傅尊金

現(xiàn)如今，新冠病毒正在全球肆虐，完全看不出病毒“大潮”將要減退和消散的痕跡。我國由于采取積極的防疫政策，應(yīng)檢盡檢，及時(shí)發(fā)現(xiàn)，及時(shí)隔離治療。我國的疫情總體做到了“可防可控”。由于我國疆土遼闊，人口分布不均，不是所有地區(qū)都有完善的、符合規(guī)范要求的檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室，具有必要的檢驗(yàn)設(shè)備。本篇文章歸納總結(jié)了病毒檢測(cè)PCR 實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)要點(diǎn)和關(guān)鍵技術(shù)要求，供相關(guān)專業(yè)人事參考探討。

在當(dāng)前疫情肆虐期間，各級(jí)醫(yī)院、疾控、第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)如何在有限的硬件條件下，科學(xué)規(guī)范地做好生物安全防護(hù)，積極有效開展核酸檢測(cè)工作，科學(xué)合理地建設(shè)新冠病毒PCR 檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室就尤為重要。

實(shí)驗(yàn)室操作流線設(shè)計(jì)：

根據(jù)國家衛(wèi)健委的相關(guān)要求，檢測(cè)人員流線、檢測(cè)樣品流線、檢測(cè)試劑流線、廢棄物流線必須滿足以下要求：

（1）檢測(cè)人員必須按照生物安全三級(jí)防護(hù)要求穿戴防護(hù)用品進(jìn)入樣本制備間及擴(kuò)增分析室。不同操作區(qū)域的工作服不能混穿，只能在本實(shí)驗(yàn)室內(nèi)使用，以免造成生物安全風(fēng)險(xiǎn)和核酸片段污染風(fēng)險(xiǎn)的產(chǎn)生，進(jìn)而造成核酸檢測(cè)結(jié)果可能出現(xiàn)假陽性。

（2）待檢樣品經(jīng)二級(jí)包裝消毒滅菌后經(jīng)傳遞窗進(jìn)入。包裝后的樣本可以認(rèn)為是不具有生物安全風(fēng)險(xiǎn)的，允許直接把樣本保存區(qū)拿到PCR 樣本制備間，或通過傳遞窗進(jìn)入核心工作間。實(shí)驗(yàn)人員接收到樣本的二級(jí)包裝必須在生物安全柜里打開，檢查樣本容器是否嚴(yán)格密閉，并按操作規(guī)范要求對(duì)樣本滅活及核酸提取操作。每個(gè)批次檢測(cè)需要做3 個(gè)陰性和1 個(gè)陽性對(duì)照組，并根據(jù)相關(guān)設(shè)備說明書要求設(shè)置擴(kuò)增參數(shù)并分析判讀結(jié)果。

（3）新冠病毒PCR 檢測(cè)所用的檢測(cè)試劑都是外購成品試劑，只需要在試劑準(zhǔn)備間的超凈工作臺(tái)保護(hù)下拆包。實(shí)驗(yàn)室環(huán)境要求為正壓潔凈室或常壓普通實(shí)驗(yàn)室，實(shí)驗(yàn)室氣流組織不做要求。

（4）擴(kuò)增完成后的PCR 管嚴(yán)禁開蓋或帶離擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室，必須使用專用容器盛裝密閉后，放入專用醫(yī)療垃圾桶密封。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后的所有廢棄物均需打包消毒后經(jīng)傳遞窗拿出后，進(jìn)入高溫滅菌器滅活處理。

新冠病毒PCR 檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的工藝平面設(shè)計(jì)參考：

根據(jù)國家相關(guān)規(guī)定，新冠病毒PCR 檢測(cè)方法為“實(shí)時(shí)定量熒光分析法”，PCR 檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)當(dāng)設(shè)計(jì)為三個(gè)區(qū)，即試劑存儲(chǔ)與準(zhǔn)備區(qū)、樣本制備區(qū)、核酸擴(kuò)增分析區(qū)。

實(shí)驗(yàn)室各區(qū)域尺寸、面積分布及設(shè)備擺放可參考圖1所示設(shè)計(jì)方案。

圖1 實(shí)驗(yàn)室各區(qū)域尺寸、面積分布及設(shè)備擺放

消洗滅菌間的設(shè)置可在本樓層的某一個(gè)位置進(jìn)行設(shè)置，不需要強(qiáng)調(diào)緊挨著PCR 主檢測(cè)區(qū)。

樣本制備間的生物安全柜應(yīng)當(dāng)采用A2 型，且不需要接外排風(fēng)管，不宜選用B2 型（沒有揮發(fā)性有害氣體需外排）。主實(shí)驗(yàn)室相對(duì)于室外為負(fù)壓，氣流組織必須設(shè)計(jì)為單向流，室內(nèi)廢氣必須經(jīng)高效過濾后排出，滿足國家對(duì)加強(qiáng)型二級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室的要求。各功能區(qū)應(yīng)設(shè)置可視對(duì)講系統(tǒng)，保證實(shí)驗(yàn)室內(nèi)外通訊暢通。

研究區(qū)土壤類型以棕色針葉林土為主，土體內(nèi)含有石礫多，質(zhì)地較輕，土層淺薄，一般在30～40 cm，表土疏松，腐殖質(zhì)含量高。由于土壤滯水性強(qiáng)，土壤呈現(xiàn)高度濕潤狀態(tài)。該區(qū)土壤凍結(jié)期較長，凍層深度達(dá)3 m，并有島狀永凍層存在，土壤呈酸性。

實(shí)驗(yàn)室的維護(hù)結(jié)構(gòu)及安全設(shè)施設(shè)置要求：

功能區(qū)實(shí)質(zhì)為生物安全實(shí)驗(yàn)室，建設(shè)標(biāo)準(zhǔn)需滿足GB19489 和GB50346 相關(guān)要求。實(shí)驗(yàn)室所檢測(cè)的樣本為高致病性病毒微生物，PCR 檢測(cè)室的樣本制備間應(yīng)按照TCECS662 規(guī)范中加強(qiáng)型P2 相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。

墻頂面采用易于清潔、耐擦洗、耐消毒化學(xué)腐蝕的保溫復(fù)合鋼板材料，拐角處采用半圓形圓弧鋁收邊。墻頂板間的拼縫使用中性硅酮膠密封，保證實(shí)驗(yàn)室的氣密性要求。

地面采用PVC 或橡膠地板無縫拼接，踢腳處需上翻100mm，與墻面形成圓弧形連接，減少室內(nèi)不易清理的死角角，降低微生物在邊角處滋生風(fēng)險(xiǎn)。

實(shí)驗(yàn)室門采用四框成品鋼板門，保證門邊縫的氣密性要求。緩沖間相鄰的兩門安裝自動(dòng)互鎖及緊急出門按鈕，保證實(shí)驗(yàn)室的安全性要求。

實(shí)驗(yàn)室窗戶采用成品雙層中空玻璃觀察窗，必要時(shí)設(shè)置可用于設(shè)備進(jìn)出的活動(dòng)窗。以供室內(nèi)生物安全柜檢修更換時(shí)可以自由進(jìn)出核心工作間。

進(jìn)出PCR 實(shí)驗(yàn)區(qū)的專用走道需設(shè)置門禁裝置和防止嚙齒類動(dòng)物進(jìn)出的擋鼠板。

在相關(guān)的區(qū)域黏貼生物安全警示標(biāo)志和緊急處置物品區(qū)域標(biāo)識(shí)。核心工作間設(shè)置緊急洗眼裝置（一次性緊急洗眼瓶）和自動(dòng)感應(yīng)免水洗消毒裝置。

樣本制備間不宜設(shè)置水池，防止實(shí)驗(yàn)室存在未徹底滅活的新冠病毒通過水池進(jìn)入下水道管網(wǎng)系統(tǒng)，造成交叉污染風(fēng)險(xiǎn)；如必須設(shè)置水池，實(shí)驗(yàn)過程中所產(chǎn)生的廢水必須收集，經(jīng)高溫或化學(xué)方式消殺滅菌后排入下水管網(wǎng)。

實(shí)驗(yàn)室暖通系統(tǒng)設(shè)計(jì)要求：

PCR 實(shí)驗(yàn)室各功能間暖通參數(shù)設(shè)置參考圖2。

圖2 PCR實(shí)驗(yàn)室各功能間暖通參數(shù)設(shè)置

實(shí)驗(yàn)室空調(diào)形式應(yīng)選用全新風(fēng)空調(diào)系統(tǒng)，不允許帶回風(fēng)。以防止基因片段或新冠病毒通過氣溶膠傳播，造成交叉污染，所以一般PCR 實(shí)驗(yàn)室能耗較高。PCR 室各功能間應(yīng)設(shè)置獨(dú)立的排風(fēng)系統(tǒng)，樣本制備間排風(fēng)需要經(jīng)高效過濾器過濾后排出。有壓差梯度的相鄰實(shí)驗(yàn)室需設(shè)置機(jī)械式壓差表，用于實(shí)時(shí)監(jiān)控壓差信息。相鄰房間有壓差要求，壓差梯度至少應(yīng)設(shè)置為±10Pa。相鄰房間的房門應(yīng)開向高壓一側(cè)。

由于新冠病毒屬于高致病性病毒微生物，實(shí)驗(yàn)室人員操作時(shí)需全程穿戴三級(jí)防護(hù)措施，實(shí)驗(yàn)室的溫度設(shè)置應(yīng)能全年設(shè)置到18-20℃，以保證實(shí)驗(yàn)人員工作環(huán)境的舒適度要求。

實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)儀器配置參考：

為滿足PCR 實(shí)驗(yàn)要求，新建成的實(shí)驗(yàn)室必須配置響應(yīng)的檢測(cè)設(shè)備和儀器才能完成檢測(cè)工作。檢測(cè)所需儀器可參考圖3。

圖3 檢測(cè)所需儀器

綜上，想要建成一個(gè)符合規(guī)范、安全可靠、操作順暢、杜絕交叉感染風(fēng)險(xiǎn)的新冠病毒檢測(cè)PCR 實(shí)驗(yàn)室，我們必須要在工藝規(guī)劃、流程設(shè)計(jì)、設(shè)備采購、點(diǎn)位預(yù)留、安全警示等方方面面都周全考慮。項(xiàng)目實(shí)施前盡可能請(qǐng)相關(guān)臨檢或疾控專家審核把關(guān)，減少不必要的二次改造及返工情況發(fā)生。

建成后的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)按要求通過臨床檢驗(yàn)中心PCR 實(shí)驗(yàn)室技術(shù)安全合格證和衛(wèi)健委指定機(jī)構(gòu)生物安全備案證書。在配置一定數(shù)量的專業(yè)檢測(cè)人員，才可以合法地開展新冠病毒PCR 檢測(cè)相關(guān)業(yè)務(wù)。