崔 華，潘 茗，李 欣，張 海，曲素欣

（1.山東省青島市婦女兒童醫(yī)院，山東 青島266000；2.山東省青島市市立醫(yī)院，山東 青島266000；3.上海市第一婦嬰保健院，上海200040）

丙戊酸鈉是一種廣譜抗癲癇藥物，臨床應(yīng)用廣泛，常見劑型主要為緩釋片、普通片劑和注射劑[1]，丙戊酸鈉口服液因其味甜易被患兒接受。山東省青島市婦女兒童醫(yī)院對丙戊酸鈉口服液的管理要求為藥房擺藥后由病區(qū)護(hù)士統(tǒng)一存放在治療室，以單劑量發(fā)放給患者使用，使用效期規(guī)定為開蓋后1個(gè)月。經(jīng)調(diào)研發(fā)現(xiàn)，癲癇患兒每次服用劑量小，治療周期長，開啟30 d后常有剩余，考慮到經(jīng)濟(jì)因素，多數(shù)家長仍會給患兒喂服剩余藥品。經(jīng)常頻繁開蓋服用會存在藥物穩(wěn)定性差和被污染的風(fēng)險(xiǎn)，藥品能否存放更長的時(shí)間是患者及病區(qū)護(hù)士都關(guān)心的問題。本研究中采用長期留樣觀察法，以3例住院癲癇患兒的丙戊酸鈉口服液為研究對象，每隔15 d取樣1次，通過檢測藥品的性狀、微生物限度、有效含量，對丙戊酸鈉口服液的穩(wěn)定性進(jìn)行評價(jià)?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器、試藥與菌種

1.1 儀器

PHS－3G型pH計(jì)(浙江賽德儀器設(shè)備有限公司)；Agilent 1100型高效液相色譜儀（美國安捷倫公司）；HTY－302G型微生物限度檢驗(yàn)儀（杭州泰林生物技術(shù)設(shè)備有限公司）；H·SWX－600BS型電熱恒溫水溫箱（上海新苗醫(yī)療器械制造有限公司）；TD5002A型電子分析天平（余姚市金諾天平儀器有限公司，精度為萬分之一）；SHP－160E型生化培養(yǎng)箱（上海三發(fā)科學(xué)儀器有限公司）；INE500型電熱恒溫培養(yǎng)箱（德國美墨爾特公司）。

1.2 試藥

丙戊酸鈉口服液（德巴金，賽諾菲＜杭州＞制藥有限公司，批號為8HG0409，規(guī)格為每瓶300 mL∶12 g）；丙戊酸鈉對照品（批號為C14P－WAL4，國家藥品標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，含量為94.5%，中國食品藥品檢定研究院）；磷酸二氫鈉（廣東省化學(xué)試劑工程技術(shù)研究開發(fā)中心）；pH 7.0無菌氯化鈉－蛋白胨緩沖液（批號為3104420），麥康凱液體培養(yǎng)基（批號為151119），胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基（批號為3105660），沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（批號為3104045），均由廣東環(huán)凱微生物科技有限公司提供；培養(yǎng)基適用性檢查均符合2015年版《中國藥典》要求；乙腈(美國默克公司）為色譜純，其他試劑均為色譜純。

1.3 菌種

白色念珠菌Candida albicans[CMCC（F）98001]，黑曲霉Aspergillus niger[CMCC（F）98003]，銅綠假單胞菌Pseudomonas aeruginosa[CMCC（B）10104]，金黃色葡萄球菌Staphylococcus aureus[CMCC（B）26003]，枯草芽孢桿菌Bacillus subtilis[CMCC（B）63501]，大腸埃希菌Escherichia coli[CMCC（B）44102]，傳代均不超過5代，均由中國食品藥品檢定研究院提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 性狀及pH測定

取3例住院癲癇患兒的丙戊酸鈉口服溶液，開蓋后每隔15 d取樣1次，并進(jìn)行編號，共計(jì)15份樣品，觀察每份樣品的顏色及澄清度；每份樣品取1 mL，加水20 mL溶解，按2015年版《中國藥典（四部）》通則0631[2]項(xiàng)下方法測定其pH。

2.2 丙戊酸鈉含量測定

2.2.1 色譜條件[3－5]

色譜柱：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，CAPCELL PAK C18MGⅡS5柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；流動(dòng)相：0.01 mol／L磷酸二氫鈉（磷酸調(diào)節(jié)pH至2.3）－乙腈（63∶37，V／V）；流速：1.0 mL／min；進(jìn)樣量：10μL；檢測波長：210 nm；柱溫：30℃。

2.2.2 溶液制備

供試品溶液：精密量取樣品5.0 mL，置100 mL容量瓶中，用擬訂流動(dòng)相適量沖洗移液管至內(nèi)壁無色，并稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

對照品溶液：取丙戊酸鈉對照品適量，精密稱定，按供試品溶液制備方法制備每1 mL含丙戊酸鈉2 mg的溶液，即得。

2.2.3 方法學(xué)考察

系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：取對照品溶液和供試品溶液各10μL，按擬訂色譜條件進(jìn)樣測定，記錄色譜圖，詳見圖1。結(jié)果丙戊酸鈉峰形對稱，保留時(shí)間為15.257 min，輔料對測定無干擾[6－7]。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察：取對照品溶液適量，用流動(dòng)相稀釋成質(zhì)量濃度分別為0.5，1.0，1.5，2.0，2.5 mg／mL的丙戊酸鈉溶液，精密量取10μL，按擬訂色譜條件進(jìn)樣，以丙戊酸鈉質(zhì)量濃度（X,mg／mL）為橫坐標(biāo)、峰面積（Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y＝15.819 X－0.054 8,r＝0.999 9（n＝5）。結(jié)果表明，丙戊酸鈉質(zhì)量濃度在0.99～2.92 mg／mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn)：取對照品溶液適量，按擬訂色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，測定。結(jié)果丙戊酸鈉峰面積的RSD為0.80%（n＝6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取供試品溶液適量，分別于室溫下放置0，2，4，8，10,19 h時(shí)按擬訂色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積。結(jié)果的RSD為0.96%（n＝6），表明供試品溶液在室溫放置19 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

加樣回收試驗(yàn)：精密量取已知含量的樣品溶液5 mL,共9份，分別置100 mL容量瓶中，分別加入丙戊酸鈉原料藥（批號為C14P－WAL4）160，200，240 mg，配得標(biāo)示量分別為80%，100%，120%的丙戊酸鈉供試品溶液，每個(gè)質(zhì)量濃度分別制備3份樣品，按擬訂色譜條件進(jìn)樣測定，記錄色譜圖，并計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1 丙戊酸鈉加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n＝9）

2.2.4 樣品含量測定

取2.1項(xiàng)下15份樣品各10μL，按擬訂色譜條件進(jìn)樣測定，記錄色譜圖，以外標(biāo)法計(jì)算丙戊酸鈉的含量。

2.3 微生物限度檢測

2.3.1 供試液制備

取樣品10 mL，加pH 7.0無菌氯化鈉－蛋白胨緩沖液至100 mL，混勻，制成1∶10供試液。

2.3.2 微生物限度檢查方法適用性試驗(yàn)（平皿法）

按2015年版《中國藥典（四部）》通則1106[2]平皿法，每種試驗(yàn)菌進(jìn)行2次平行試驗(yàn)，分別計(jì)算各試驗(yàn)菌的回收比值，計(jì)算平均值。各菌株的回收比值＝（試驗(yàn)組的平均菌落數(shù)－供試品對照組的平均菌落數(shù)）／菌液對照組的平均菌落數(shù)。

試驗(yàn)組：分別取1∶10供試液10 mL，各加入試驗(yàn)菌液0.1 mL，混勻，使每1 mL供試液中含菌量不大于100 cfu，取供試液1 mL注入平皿。

供試品對照組：取1∶10供試液10 mL，以稀釋液代替菌液，同試驗(yàn)組操作，取1 mL注入平皿中。

菌液對照組：分別取稀釋液10 mL，各加入試驗(yàn)菌液0.1 mL，同試驗(yàn)組操作。每組平行制備2個(gè)平皿，用于需氧菌計(jì)數(shù)的平皿使用胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基，在30～35℃培養(yǎng)；用于霉菌和酵母菌計(jì)數(shù)的平皿用沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，在20～25℃培養(yǎng)[6]。結(jié)果顯示，丙戊酸鈉口服液對5種菌的回收率均不低于70%,可采用常規(guī)法進(jìn)行細(xì)菌、霉菌及酵母菌的計(jì)數(shù)[8]。

2.3.3 控制菌（大腸埃希菌）檢查方法適用性試驗(yàn)

按2015年版《中國藥典（四部）》通則1106[8]非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查方法，取供試品，制成1∶10供試液，取1 mL供試液，接種至適宜體積的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，混勻，30～35℃培養(yǎng)18～24 h。取上述培養(yǎng)物1 mL接種至100 mL麥康凱液體培養(yǎng)基中，42～44℃培養(yǎng)24～48 h，檢測是否有控制菌[9－10]。

2.3.4 微生物限度檢查

取2.1項(xiàng)下15份樣品，各10 mL，按常規(guī)法（平皿法）檢測丙戊酸鈉口服液的微生物限度。

2.4 結(jié)果

通過對15份樣品的檢測，結(jié)果表明，樣品在病區(qū)[（25±2）℃，相對濕度為（60±10）%]放置2個(gè)月，其性狀、pH、丙戊酸鈉含量、微生物限度均在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)范圍內(nèi)。15份樣品均為紅色澄清的黏稠液體，pH平均值為7.6，符合2015年版《中國藥典》的規(guī)定；15份樣品中丙戊酸鈉含量分別為39.86，39.93，40.01，39.86，39.92，40.00，39.84，39.90，39.95，39.79，39.80，39.90，39.70，39.76，39.80 mg／mL，均符合2015年版《中國藥典》的規(guī)定；需氧菌總數(shù)均小于102cfu／mL，霉菌和酵母菌總數(shù)均小于10 cfu／mL，均未檢出大腸埃希菌，結(jié)果均符合2015年版《中國藥典》的規(guī)定。

3 討論

丙戊酸鈉作為治療兒童癲癇的一線藥物，臨床應(yīng)用廣泛，但其治療指數(shù)低、安全范圍窄、需長期用藥。因此，確保藥物的穩(wěn)定性和有效性對治療效果和用藥安全極為重要。丙戊酸鈉口服液在開蓋服用期間，儲存條件發(fā)生變化，易接觸環(huán)境中的菌落和雜質(zhì)，影響藥品質(zhì)量，其中雖添加了防腐劑，但防腐劑也會受到溶液體系pH及黏度的影響而發(fā)生降解，頻繁開蓋可能會造成pH及黏度的改變[11]，影響防腐劑的效果。本研究中通過檢測丙戊酸鈉含量、藥品性狀和微生物限度來探討丙戊酸鈉的穩(wěn)定性。結(jié)果顯示，開蓋正常用藥的2個(gè)月內(nèi)，藥品穩(wěn)定性良好。

開封藥品的效期與保存環(huán)境、存放地區(qū)、季節(jié)和開封時(shí)藥品距離失效期的時(shí)間等因素密切相關(guān)[11－14]，在藥品開封后還須密切觀察其性狀，一旦發(fā)現(xiàn)藥品有異樣，應(yīng)立即停止給藥，以保障患兒的用藥安全。液體藥品的分裝和口服液開封后使用在臨床中難以避免，本研究結(jié)果為制訂統(tǒng)一的相關(guān)操作規(guī)范和管理措施，保障分裝藥品及口液體制劑的安全性和有效性提供了參考。