馮變瑩，穆迪，黃平，周浩，羅菲，姚祖德，滿秋紅

同濟(jì)大學(xué)附屬上海市第四人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，上海200081

乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）具有高感染率和高攜帶率，而HBV 所致的乙型肝炎已經(jīng)成為全球公共衛(wèi)生難題[1]。流行病學(xué)調(diào)查資料顯示，我國(guó)作為乙肝大國(guó)，人群感染率約為60%～70%，病毒攜帶者將近1.3 億，且每年因乙型肝炎相關(guān)疾病死亡的人數(shù)接近30 萬(wàn)，而我國(guó)目前人口老齡化進(jìn)程逐步加快，老年肝炎患者的絕對(duì)數(shù)也呈逐步增多的趨勢(shì)，老年肝炎患者中81.48%為病毒性肝炎，其中乙型肝炎患者約占58.36%[2-4]。HBV 是引起重型肝炎和肝癌的常見誘因[5]，病毒的持續(xù)復(fù)制又是其致病的根本原因。老年乙型肝炎患者由于自身免疫功能低下，基礎(chǔ)疾病較多，轉(zhuǎn)變成重癥肝炎和肝癌的危險(xiǎn)性會(huì)更大[6-7]。因此，對(duì)老年乙型肝炎進(jìn)行及時(shí)的診斷、治療和預(yù)防工作勢(shì)在必行。

乙肝五項(xiàng)血清標(biāo)志物（HBV-M）的檢測(cè)技術(shù)已經(jīng)成為診斷乙肝的經(jīng)典方法，但其對(duì)于HBV 的復(fù)制、轉(zhuǎn)歸及預(yù)后評(píng)估卻有一定的局限性。近年來，由于熒光定量PCR 技術(shù)的迅猛發(fā)展，HBV-DNA 檢測(cè)能準(zhǔn)確反映HBV 在體內(nèi)病毒復(fù)制量的變化，是反映HBV 病毒復(fù)制最直接和最可靠的指標(biāo)，在臨床診療及預(yù)后評(píng)估中發(fā)揮著不可忽視的作用[8]。另有研究表明[9]，Pre-S1 抗原檢測(cè)能夠更早地反映乙型肝炎病毒的感染及復(fù)制情況，是評(píng)估HBV 感染、復(fù)制及治療和預(yù)后的新型標(biāo)志物。本文回顧性的分析不同年齡段老年乙型肝炎患者的Pre-S1 抗原定量檢測(cè)、HBV-DNA 檢測(cè)及乙肝五項(xiàng)血清標(biāo)志物檢測(cè)結(jié)果之間的相關(guān)性，旨在尋求乙型肝炎臨床診治的最佳聯(lián)合檢測(cè)方案，為老年乙型肝炎的早診早治提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析2017年8月—2019年12月于上海市第四人民醫(yī)院門診及住院治療的210 例老年乙型肝炎患者的臨床資料。其中男性112 例，女性98例，年齡為60～95 歲，平均年齡為（74.3±8.9）歲。

1.2 分組 將乙肝五項(xiàng)血清標(biāo)志物HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb 和HBcAb 分別采用①、②、③、④和⑤表示。210 例老年乙型肝炎患者分為5 組：①＋③＋⑤陽(yáng)性組（n=50）；①＋④＋⑤陽(yáng)性組（=116）116例；①＋③陽(yáng)性組（=15）；①＋④陽(yáng)性組（=10）；①＋⑤陽(yáng)性組（=19）。上述5 組老年患者均依照3 個(gè)年齡段（60～69 歲、70～79 歲、≥80 歲）進(jìn)行不同年齡段分層研究。

1.3 評(píng)估指標(biāo)（1）HBV-DNA 定量檢測(cè)與評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)：HBV-DNA＜1×102IU/mL 時(shí)為陰性；HBV-DNA≥1×102IU/mL 時(shí)為陽(yáng)性，濃度越高表明患者體內(nèi)HBV病毒復(fù)制越活躍，傳染性越強(qiáng)。（2）PreS1 抗原定量檢測(cè)與評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)：PreS1 抗原定量檢測(cè)值＜1.0S/CO時(shí)，視為HBV PreS1 抗原檢測(cè)陰性；PreS1 抗原定量檢測(cè)值≥1.0 S/CO 時(shí)，視為HBV PreS1 抗原檢測(cè)陽(yáng)性。

1.4 檢測(cè)方法

1.4.1 樣本的收集和處理 患者入院后次日清晨抽取空腹外周靜脈血5 mL 于2 個(gè)促凝管中，4 000 r/min 離心5 min 后，吸取上層血清分別用于乙肝五項(xiàng)血清標(biāo)志物檢測(cè)、PreS1 抗原定量檢測(cè)和HBV-DNA 定量檢測(cè)。

1.4.2 檢測(cè)方法（1）乙肝五項(xiàng)檢測(cè)：使用HISCL500全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀，采用化學(xué)發(fā)光法，試劑由廈門萬(wàn)泰凱瑞生物技術(shù)有限公司提供。（2）PreS1抗原定量檢測(cè)：使用Caris200 全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀，采用化學(xué)發(fā)光法，試劑由廈門萬(wàn)泰凱瑞生物技術(shù)有限公司提供。（3）HBV-DNA 定量檢測(cè)：使用ABI7500 熒光定量PCR 儀，采用熒光定量PCR 法，試劑由上海之江生物科技股份有限公司提供。由具有資質(zhì)專業(yè)人員嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)化操作規(guī)程文件進(jìn)行操作，完成乙肝五項(xiàng)、PreS1 抗原和HBV-DNA 定量檢測(cè)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 數(shù)據(jù)采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS25.0 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s），采用 檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以例數(shù)和百分率表示，采用檢驗(yàn)；采用線性相關(guān)分析，配對(duì)卡方檢驗(yàn)進(jìn)行相關(guān)性分析，相關(guān)系數(shù)用表示。＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 乙肝五項(xiàng)血清標(biāo)志物（HBV-M）不同組合模式下老年乙型肝炎患者Pre-S1 抗原定量分析情況 各組老年乙型肝炎患者PreS1 抗原定量檢測(cè)結(jié)果均與年齡呈負(fù)相關(guān)（R2=0.95、0.93、0.97、0.95、0.98）；各組相同年齡階層老年乙型肝炎患者Pre-S1 抗原定量比較，①＋③＋⑤陽(yáng)性組Pre-S1 抗原定量結(jié)果要高于①＋④＋⑤陽(yáng)性組、①＋④陽(yáng)性組和①＋⑤陽(yáng)性組（t=6.32、7.88、3.23、5.23、6.32、4.08、6.45、5.46、3.59，＜0.05）。①＋③＋⑤陽(yáng)性組與①＋③陽(yáng)性組Pre-S1 抗原定量結(jié)果相比較，結(jié)果差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=1.164、1.135、1.432，＞0.05）。見表1。

2.2 HBV-M 不同組合模式下老年乙型肝炎患者HBVDNA 陽(yáng)性率和Pre-S1 抗原陽(yáng)性率表達(dá)情況 各組相同年齡階層老年乙型肝炎患者HBV-DNA 的陽(yáng)性率（=244.09、94.23、180.2，＜0.05）和Pre-S1 的陽(yáng)性率（=250.475、128.9、207.4，＜0.05）比較，結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；各組不同年齡階層老年乙型肝炎患者HBV-DNA 和Pre-S1 的陽(yáng)性率比較，①＋④陽(yáng)性組HBV-DNA 和Pre-S1 的陽(yáng)性率均無顯著性差異（=7.22、1.67，＞0.05），①＋③＋⑤陽(yáng)性組、①＋④＋⑤陽(yáng)性組、①＋③陽(yáng)性組、①＋⑤陽(yáng)性組中HBVDNA 的陽(yáng)性率（=50.08、232、142.86、25.44，＜0.05）和Pre-S1 的陽(yáng)性率（=100、175.64、142.86、14.6，＜0.05），結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表2。

2.3 HBeAg與Pre-S1 在老年乙型肝炎患者中相關(guān)性分析 相同年齡階層中老年乙型肝炎患者HBeAg 陽(yáng)性組中Pre-S1 的陽(yáng)性率顯著高于HBeAg陰性組（=23.05、11.13、12.12，＜0.05），相關(guān)系數(shù)r 依次為0.40、0.31、0.14，表明二者之間具有一定相關(guān)性。見表3。

2.4 HBV-DNA 檢測(cè)與Pre-S1 檢測(cè)在老年乙型肝炎患者中相關(guān)性分析 相同年齡階層中老年乙型肝炎患者HBV-DNA 核酸檢測(cè)陽(yáng)性組中Pre-S1 的陽(yáng)性率顯著高于HBV-DNA 陰性組（=9.38、11.13、23.05＜0.05），相關(guān)系數(shù)r 依次為0.32、0.14、0.15，表明二者之間具有一定相關(guān)性。見表4。

表1 HBV-M 不同組合模式下老年乙型肝炎患者Pre-S1 抗原定量分析

表2 HBV-M 不同組合模式下老年乙型肝炎患者HBV-DNA及Pre-S1 抗原陽(yáng)性率表達(dá)情況

3 討論

乙型肝炎是由HBV 引起的一種常見的傳染性疾病，呈全球分布，慢化程度高，并且該類病毒會(huì)導(dǎo)致人群患有乙型肝炎、肝硬化以及肝細(xì)胞癌等一系列肝臟系統(tǒng)的疾病，嚴(yán)重威脅和干擾生命健康和生活質(zhì)量[10-11]。臨床常規(guī)乙型肝炎五項(xiàng)血清標(biāo)志物檢測(cè)，只能單純表明患者已被乙型肝炎病毒所感染，并不能反映出乙型肝炎病毒在患者體內(nèi)的實(shí)際復(fù)制情況[12]。HBV-DNA 為HBV 脫氧核糖核酸，也是病毒核心的部分，為判斷病毒復(fù)制的金標(biāo)準(zhǔn)。HBV-DNA 包含了4 個(gè)開放讀碼區(qū)（S 區(qū)、X 區(qū)、C 區(qū)及P 區(qū)），S 區(qū)編碼HBsAg、PreS1 蛋白及PreS2 蛋白，三者共同構(gòu)成HBV的外膜蛋白。PreS1 蛋白可介導(dǎo)病毒黏附肝細(xì)胞，與病毒組裝、分泌及傳染性關(guān)系密切[13]。HBV-DNA和PreS1 抗原聯(lián)合檢測(cè)已經(jīng)成為評(píng)估HBV 感染、復(fù)制及臨床對(duì)乙型肝炎患者診斷、治療和預(yù)后的一項(xiàng)重要指標(biāo)[14-16]。本文回顧性的分析了210 例老年乙型肝炎患者3 個(gè)不同年齡階段乙肝五項(xiàng)血清標(biāo)志物、PreS1抗原定量檢測(cè)及HBV-DNA 的檢測(cè)情況及它們之間的相關(guān)性，旨在尋求最佳的聯(lián)合檢測(cè)方案為能臨床診療提供及時(shí)可靠的檢測(cè)數(shù)據(jù)。

本文通過對(duì)210 例不同年齡階段的老年肝炎患者PreS1 抗原定量檢測(cè)結(jié)果分析發(fā)現(xiàn)，隨著年齡的增長(zhǎng)Pre-S1 抗原定量結(jié)果在減少。乙型肝炎老年患者乙肝五項(xiàng)不同組合模式中，HBeAg 陽(yáng)性Pre-S1 抗原定量檢測(cè)結(jié)果明顯高于陰性組，這表明HBV 病毒復(fù)制活躍程度與年齡、HBeAg 抗原表達(dá)情況以及乙肝五項(xiàng)血清標(biāo)志物不同組合模式有關(guān)。HBeAg 抗原的表達(dá)是評(píng)估HBV病毒在宿主體內(nèi)復(fù)制和傳染程度的主要指標(biāo)，結(jié)果陽(yáng)性的患者說明乙肝病毒的復(fù)制程度及傳染性均較高，而HBeAb 抗體表達(dá)陽(yáng)性時(shí)，可表明病毒復(fù)制及傳染性均降低[17]。本文中HBeAg 陽(yáng)性時(shí)Pre-S1 抗原的陽(yáng)性表達(dá)率高于HBeAg 陰性組，說明HBeAg 轉(zhuǎn)陰時(shí)或HBeAb 產(chǎn)生時(shí)，Pre-S1 抗原的表達(dá)水平也會(huì)下降，由此可見Pre-S1 抗原定量檢測(cè)結(jié)果與HBeAg表達(dá)情況具有一定的相關(guān)性，在一定程度上Pre-S1 能夠反映病毒復(fù)制情況。也有研究結(jié)果表明[18-19]，HBeAg與Pre-S1 抗原同時(shí)呈陽(yáng)性表達(dá)時(shí)，HBV-DNA 核酸檢測(cè)呈高拷貝復(fù)制。本文的結(jié)果分析發(fā)現(xiàn)，HBV-DNA定量檢測(cè)陽(yáng)性時(shí)Pre-S1 抗原的陽(yáng)性率高于HBV-DNA陰性組，說明Pre-S1 與HBV-DNA 具有一定的相關(guān)性與文獻(xiàn)相符。Pre-S1 抗原定量檢測(cè)能夠彌補(bǔ)因其他原因如病毒檢查的準(zhǔn)確率低而造成的假陰性結(jié)果，并且PreS1 抗原定量檢測(cè)往往出現(xiàn)在病毒感染的最早期，可以用于疾病的早期診斷和預(yù)后評(píng)估，極大地降低乙型肝炎的傳染性[20]。因此，乙肝五項(xiàng)血清標(biāo)志物檢測(cè)能夠反映機(jī)體感染HBV 后的免疫狀態(tài)，但無法明確其感染的確切狀態(tài)，HBV-DNA 定量檢測(cè)，能夠精準(zhǔn)地反映病毒復(fù)制情況，但因其需要特殊儀器及具備PCR 資質(zhì)的實(shí)驗(yàn)室方可開展，基層醫(yī)院難以普及。Pre-S1 抗原定量檢測(cè)既可反映HBV 復(fù)制的情況，又可彌補(bǔ)由于病毒變異等原因造成的HBeAg 無法被檢出而影響診斷的情況，但當(dāng)其基因序列變異時(shí)，仍可造成假陰性的結(jié)果[1,18]。

綜上所述，乙肝五項(xiàng)血清標(biāo)志物、HBV-DNA 定量檢測(cè)以及Pre-S1 抗原定量聯(lián)合檢測(cè)在不同年齡階段的老年乙型肝炎患者具有一定的相關(guān)性，因此，三者聯(lián)合檢測(cè)，能夠更早、更精準(zhǔn)的反映機(jī)體HBV 病毒的感染水平，復(fù)制程度及傳染性，對(duì)老年乙型肝炎患者的臨床診療和預(yù)后評(píng)估具有一定的指導(dǎo)意義。

表3 HBeAg 與Pre-S1 在老年乙型肝炎患者中相關(guān)性分析

表4 HBV-DNA 檢測(cè)與Pre-S1 檢測(cè)在老年乙型肝炎患者中相關(guān)性分析