謝泰祥 張清華 周杰 陳娟 馬山虎 艾葉

摘要：[目的]比較野生建蘭根際和根內(nèi)細(xì)菌的種群結(jié)構(gòu)差異，為研究根共生細(xì)菌與建蘭的營(yíng)養(yǎng)關(guān)系奠定理論基礎(chǔ)。[方法]采用高通量測(cè)序技術(shù)鑒定福州鼓山野生建蘭根際和根內(nèi)共生細(xì)菌，分析其種類多樣性和種群結(jié)構(gòu)。[結(jié)果]建蘭根際、根內(nèi)擁有種類多樣的細(xì)菌，辛普森指數(shù)分別為0.99、0.95;香農(nóng)指數(shù)比較顯示建蘭根際細(xì)菌種類多樣性顯著高于根內(nèi)。建蘭根際擁有10門(mén)細(xì)菌，優(yōu)勢(shì)門(mén)為變形菌門(mén)（60。5%）、酸桿菌門(mén)（20.5%）、放線菌門(mén)（15.3%），根內(nèi)優(yōu)勢(shì)細(xì)菌門(mén)分別為變形菌門(mén)（75.3%）、酸桿菌門(mén)（7.3%）、放線菌門(mén)（14.6%）。根際與根內(nèi)豐度最高的10個(gè)細(xì)菌屬中，Solibacter、Acidipila僅在根際中，戴氏菌、新鞘氨醇菌和Granulicella僅存在于根內(nèi)。根際中酸桿菌門(mén)酸桿菌綱的豐度顯著高于根內(nèi)，11個(gè)差異顯著的目，僅腸桿菌目在根內(nèi)的豐度大于根際，根際有12個(gè)屬的豐度顯著高于根內(nèi)。[結(jié)論]建蘭根際與根內(nèi)細(xì)菌種類豐富度存在顯著性差異，其原因可能是不同生態(tài)位的細(xì)菌對(duì)建蘭的生物學(xué)功能存在較大差異。

關(guān)鍵詞：建蘭;根際細(xì)菌;根內(nèi)生細(xì)菌;種群結(jié)構(gòu);種類多樣性

中圖分類號(hào)：Q93;S682.31文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1008-0384（2020）05-0560-09

0 引言

（研究意義）建蘭（Cymbidium ens沁Bum）隸屬于蘭科蘭屬，為多年生草本植物。建蘭具有極高的觀賞與文化價(jià)值，被譽(yù)為國(guó)蘭七大類之一?，F(xiàn)有研究表明，蘭科植物共生菌根真菌在蘭花種子萌發(fā)、植株生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中起著重要的作用。蘭科植物的菌根屬于內(nèi)生菌根類，其最大的特征就是菌根真菌在蘭科植物原球莖細(xì)胞內(nèi)或成年植物根部皮層細(xì)胞內(nèi)形成特殊的菌絲團(tuán)結(jié)構(gòu)，為蘭科植物生長(zhǎng)提供必要的營(yíng)養(yǎng)元素。因此，在現(xiàn)代菌根類型中，蘭科植物的共生菌根真菌被獨(dú)立地劃分為：蘭科菌根。除此之外，蘭科植物還存在豐富的共生細(xì)菌，本試驗(yàn)研究建蘭根共生細(xì)菌的種類多樣性和種群結(jié)構(gòu)對(duì)于揭示共生細(xì)菌與建蘭的營(yíng)養(yǎng)關(guān)系，指導(dǎo)人工繁育技術(shù)滿足建蘭市場(chǎng)需求以及保護(hù)野生建蘭資源具有重要的意義。（前人研究進(jìn)展）蘭科共生細(xì)菌在蘭花的生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中也起到重要的作用，它們可以通過(guò)產(chǎn)生生長(zhǎng)素類物質(zhì)、促進(jìn)礦物質(zhì)吸收、光合作用等機(jī)制促進(jìn)蘭科植物的生長(zhǎng)。已有的研究發(fā)現(xiàn)，從春蘭Cvrubidium goeringii根部分離獲得多個(gè)根瘤菌屬（Rhizobium）的細(xì)菌種類，能直接產(chǎn)生IAA生長(zhǎng)激素刺激植物生長(zhǎng)。吳慶珊等利用不同培養(yǎng)基對(duì)金釵石斛Dendrobium nobile不同部位進(jìn)行分離培養(yǎng)，獲得芽孢桿菌屬（Bacillus）和短芽孢桿菌屬（Brevibacillus）為優(yōu)勢(shì)屬，Bacillussubtilissubsp.sub～lis和Brevibacillus invocatus為優(yōu)勢(shì)種，且根內(nèi)生細(xì)菌豐富度明顯高于其他部位。同時(shí)研究者在對(duì)石斛屬（Dendrobium）種子進(jìn)行體外共生萌發(fā)實(shí)驗(yàn)，藍(lán)細(xì)菌門(mén)（Cyanobacteria）、根際細(xì)菌（Rhizobacteria）在不添加菌根真菌的條件下能刺激種子體外共生發(fā)芽。同時(shí)從建蘭根內(nèi)分離出來(lái)的真菌有鐮刀菌屬Fusarium、肉座菌屬Hypocrea、小球腔菌屬Leptosphaeria、曲霉屬Aspergillus等真菌。（本研究切入點(diǎn)）目前從蘭科植物中發(fā)現(xiàn)的細(xì)菌已經(jīng)超過(guò)60個(gè)屬，分布最為廣泛的主要種類有革蘭氏陽(yáng)性菌的芽孢桿菌（Bacillus）和革蘭氏陰性菌的假單胞菌（Pseudomonas）;另外，鏈霉菌屬（streptomyces）、腸桿菌（Erwinia）、黃桿菌屬（Flavobacterium）也是常見(jiàn)的蘭科植物共生細(xì)菌。但是建蘭根際以及根內(nèi)共生細(xì)菌的群落結(jié)構(gòu)尚未見(jiàn)相關(guān)研究報(bào)道。（擬解決的關(guān)鍵問(wèn)題）本研究以福州市鼓嶺山脈的3叢野生建蘭為材料，基于高通量測(cè)序技術(shù)分析了建蘭根際土壤（Rhizosphere，Rhiz）及根內(nèi)（Endosphere，Endo）細(xì)菌的種類多樣性、種群結(jié)構(gòu)，同時(shí)比較了3叢野生建蘭根共生細(xì)菌種類的異同，篩選出共有細(xì)菌種類。研究結(jié)果將豐富人們對(duì)建蘭根際與根內(nèi)細(xì)菌的認(rèn)知，為建蘭人工快速繁育技術(shù)的開(kāi)發(fā)提供相關(guān)理論基礎(chǔ)。

1材料與方法

1.1 樣品采集

樣品于2018年5月在福建省福州市鼓嶺山脈采集。隨機(jī)選擇不同位置的3叢野生建蘭居群，輕輕地將土壤表面植物殘?bào)w，以及建蘭根周?chē)耐寥酪瞥瑑H保留根周?chē)?.5cm厚度的土壤。將除去殘?bào)w和根圍土壤的建蘭根剪下，用軟毛刷刷掉附著在根表面土壤顆粒，放人50ml無(wú)菌離心管，標(biāo)記為根際土壤（Rhizosphere，Rhiz），放人液氮罐中保存。

1.2 DNA提取野生建蘭根際與根內(nèi)共生細(xì)菌種群結(jié)構(gòu)差異分析

樣品的處理參照Edwards等人的樣品處理方法將刷掉根表面土壤顆粒的根樣品放人無(wú)菌三角瓶中，加入100ml無(wú)菌PBS緩沖液，大力將根表面的殘余土壤洗滌下來(lái);洗滌過(guò)后的根樣品繼續(xù)加入100ml無(wú)菌PBS緩沖液，在50～60Hz（輸出頻率42kHz，功率90w，Branson Unltrasonics）上超聲波處理30s，隨后大力搖晃并重復(fù)超聲波操作處理30s;重新加入100ml無(wú)菌PBS緩沖液，重復(fù)上述超聲波洗滌工作，以確保從根表面去除所有的微生物，清洗后的根標(biāo)記為根內(nèi)細(xì)菌（Endosphere，Endo）。使用離心柱型土壤DNA提取試劑盒（MoBio公司）提取建蘭根際土壤總DNA;根部總DNA的提取使用天根生活科技有限公司的DP305型DNA提取試劑盒。提取的DNA經(jīng)凝膠電泳檢測(cè)，合格DNA存入-80℃?zhèn)溆谩?/p>

1.3 細(xì)菌16S區(qū)域擴(kuò)增及測(cè)序

將合格的DAN樣品稀釋到1ng·uL^-1，以稀釋的DNA為模板，使用引物515F（5.-GTGCC AGCMGCCGCG GTAA-3.）和806R（5-GGACT ACHVGGGTWT CTAAT-3′）擴(kuò)增細(xì)菌16S rDNA的V4區(qū)域，PCR條件為98℃30s預(yù)變性，接下來(lái)98℃變性10s，65℃退火30s，72℃延伸30s，72℃延伸5min.將PCR產(chǎn)物純化以后送至北京諾禾致源科技股份有限公司，使用Ion Plus Fragment Library Kit 48ixns試劑盒（Thermofisher）構(gòu)建測(cè)序文庫(kù)，并根據(jù)所擴(kuò)增區(qū)域的特點(diǎn)，基于IonS5TMXL測(cè)序平臺(tái)，利用單端測(cè)序（Single-End）的方法，構(gòu)建小片段文庫(kù)進(jìn)行單端測(cè)序。

1.4 數(shù)據(jù)分析

1.4.1OTU聚類和物種注釋 使用Uparse軟件對(duì)所測(cè)序樣品的全部Clean Reads進(jìn)行聚類分析，以一致性達(dá)到97%的序列聚為相同的可操作分類單位（Operational/axonomic Units，OTUs）。篩選OTUs中出現(xiàn)頻數(shù)最高的序列作為OTUs的代表序列。用Mothur方法與SILVA（http：//www.arb-silva.de/）的SSUrRNA數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)OTUs代表序列進(jìn)行物種注釋（設(shè)定閾值為0.8～1.0），獲得序列指代的細(xì)菌分類地位，并在界、門(mén)、綱、目、科、屬、種水平統(tǒng)計(jì)樣品細(xì)菌的群落組成。

1.4.2種類多樣性分析使用Qiime 1.9.1對(duì)均一化處理后的數(shù)據(jù)進(jìn)行計(jì)算，獲得各個(gè)樣品的種類數(shù)量（Observed-species）、香農(nóng)指數(shù)（Shannon index）、Chaol指數(shù)、辛普森指數(shù)（Simpson index）;使用R軟件（Version2.15.3）繪制稀釋曲線，物種累積曲線。

1.4.3種群結(jié)構(gòu)比較分析 對(duì)3個(gè)不同居群建蘭根際、根內(nèi)細(xì)菌種群結(jié)構(gòu)進(jìn)行比較，篩選3個(gè)不同地點(diǎn)樣品的共有根際、根內(nèi)細(xì)菌OTUs.根際（Rhiz）和根內(nèi)（Endo）差異顯著的物種分析利用R軟件做組間T-test檢驗(yàn)并作圖。

2 結(jié)果與分析

2.1測(cè)序結(jié)果評(píng)價(jià)

通過(guò)對(duì)6個(gè)樣品16S rDNA V4區(qū)域進(jìn)行高通量測(cè)序共獲得430434條Clean reads，根際土壤樣品的平 均Clean reads數(shù)量為74848，根內(nèi)樣品的平均Cleanreads為68599（表1），所有樣品中最低的Cleanreads為57117.通過(guò)繪制建蘭3個(gè)樣品的根際及根內(nèi)細(xì)菌高通量測(cè)序結(jié)果的稀釋曲線（RarefactionCurve）檢測(cè)樣品的測(cè)序深度是否達(dá)到要求。稀釋曲線顯示，測(cè)序數(shù)據(jù)量達(dá)到50000條時(shí)，各樣品中呈現(xiàn)出的物種數(shù)量趨于平坦（圖1）;各樣品測(cè)序深度指數(shù)good'scoverage均等于0.998（表1）;表明該測(cè)序已經(jīng)獲得足量的測(cè)序數(shù)據(jù)，能夠有效覆蓋樣品中物種數(shù)量，測(cè)序數(shù)據(jù)量合理。

2.2 建蘭根際與根內(nèi)細(xì)菌種類多樣性分析

基于≥97%的相似度水平，通過(guò)聚類分析共獲得4412個(gè)有效OTU，根際土壤獲得（817±42）個(gè)OTU，多于根內(nèi)共的654-4-78個(gè)OTU（表1），二者不存在顯著性差異，但是香農(nóng)指數(shù)顯示根際土壤細(xì)菌的種類數(shù)量顯著高于根內(nèi)細(xì)菌種類（P=0.05）。建蘭的6個(gè)測(cè)序樣品中，End04的辛普森指數(shù)（Simpson）最低為0.90，另外2個(gè)根內(nèi)樣品辛普森指數(shù)分別為0.96與0.98，根際土壤的則為0.99，證明建蘭根際與根內(nèi)細(xì)菌種類多樣性高（辛普森指數(shù)的范圍是0～1，越趨近于l表明種類多樣性越高）。Chaol用來(lái)判斷群落的物種豐富度，數(shù)值越大，表示物種種類越多。3個(gè)根際樣品的平均細(xì)菌Chaol指數(shù)865.43大于根內(nèi)細(xì)菌的Cha01指數(shù)700.99，T-test檢驗(yàn)結(jié)果顯示根際與根內(nèi)細(xì)菌種群豐富度存在顯著差異（P=0.05）。

2.3 建蘭根際與根內(nèi)細(xì)菌種群結(jié)構(gòu)

對(duì)3叢野生建蘭根際細(xì)菌高通量測(cè)序獲得的224635條clear reads進(jìn)行種類注釋，發(fā)現(xiàn)建蘭根際細(xì)菌主要分布在變形菌門(mén)（Proteobacteria）、酸桿菌門(mén)（Acidobacteria）、放線菌門(mén)（Actinobacteria）、疣微菌門(mén)（Verrucomicrobia）、裝甲菌門(mén)（Armatimonadetes）、擬桿菌門(mén)（Bacteroidetes）、浮霉菌門(mén)（Planctomycetes）、芽單胞菌門(mén)（Gemmatimonadetes）、厚壁菌門(mén)（Firmicutes）、綠彎菌門(mén)（Chlorotlexi）10個(gè)門(mén)，根際細(xì)菌的10個(gè)門(mén)含有17綱（+8個(gè)未鑒定綱），39目（+5個(gè)未鑒定目）和113個(gè)確定的屬;根內(nèi)細(xì)菌有13綱（+7個(gè)未鑒定綱），37目（+2個(gè)未鑒定目）和107個(gè)確定的屬。根際細(xì)菌中變形菌門(mén)占種群數(shù)量的60.5%，為優(yōu)勢(shì)門(mén)類，酸桿菌門(mén)占20.5%，放線菌門(mén)占15.3%，其余7個(gè)門(mén)類僅占3.7%。根內(nèi)細(xì)菌同樣分布在上述10個(gè)門(mén)，其中變形菌門(mén)（Proteobacteria）、酸桿菌門(mén)（Acidobacteria）、放線菌門(mén)（Actinobacteria）分別占種群數(shù)量的75.3%、7.3%和14.6%。優(yōu)勢(shì)種群的綱有酸桿菌綱（Acidobacteriia）、嗜熱油菌綱（Thermoleophilia）、α-變形菌綱（Alpha-proteobacteria）、γ-變形菌綱（Gammaproteobacteria）和一個(gè)放線菌門(mén)（Actinobacteria）未確定綱（圖2）。

根際與根內(nèi)細(xì)菌群落中豐富度最高的lO個(gè)目是一致的，有一個(gè)γ-變形菌綱未定目（unidentifiedGammaproteobacteria），根瘤菌目（Rhizobiales），酸桿菌目（Acidobacteriales），土壤紅桿菌目（Solirubro-bacterales），棒桿菌目（Corynebacteriales），α-變形菌綱未定目（unidentified Alphaproteobacteria），柄桿菌目（Caulobacterales），弗蘭克氏菌目（Frankiales），Solibacterales，Micropepsales（圖3）。根據(jù)與根內(nèi)細(xì)菌豐富度最高的屬存在明顯差別。根際細(xì)菌群落豐富度最高的10個(gè)屬分別是一個(gè)伯克氏科菌未定屬（unidentified Burkholderiaceae）、熱酸菌屬（Acidothermus）、醋酸桿菌屬（Acidibacter）、Roseiarcus、分支桿菌屬（Mycobacterium）、SoBbacter、慢生根瘤菌屬（Bradyrhizobium）、Conexibacter、Acidipila、和α-變形菌未鑒定屬（unidentified Alpha-proteobacteria）;根內(nèi)細(xì)菌豐富度最高的10個(gè)屬分別是一個(gè)伯克氏科菌未定屬（unidentified Burkholderiaceae）、Conexibacter、分支桿菌屬（Mycobacterium）、熱酸菌屬（Acidothermus）、Roseiarcus、戴氏菌屬（Dyella）、醋酸桿菌屬（Acidibacter）、新鞘氨醇菌屬（Novosphingobium）、GranuBcella、慢生根瘤菌屬（Bradyrhizobium）（圖4）。

2.4 建蘭根際與根內(nèi)細(xì)菌差異分析

通過(guò)T-test檢驗(yàn)，在門(mén)、綱、目、屬分類單元下找出根際與根內(nèi)組間的差異物種。在P=0.05差異水平下，建蘭根際與根內(nèi)僅有酸桿菌門(mén)（Acidobacteria）數(shù)量存在顯著差異;在綱分類單元下有酸桿菌綱（Acidobacteriia）差異顯著;根際與根內(nèi)細(xì)菌種群存在顯著差異的目有：根瘤菌目（Rhizobiales）、酸桿菌目（Acidobacteriales）、柄桿菌目（Caulobacterales）、弗蘭克氏菌目（Frankiales）、粘球菌目（Myxococcales）、腸桿菌目（Enterobacteriales）、咸水球形菌目（Salinisphaerales）、Catenulisporales和噬纖維菌目（Cytophagales），還包括一個(gè)酸桿菌門(mén)未定目（unidentified Acidobacteriia）和一個(gè)疣微桿菌門(mén)未定目（unidentified Verrucomicrobiae）。有12個(gè)屬：熱酸菌屬（Acidothermus）、醋酸桿菌屬（Acidibacter）、SoBbacter、慢生根瘤菌屬（Bradyrhizobium）、酸桿菌門(mén)未鑒定屬（unidentifiedAcidobacteriia）、不粘柄菌屬（Asticcacaulis）、柄細(xì)菌屬（Caulobacter）、Pedosphaera、Pajaroellobacter、嗜鹽囊菌屬（Haliangium）、Actinospica、游魚(yú)孢菌屬（Jporichthya）在建蘭根際與根內(nèi)中的種群數(shù)量存在顯著差異（圖5）。

分別分析3叢不同居群建蘭的根際、根內(nèi)細(xì)菌的共有種類，共篩選到根際共有OTUs 588個(gè)，根內(nèi)共有OTUs 379個(gè)（圖6），其中根內(nèi)共有的379個(gè)細(xì)菌OTUs中的339個(gè)同時(shí)分布在根際土壤中，僅有40個(gè)OTUs是根內(nèi)特有的。分別對(duì)共有OTUs進(jìn)行鑒定，根際的588個(gè)OTUs涉及到16綱39目93屬，根內(nèi)的379個(gè)共有OTUs鑒定出13綱，36目，64屬;根際與根內(nèi)共有的OTUs包含8門(mén)，13綱，32目60屬;根際與根內(nèi)共有的40個(gè)OTUs分布在6門(mén)，7綱，14目，能確定的屬有10個(gè)，分別是雙歧桿菌屬（Bifidobacterium）、Protochlamydia、類芽孢桿菌屬（Paenibacillus）、鏈球菌屬（Streptococcus）、Bauldia、紅游動(dòng)菌屬（Rhodoplanes）、新鞘氨醇桿菌（Novosphingobium）、嗜酸菌屬（Acidiphilium）、蛭弧菌屬（Bdellovibrio）、沙雷氏菌屬（Serratia）。

3 討論與結(jié)論

應(yīng)用16S rDNA高通量測(cè)序鑒定3叢野生建蘭根際土壤（Rhiz）和根內(nèi)（Endo）共生細(xì)菌的種類，結(jié)果表明建蘭根際土壤和根內(nèi)都存在豐富的細(xì)菌，種類多樣性高，根際土壤細(xì)菌種類多樣性顯著高于根內(nèi)細(xì)菌（P=0.05）。對(duì)其種群結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)根際和根內(nèi)細(xì)菌種群結(jié)構(gòu)中變形菌門(mén)細(xì)菌數(shù)量占絕對(duì)優(yōu)勢(shì)。分析3叢不同居群建蘭的根際與根內(nèi)細(xì)菌的共有OTUs，發(fā)現(xiàn)根內(nèi)絕大多數(shù)OTUs同樣存在于根際土壤中，僅有10個(gè)屬的細(xì)菌是根內(nèi)特有的。但是，差異性分析發(fā)現(xiàn)，根際與根內(nèi)細(xì)菌種類豐富度存在顯著性差異，這可能與土壤環(huán)境較植物組織內(nèi)部系統(tǒng)更為復(fù)雜有關(guān)。根內(nèi)特有細(xì)菌主要與根內(nèi)特定真菌結(jié)合形成真菌內(nèi)共生細(xì)菌（EndofungalBacteriun，EFB）。EFB主要為真菌宿主提供生物能力、糖化合物和維生素等必需因子，促進(jìn)真菌宿主降解有毒性氧化物質(zhì)的功能，從而提高植株菌根的形成量。因建蘭種子萌發(fā)需要依靠特定的菌根真菌的侵染為其提供所需的營(yíng)養(yǎng)，推測(cè)真菌在完成侵染后，需要特定的細(xì)菌進(jìn)入根內(nèi)，為真菌宿主的代謝、繁殖和抗逆性提供輔助作用，從而出現(xiàn)不同生態(tài)位的細(xì)菌的生物學(xué)功能出現(xiàn)較大差異現(xiàn)象。因此，研究建蘭根際和根內(nèi)細(xì)菌的生物學(xué)功能對(duì)揭示根部共生細(xì)菌對(duì)建蘭生長(zhǎng)的影響具有重要意義。

蘭科植物依其所屬生態(tài)類型可分為地生蘭、附生蘭和腐生蘭3類，建蘭屬于地生蘭，現(xiàn)有研究已經(jīng)證實(shí)菌根真菌在促進(jìn)建蘭種子萌發(fā)和植株生長(zhǎng)方面起著重要的作用，而蘭科植物根際細(xì)菌，尤其是根內(nèi)生細(xì)菌的作用也逐漸被挖掘，比如石斛屬（Dendrobium）。但是關(guān)于建蘭根共生內(nèi)細(xì)菌及其與建蘭之間營(yíng)養(yǎng)關(guān)系的研究尚未有報(bào)道。本文發(fā)現(xiàn)建蘭根際、根內(nèi)細(xì)菌中種群數(shù)量最高的前10個(gè)屬有中分別有8、9個(gè)確定的屬。其中，短根瘤菌屬（Bradyrhizobium）在根際和根內(nèi)都有檢測(cè)到。該屬細(xì)菌地域分布范圍很廣，能夠與多種豆科植物形成共生關(guān)系，促進(jìn)宿主N素的吸收。短根瘤菌屬在建蘭根際土壤和根內(nèi)部豐富度較高，推斷該細(xì)菌在與建蘭的生長(zhǎng)發(fā)育存在密切的聯(lián)系，短根瘤菌是否與建蘭形成共生關(guān)系，需要獲得純培養(yǎng)菌株并進(jìn)一步接種建蘭加以驗(yàn)證。很少有證據(jù)表明柄細(xì)菌屬（Caulobacter）細(xì)菌對(duì)植物有益，最新的研究發(fā)現(xiàn)Caulobacter sp RHGl菌株可以定殖擬南芥的根和芽，促進(jìn)根中的側(cè)根形成，并增加枝條中的葉數(shù)和葉大小，該屬細(xì)菌是否促進(jìn)建蘭生長(zhǎng)根系發(fā)育需要進(jìn)一步研究。明確此類細(xì)菌與建蘭的營(yíng)養(yǎng)關(guān)系能夠?yàn)榻ㄌm人工繁育提供有效的促生因子，但是，建蘭根際和根內(nèi)存在多個(gè)目前不能培養(yǎng)的細(xì)菌，如Solibacter屬細(xì)菌，對(duì)于此類細(xì)菌功能的研究可利用宏基因組技術(shù)進(jìn)行研究。

比較建蘭根際土壤與根內(nèi)細(xì)菌種類的異同，相對(duì)豐度最高的10個(gè)屬，根際與根內(nèi)細(xì)菌存在多個(gè)相同的屬，但是Solibacter和Acidipila屬僅在根際中檢測(cè)到，而戴氏菌（Dyella）、新鞘氨醇菌（Novosphingobium）和GranuBcella屬僅存在建蘭根內(nèi)。在不同分類單元上，均存在豐度差異顯著的細(xì)菌類群;而且除了根內(nèi)特有的細(xì)菌種類，其余顯著性差異的細(xì)菌類群都是根際細(xì)菌含量高于根內(nèi)同類細(xì)菌，OTUs數(shù)量同樣顯示根際細(xì)菌的細(xì)菌數(shù)量大于根內(nèi)細(xì)菌，這與土壤環(huán)境更為復(fù)雜，微生物類群更為豐富的普遍認(rèn)知相一致。

綜述所述，建蘭根際土壤和根內(nèi)存在種類豐富的細(xì)菌，具有極高的生物多樣性，而且根際與根內(nèi)細(xì)菌種群結(jié)構(gòu)存在差異，部分種類差異顯著。本研究為從建蘭根際和根內(nèi)細(xì)菌中挖掘促生因子奠定了理論基礎(chǔ)，具有一定的指導(dǎo)意義。