孟玉環(huán)

摘要：目的：建立蕎麥粉中總黃酮含量的測(cè)定方法。方法：以蘆丁為對(duì)照品，甲醇為溶劑，恒溫振蕩提取，分光光度計(jì)測(cè)定蕎麥粉中總黃酮含量。結(jié)果：蘆丁在0.00125～0.0200mg/mL范圍內(nèi)線性良好，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.2%，回收率在93.8%～98.5%之間。結(jié)論：該方法準(zhǔn)確可靠，可用于日常檢驗(yàn)工作。

關(guān)鍵詞：蕎麥粉；分光光度法；總黃酮

蕎麥?zhǔn)且环N營(yíng)養(yǎng)豐富又兼具保健功能的藥食兩用植物，其富含的黃酮類化合物有降血糖血脂、防癌抗氧化等功效，因此也被作為蕎麥及其制品的重要評(píng)價(jià)指標(biāo)。本研究參照NY/T1295-2007標(biāo)準(zhǔn)方法，建立了以蘆丁為對(duì)照品、甲醇為溶劑、恒溫振蕩提取、分光光度計(jì)測(cè)定蕎麥粉中總黃酮含量的實(shí)驗(yàn)方法。

1. 材料與方法

1.1 材料與試劑

蕎麥粉為超市自購(gòu)袋裝（200g/袋）；蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品（德國(guó)DR，批號(hào)：G165751）；三氯化鋁、乙酸鉀、甲醇均為分析純；實(shí)驗(yàn)用水為三級(jí)水。

1.2 儀器與設(shè)備

721G可見(jiàn)分光光度計(jì)（上海儀電公司）；ME204電子天平（梅特勒-托利多）；恒溫水浴振蕩器、離心機(jī)、常規(guī)玻璃儀器。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

準(zhǔn)確吸取一定濃度系列的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（0.0500mg/mL）于10mL容量瓶中，分別加入0.1mol/L的三氯化鋁溶液2mL、1mol/L的乙酸鉀溶液3mL，用甲醇水溶液（7+3）定容，搖勻后靜置0.5h，配制成標(biāo)準(zhǔn)工作系列，其濃度如表1。同時(shí)作空白。使用可見(jiàn)分光光度計(jì)在波長(zhǎng)420nm處測(cè)吸光度（A），以A為橫坐標(biāo)，C為縱坐標(biāo)，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.3.2 試樣溶液的制備

稱取0.35g（精確值0.0001g）蕎麥粉試樣于具塞三角瓶中，加入30mL甲醇水溶液（7+3），蓋緊瓶塞于65℃、160r/min的水浴振蕩器中振蕩2h，趁熱過(guò)濾后轉(zhuǎn)移入50mL容量瓶中，用甲醇水溶液洗滌殘?jiān)喜V液并定容、搖勻，制得待測(cè)液。

1.3.3 試樣溶液的測(cè)定

準(zhǔn)確吸取1.0mL待測(cè)液于10mL容量瓶中，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備方法依次加入試劑溶液，靜置0.5h后離心10min，依前法測(cè)得吸光度，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算試樣中總黃酮濃度。

2. 結(jié)果與討論

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

采用上述方法測(cè)定配制的標(biāo)準(zhǔn)系列，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，如圖1?；貧w方程為y=0.0275x-0.0001，R2=0.9993，表明對(duì)照品蘆丁在0.00125～0.0200mg/mL范圍內(nèi)線性良好。

2.2 精密度試驗(yàn)

采用上述方法對(duì)某蕎麥粉試樣進(jìn)行6次平行測(cè)定，記錄吸光度值，計(jì)算得總黃酮含量分別為0.34、0.33、0.32、0.33、0.31、0.33g/100g，RSD為 3.2%，表明精密度較好。

2.3 加標(biāo)回收試驗(yàn)

稱取已知總黃酮含量的蕎麥粉試樣6份，準(zhǔn)確吸取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶按低、中、高濃度（每個(gè)水平做平行實(shí)驗(yàn)）依次加入0.5mg、2.5mg、5mg蘆丁對(duì)照品，按照本實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行試樣處理和吸光度測(cè)定，計(jì)算得加標(biāo)回收率在93.8%～98.5%之間，符合GB/T 27404-2008的規(guī)定。

2.4準(zhǔn)確度試驗(yàn)

為確認(rèn)本實(shí)驗(yàn)方法的準(zhǔn)確性，在期間精密度條件下對(duì)某蕎麥粉試樣進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部人員比對(duì)試驗(yàn)，兩位檢驗(yàn)員測(cè)得該蕎麥粉中總黃酮含量分別為0.42g/100g、0.40g/100g，兩次獨(dú)立測(cè)定誤差在NY/T 1295-2007要求范圍內(nèi)。

3. 結(jié)論

近年來(lái)，隨著國(guó)民生活質(zhì)量提升，蕎麥作為保健食品愈為被廣大消費(fèi)者所重視。本研究建立的測(cè)定蕎麥粉中總黃酮含量的方法操作簡(jiǎn)便、成本較低、準(zhǔn)確可靠，可以滿足基層實(shí)驗(yàn)室食品檢測(cè)的需求，也可為大眾食品安全提供保障。