從雞腸道中成功分離出倆株菌株，經(jīng)過(guò)外表形態(tài)觀察為邊緣光滑且突出的乳白色菌落，經(jīng)過(guò)革蘭氏染色后結(jié)果顯示為陽(yáng)性菌，以及接觸酶、明膠液化、硝酸鹽等試驗(yàn)結(jié)果為陰性，初步認(rèn)定可能為乳酸菌屬。此菌種具體的信息，是否還有更大的發(fā)現(xiàn)和價(jià)值，還有待于進(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn)：

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[2] 李軍訓(xùn). 微生物固態(tài)發(fā)酵植物餅粕的研究[D]. 泰安：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)， 2013.

（編輯：李丹）