龍俊海， 陳 靈

（1.駐馬店技師學(xué)院，河南駐馬店 463000；2.河南省駐馬店農(nóng)業(yè)學(xué)校，河南駐馬店 463000）

目前，在養(yǎng)殖過程中通過添加外源性蛋白酶類來提高飼糧蛋白質(zhì)的消化率，降低其生產(chǎn)成本成為研究的熱點，蛋白酶具有補充內(nèi)源酶不足、提高飼料利用率、降低飼料成本、促進畜禽生長等多種作用，同時還可以降低糞便中含氮物質(zhì)的排放量，減少環(huán)境污染等（楊飛來，2019）。因此，蛋白酶被廣泛應(yīng)用于畜禽養(yǎng)殖業(yè)中。相關(guān)研究表明，在飼料中添加蛋白酶，可以降低豆粕的使用量，具有很強的應(yīng)用價值（侯振平，2017）。豆粕富含多種蛋白質(zhì)，其氨基酸組分均衡，是動物主要的植物蛋白飼料來源之一，但豆粕中含有胰蛋白酶抑制因子、抗原蛋白、不良寡糖等多種抗?fàn)I養(yǎng)因子，會對幼齡動物造成影響，降低飼料利用率（王國強，2016）。利用益生菌等微生物和蛋白酶進行混合發(fā)酵豆粕，可有效地消除或降低豆粕中的抗?fàn)I養(yǎng)因子，提高豆粕的利用率（郭萌萌，2019；胡瑞，2013）。本試驗將復(fù)合益生菌、蛋白酶進行混合發(fā)酵豆粕，以不同的比例替代飼料中普通豆粕，分析其對黃羽肉雞生長性能和免疫機能影響，為進一步的臨床應(yīng)用提供基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 蛋白酶制劑主要包括蛋白酶、淀粉酶、果膠酶、纖維素酶、木聚糖酶等，為粉狀固體，購自山東濟南諾能生物工程有限公司；乳酸桿菌、雙歧桿菌、黑曲霉菌菌種由本單位實驗室保存；豆粕購自中糧集團；禽流感H9抗原、新城疫抗原均購自中國藥品食品監(jiān)察所。禽用免疫球蛋白IgG、IgA ELISA Kit試劑盒均購自Elabscience公司。

1.2 混合發(fā)酵豆粕和普通豆粕主要營養(yǎng)成分的分析 由表1可知，蛋白酶與益生菌混合發(fā)酵豆粕的水分低于普通豆粕，粗蛋白質(zhì)、蘇氨酸、蛋氨酸、賴氨酸、必需氨基酸、非必需氨基酸等營養(yǎng)成分均高于普通豆粕。

1.3 試驗設(shè)計與基礎(chǔ)日糧配比 采用單因素設(shè)計試驗，選擇體重相近的3周齡黃羽肉雞200只（本市規(guī)?；S羽肉雞示范基地提供），隨機分成4組，每組5個重復(fù)，每個重復(fù)10只，1組飼喂基礎(chǔ)日糧為空白對照組，試驗2、3、4組分別用蛋白酶與益生菌混合發(fā)酵豆粕替代基礎(chǔ)日糧中20%、25%、30%普通豆粕，預(yù)試驗7 d，試驗期為21 d。每個重復(fù)組單獨平面飼養(yǎng)，自由采食和飲水。按常規(guī)的飼養(yǎng)管理方式進行飼養(yǎng)與管理，按照免疫程序?qū)υ囼炄怆u進行相關(guān)疫苗免疫接種。試驗肉雞基礎(chǔ)日糧參照美國NRC（1994）肉雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)配制，其日糧組成和營養(yǎng)水平見表2，采用玉米-豆粕型基礎(chǔ)日糧。

表1 營養(yǎng)成分的分析%

表2 日糧組成與營養(yǎng)水平

1.4 生長性能的測定 在試驗期間，每個試驗組中每只試驗肉雞空腹稱重，記錄每個試驗組試驗肉雞的采食料量和耗料量，計算各組的平均日采食量、平均日增重和料重比等生長性能指標(biāo)。

1.5 免疫指標(biāo)的測定 試驗結(jié)束后，每個試驗組隨機抽取10只試驗肉雞，翅中靜脈采血，分離血清，用血凝抑制試驗測定試驗肉雞新城疫、禽流感抗體效價水平。用ELISA方法測定血清中免疫球蛋白IgG、IgA含量。

1.6 數(shù)據(jù)分析 試驗數(shù)據(jù)采用SPSS 20.0軟件進行單因素方差分析，采用Duncan’s法進行差異顯著性分析，以P＜0.05表示差異顯著性。

2 結(jié)果與分析

2.1 蛋白酶與益生菌混合發(fā)酵豆粕替代豆粕對肉雞生長性能的影響 由表3可知，試驗2、3、4組的平均日增重均高于1組，其中試驗2組的平均日增重高于1組，差異性不顯著（P>0.05），試驗3、4組的平均日增重較 1組比分別提高17.2%、14.3%（P ＜ 0.05）， 試驗 2、3、4組之間相比，差異性不顯著（P>0.05）；試驗 2、3、4 組平均采食量均高于1組，差異性不顯著（P>0.05）；試驗2、3、4組的料重比均低于1組，試驗2組低于1組，差異性不顯著（P>0.05），試驗3、4組的料重比較1組比分別降低 14.3%、13.6% （P ＜ 0.05），試驗 2、3、4組之間相比，差異性不顯著（P>0.05）。

表3 蛋白酶與益生菌混合發(fā)酵豆粕替代豆粕對肉雞生長性能的檢測結(jié)果

2.2 蛋白酶與益生菌混合發(fā)酵豆粕替代豆粕對肉雞免疫指標(biāo)的影響 由表4可知，試驗2、3、4組AI、ND抗體效價水平均高于1組，其中2組高于1組，差異性不顯著（P ＜ 0.05），試驗 3、4組血清中AI、ND抗體效價水平較1組相比分別提高15.3%、14.7%、12.6%、11.5% （P ＜ 0.05），試驗 2、3、4 組之間相比，差異性不顯著（P>0.05）；試驗2、3、4組血清中IgG含量均高于1組，其中2組高于 1組，差異性不顯著（P ＜ 0.05），試驗 3、4組血清中IgG含量較1組相比分別提高15.8%、14.9% （P ＜ 0.05），試驗 2、3、4 組之間相比，差異性不顯著（P>0.05）；試驗 2、3、4 組血清中 IgA 含量均高于1組，差異性不顯著（P>0.05）。

表4 蛋白酶與益生菌混合發(fā)酵豆粕替代豆粕對肉雞免疫指標(biāo)的檢測結(jié)果

3 討論

豆粕中含有多種抗?fàn)I養(yǎng)因子，這些抗?fàn)I養(yǎng)因子可以嚴(yán)重影響其他營養(yǎng)物質(zhì)的消化與吸收，利用益生菌和蛋白酶混合發(fā)酵可將豆粕中大分子物質(zhì)降解為易被動物消化和吸收的小分子多肽類物質(zhì)和蛋白質(zhì)，另外益生菌中含氨基酸、維生素、有機酸及未知生長因子等，可以提高飼料的適口性，調(diào)節(jié)胃腸道微生物區(qū)系，提高動物生產(chǎn)性能，減少腹瀉等消化道疾?。詈Ｏ?，2016；俞清霞，2011；唐翔宇，2008）。本試驗研究表明，試驗3、4組的平均日增重較 1組比分別提高17.2%、14.3%（P ＜ 0.05）， 試驗 2、3、4組平均采食量均高于1組（P>0.05），試驗 3、4組的料重比較1組比分別降低14.3%、13.6% （P＜0.05）。說明不同水平的蛋白酶與益生菌混合發(fā)酵豆粕替代基礎(chǔ)日糧中普通豆粕，可以提高肉雞的平均日增重和平均采食量，降低料肉比，因此提高肉雞的生長性能。與楊海霞（2016）報道的復(fù)合益生菌發(fā)酵豆粕可以提高仔豬生長性能結(jié)果一致。

在肉雞的養(yǎng)殖過程中，禽流感、新城疫等病毒性疾病是危害養(yǎng)雞業(yè)主要傳染性疾病之一，尤其禽流感、新城疫可以感染不同日齡的雞，其死亡率高達75%以上，該病主要通過疫苗免疫進行預(yù)防，其禽流感、新城疫抗體水平的變化反映了機體免疫機能之一 （仇薪鑫，2019；蔡艷，2018）。免疫球蛋白IgG、IgA是介導(dǎo)動物機體體液免疫主要抗體，在體液免疫過程中起重要的作用（張召興，2017）。本試驗研究表明，試驗3、4組血清中AI、ND抗體效價水平較1組相比分別提高 15.3%、14.7%、12.6%、11.5% （P ＜ 0.05），試驗3、4組血清中IgG含量較1組相比分別提高 15.8%、14.9%（P ＜ 0.05），試驗 2、3、4 組血清中IgA含量均高于1組（P>0.05）。說明不同水平的蛋白酶與益生菌混合發(fā)酵豆粕替代基礎(chǔ)日糧中普通豆粕，可以提高肉雞的免疫機能?？赡苡捎诙蛊赏ㄟ^益生菌和蛋白酶混合發(fā)酵后，益生菌中所含的營養(yǎng)物質(zhì)及物質(zhì)因子可刺激肉雞的免疫系統(tǒng)，促使機體內(nèi)免疫細胞活化，促使機體產(chǎn)生抗體，提高肉雞機體的免疫水平。

4 結(jié)論

本試驗條件下，蛋白酶與益生菌混合發(fā)酵豆粕替代飼料中的25%普通豆粕，可以提高肉雞生長性能和免疫機能。