郭 雷，宋 宇，邵天舒，周長(zhǎng)明

（1.北京市藥品檢驗(yàn)所，北京102206；2.北京大學(xué)藥學(xué)院，北京100191）

腸內(nèi)營(yíng)養(yǎng)劑是用于臨床腸內(nèi)營(yíng)養(yǎng)支持的各種產(chǎn)品的總稱，有助于維持腸黏膜細(xì)胞結(jié)構(gòu)與功能的完整性，促進(jìn)黏膜的增生、修復(fù)，維護(hù)腸黏膜屏障，減少腸源性感染的發(fā)生[1]。鐵（Fe）、鋅（Zn）、銅（Cu）、錳（Mn）是人體必需的微量元素，具有重要的生理功能，F(xiàn)e可維持機(jī)體正常的免疫功能，Zn參與體內(nèi)酶的合成并促進(jìn)發(fā)育，Mn維持大腦正常代謝，Cu對(duì)中樞神經(jīng)、免疫系統(tǒng)及心、肝等內(nèi)臟的發(fā)育和功能有重要影響[2－4]。因此，監(jiān)測(cè)腸內(nèi)營(yíng)養(yǎng)劑中各金屬元素的含量對(duì)其質(zhì)量控制十分重要。目前，常用于測(cè)定金屬元素的方法有原子吸收光譜法[5－7]、原子熒光光度法[8－10]、原子發(fā)射光譜法[11－13]等。電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP－MS）法是20世紀(jì)80年代后發(fā)展起來(lái)的技術(shù)，其靈敏度高、檢出限低、線性范圍寬，且能實(shí)現(xiàn)多元素同時(shí)測(cè)定，目前已廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥、環(huán)境等領(lǐng)域。本研究中建立了微波消解（MAE）－ICP－MS測(cè)定整蛋白型腸內(nèi)營(yíng)養(yǎng)劑的方法，腸內(nèi)營(yíng)養(yǎng)劑用微波消解，對(duì)ICP－MS儀器工作參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化，采用動(dòng)能歧視模式（KED）同時(shí)檢測(cè)多種元素，并用鍺（Ge）作為內(nèi)標(biāo)進(jìn)行校正?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

NexION 300X型電感耦合等離子體質(zhì)譜儀（美國(guó)Perkin Elmer公司）；ETHOS One型微波消解儀（意大利Milestone公司）；Milli－Q型超純水機(jī)（美國(guó)Millipore公司）。

1.2 試藥

65%硝酸（優(yōu)級(jí)純，德國(guó)Merck公司）；ICP－MS調(diào)諧溶液（美國(guó)Perkin Elmer公司）；Fe標(biāo)準(zhǔn)貯備液（100μg／mL），Zn標(biāo)準(zhǔn)貯備液（1 000μg／mL），Cu標(biāo)準(zhǔn)貯備液（1 000μg／mL），Mn標(biāo)準(zhǔn)貯備液（1 000μg／mL），內(nèi)標(biāo)Ge標(biāo)準(zhǔn)貯備液（1 000μg／mL），均購(gòu)自國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心；水為超純水（＞18.2 MΩ／cm）；國(guó)家一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)參考物質(zhì)（人發(fā)）[GBW07601a(GSB－20)]，整蛋白型腸內(nèi)營(yíng)養(yǎng)劑(規(guī)格為每袋62.5 g，批號(hào)分別為0136783221，0136752606，0136783224)，均為2017年國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)提高課題檢驗(yàn)用樣品。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液制備

內(nèi)標(biāo)工作溶液：精密量取Ge標(biāo)準(zhǔn)貯備液適量，用5%硝酸配制成質(zhì)量濃度為1μg／mL的內(nèi)標(biāo)工作溶液，置冰箱冷藏。

混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：精密量取Fe，Zn，Cu，Mn標(biāo)準(zhǔn)貯備液適量，置樣品瓶中，得各元素質(zhì)量濃度均為1μg／L的混合標(biāo)準(zhǔn)貯備液；精密量取混合標(biāo)準(zhǔn)貯備液1，0.7，0.5，0.3，0.1，0.01 mL，精密加入等量?jī)?nèi)標(biāo)工作溶液0.1 mL，用5%硝酸溶液稀釋至10 mL，得各待測(cè)元素質(zhì)量濃度分別為100，70，50，30，10，1μg／mL，內(nèi)標(biāo)元素Ge的質(zhì)量濃度為10μg／L的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，置冰箱冷藏保存。

2.2 樣品前處理

稱取樣品1.0 g，精密稱定，置微波消解罐中，加入硝酸6 mL，混勻，浸泡過(guò)夜，蓋上內(nèi)外蓋后，移入微波消解儀中消解，消解完全后，取消解罐置電熱板上，緩緩加熱至紅棕色蒸汽揮盡并近干，待降至室溫后，再用1%硝酸分次轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶中，并用1%硝酸洗滌消解罐，用1%硝酸定容，混勻，作為供試品溶液。同時(shí)制備空白試劑。微波消解程序見表1。

表1 微波消解程序

2.3 ICP－MS條件

采用KED模式進(jìn)行檢測(cè)，儀器用調(diào)諧溶液調(diào)諧在整個(gè)質(zhì)量范圍內(nèi)具有高靈敏度[鈹(Be)靈敏度大于3 000、鎂(Mg)靈敏度大于20 000、銦(In)靈敏度大于50 000、鈾(U)靈敏度大于40 000]及低干擾水平CeO 155.9／Ce 139.905≤0.025和Ce2＋69.952 7／Ce 139.905≤0.03）。ICP－MS相關(guān)參數(shù)：射頻功率為1350W，載氣流速為1.10 L／min，輔助氣流速為1.20 L／min，蠕動(dòng)泵轉(zhuǎn)速為24 r／min，掃描次數(shù)為30次，停留時(shí)間為50 s，重復(fù)次數(shù)為3次，掃描模式為跳峰模式，氦氣流速為4 L／min。

2.4 方法學(xué)考察

線性關(guān)系和檢出限考察：按2.1項(xiàng)下方法配制混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，并進(jìn)行測(cè)定，以各元素與內(nèi)標(biāo)測(cè)量值的比值（Y）為縱坐標(biāo)、相應(yīng)質(zhì)量濃度（X，μg／L）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得各元素的回歸方程及相關(guān)系數(shù)（r）。連續(xù)測(cè)定空白溶液11次，計(jì)算4種元素的標(biāo)準(zhǔn)偏差，計(jì)算得方法檢測(cè)限（LOD）和定量限（LOQ）。結(jié)果見表2。

表2 各元素的線性關(guān)系、檢出限及定量限考察結(jié)果

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)分析：對(duì)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(人發(fā))進(jìn)行分析測(cè)定，通過(guò)3次平行測(cè)定，得各微量元素質(zhì)量濃度平均值和RSD，并與標(biāo)準(zhǔn)值進(jìn)行比較。結(jié)果見表3?？梢姡魑⒘吭販y(cè)定值在標(biāo)準(zhǔn)值的范圍內(nèi)，表明方法準(zhǔn)確性好。

加樣回收試驗(yàn)和精密度試驗(yàn)：取樣品1 g，精密稱定，共9份，平均分為3組，分別精密加入各元素質(zhì)量濃度為30，60，90 mg／L的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液各1 mL，按2.2項(xiàng)下方法處理后進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算精密度和加樣回收率。結(jié)果見表4。

表3 國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（人發(fā)）分析結(jié)果（n＝3）

表4 加樣回收試驗(yàn)和精密度試驗(yàn)結(jié)果（n＝3）

2.5 樣品含量測(cè)定

采用擬訂方法對(duì)3批樣品中4種金屬元素含量進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見表5。

表5 3批樣品中4種金屬元素含量測(cè)定結(jié)果（每100 g的含量）

3 討論

利用現(xiàn)代技術(shù)測(cè)定微量元素含量時(shí)，試驗(yàn)誤差多來(lái)源于樣品前處理過(guò)程，如干法灰化法[14]、酸提取法[15]等存在著樣品易損、試劑使用量大、環(huán)境污染嚴(yán)重等問(wèn)題。本研究中采用全密封的聚四氟乙烯消化罐微波消解，在高溫高壓條件下將樣品徹底消解，具有試劑消耗少、空白值低、無(wú)容器吸附、回收完全等優(yōu)點(diǎn)[16]。在消解過(guò)程中，選擇優(yōu)級(jí)純的硝酸，相較于其他無(wú)機(jī)酸，硝酸產(chǎn)生的多原子離子較少，對(duì)待測(cè)元素干擾較小[17]。

綜上所述，采用MAE－ICP－MS方法對(duì)整蛋白型腸內(nèi)營(yíng)養(yǎng)劑進(jìn)行微量元素分析，檢測(cè)限為0.042 6～0.139 3μg／kg，方法精密度試驗(yàn)的RSD為0.78%～4.04%，加樣回收率為100.41%～115.14%，與國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的測(cè)定結(jié)果與證書標(biāo)準(zhǔn)值相符。該方法檢測(cè)限低，靈敏度高，可同時(shí)測(cè)定多種元素，且具有較高的準(zhǔn)確度和精密度，可用于整蛋白型腸內(nèi)營(yíng)養(yǎng)劑中Fe，Zn，Cu，Mn元素的含量測(cè)定，為其他腸內(nèi)營(yíng)養(yǎng)劑類藥物微量元素的測(cè)定提供了參考。