趙閩家，吳 迪，王 旭，楊娜娜，劉樹森，徐蓓蕾*

(1.哈爾濱市食品藥品檢驗檢測中心，哈爾濱150090；2. 哈爾濱商業(yè)大學(xué) 藥學(xué)院，哈爾濱150076)

顯微鑒別(microscopic identification)是運用電子顯微技術(shù)直接觀察中成藥中原料藥粉末的組織、細(xì)胞或內(nèi)含物，借此鑒別中成藥處方組成的真實性的一種鑒別方法.大多數(shù)的中成藥直接用各種中藥粉末配制而成，因此可選擇粉末鑒定法進行鑒定；有些濃縮丸劑、片劑等是由藥材浸膏制備的，其中殘留有藥材細(xì)胞、組織碎片及其它細(xì)微特征，因此顯微鑒定對其也有一定的應(yīng)用價值.鑒定時，根據(jù)處方和顯微觀察，選取足以說明在中成藥中是該藥所專有的特征，作為鑒別依據(jù)[1-3].

丸劑、散劑、片劑、膠囊劑等為中成藥的常見劑型，所用原料藥為部分或全部中藥材細(xì)粉，因此保留了飲片粉末的顯微特征，這類中成藥的質(zhì)量鑒別項下常列有顯微鑒別.中成藥所含藥味多、成分復(fù)雜且含量低、成分之間相互干擾大，因此現(xiàn)代化學(xué)方法及儀器分析方法常常不能有效測定其質(zhì)量，而顯微鑒別方法則獨具優(yōu)勢.《中國藥典1977年版》初次記載了“中草藥及成方顯微鑒別法”，并在各中成藥的鑒別項下對其可資鑒別的顯微特征作出規(guī)定，一些省、市、自治區(qū)所編印的《藥品標(biāo)準(zhǔn)》也相繼增訂這方面內(nèi)容，《中國藥典1985年版》收載的中成藥對此又有所充實和提高，十余年來證明，顯微鑒別法對保證中成藥質(zhì)量行之有效[4-7].

《中國藥典2005年版》記載，黃連羊肝丸顯微鑒別：纖維束鮮黃色，壁稍厚，紋孔明顯，韌皮纖維淡黃色，梭形，壁厚，孔溝細(xì)，纖維束鮮黃色，周圍細(xì)胞含草酸鈣方晶成片存在于薄壁組織中，種皮柵狀細(xì)胞一列，長40～72 μm，其下數(shù)列細(xì)胞含草酸鈣簇晶及方晶，油管含黃色或棕黃色分泌物，不規(guī)則團塊暗灰色，不透明，加酸產(chǎn)生氣泡[8].對黃連羊肝丸處方分析可知：黃連、胡黃連為根莖類中藥；黃芩、柴胡、龍膽為根類中藥；黃柏為皮類中藥；密蒙花為花類中藥；決明子為種子類中藥；木賊為全草類中藥；青皮、茺蔚子為果實類中藥；石決明為動物類中藥.此中成藥，由十四味藥材組成，這些中藥藥材經(jīng)過幾千年的醫(yī)療實踐證明，皆有治療眼部疾病的作用或保肝、養(yǎng)肝之功效[9-11].羊肝補肝血，養(yǎng)肝陽而治目疾；黃連有清心火、瀉肝明目的功效；決明子、茺蔚子可以涼肝明目；胡黃連、黃芩、黃柏、龍膽草的功效為清瀉肝火；柴胡、青皮可以舒肝解郁，黃連羊肝丸有清泄肝熱而明目之效[12-15].元代的《原機啟微》和明代的《證治準(zhǔn)繩》曾對此方有過記載，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究和臨床驗證表明，黃連羊肝丸屬純中藥制劑，價格低廉，安全有效，無毒副作用，可作為病毒性角膜炎早期治療的首選藥物，是治療眼部疾病的良方.

1 方法與結(jié)果

1.1 儀器與材料

顯微鏡(XSM-20生物顯微鏡，寧波舜宇儀器有限公司)、干燥箱(XRD-HR760IN，深圳市旭日東電子設(shè)備有限公司)、黃連羊肝丸由不同廠家提供(見表1).

表1 不同廠家的黃連羊肝丸

1.2 制片及觀察

1.2.1 取樣

取不同廠家(或不同批次)的黃連羊肝丸，每盒任選其中3粒蜜丸(或3袋水蜜丸).

1.2.2 脫蜜

取蜜丸，除去外層，切成碎塊，加熱水(50～60 ℃)，振搖，使藥物溶散混懸、煉蜜溶解，靜置，傾去上液，在沉淀中再加熱水，依上法操作，如此3～4次(至上液基本無色)，最后所得的沉淀物即為樣品.可直接取沉淀制片，亦可將沉淀置干燥箱干燥后取樣制片進行顯微鑒別.

1.2.3 制片

將需要進行顯微觀察的粉末藥材放置于載玻片上，然后輕輕滴入2～3滴的水合氯醛，攪勻，蓋玻片必須用鑷子沿一側(cè)輕輕放下，以便液體能夠自然展勻.使用濾紙將溢出的液體吸拭或從蓋玻片邊緣補充液體不足的空隙.每個廠家的黃連羊肝丸粉末各制片5個.

1.2.4 顯微觀察

將制備好的片子放在顯微鏡載物臺上，對黃連羊肝丸進行顯微鑒定，檢出其所含的14種藥物成分，排除交叉，避免各藥物相互干擾，對其中各藥物具有鑒別價值的顯微特征進行觀察并拍照.

1.3 結(jié)果與討論

1.3.1 各藥材顯微特征

1)黃連石細(xì)胞鮮黃色，測量其直徑平均值在25～64 μm之間，紋孔小，孔溝細(xì)，少數(shù)石細(xì)胞壁較薄而胞腔較大.

2)胡黃連棕色塊隨處散在，黃棕色，形狀、大小不一.

3)黃芩韌皮纖維微黃色.呈梭形，顯微測量其長度平均值在51～200 μm之間，直徑約9～33 μm.

4)黃柏晶纖維鮮黃色，成束存在.柴胡油管管道中含黃棕色條狀分泌物.

5)龍膽草酸鈣針晶不規(guī)則散在于薄壁細(xì)胞中或充塞于細(xì)胞一角.

6)青皮中果皮薄壁組織呈無色，細(xì)胞形狀不規(guī)則，有的細(xì)胞中可見到淡黃色無定形或類圓形橙皮甙結(jié)晶，結(jié)晶大小不一.

7)木賊的內(nèi)皮層細(xì)胞表面觀呈長方形，壁微波狀彎曲，有光澤.

8)茺蔚子內(nèi)果皮厚壁細(xì)胞呈黃棕色.底面觀(內(nèi)表面觀)胞間層不易被觀察到，紋孔排列疏松，存在不規(guī)則形狀裂紋，胞腔形似類圓形，多見方晶.

9)決明子的種皮柵狀細(xì)胞，無色，橫斷面觀細(xì)胞1列，呈長方形.

10)密蒙花極易見其特征結(jié)構(gòu)星狀毛，體部具有2細(xì)胞，基部細(xì)胞并列存在，每個細(xì)胞具有2分叉，分叉長度相當(dāng)或一長一短，先端逐漸尖銳.石決明不規(guī)則團塊暗灰色，不透明.

11)夜明砂昆蟲的觸角顯微可見.動物類的顯微特征可鑒別動物類用藥羊肝的存在.(見圖1～3)

圖1 表1中不同廠家的黃連羊肝丸樣品

圖2 表1中不同廠家的黃連羊肝丸樣品

圖3 表1中不同廠家的黃連羊肝丸樣品

1.3.2 專屬性特征

黃連、黃芩、黃柏、龍膽中均含有石細(xì)胞.黃連石細(xì)胞大多呈類圓形，直徑25～64 μm，紋孔小，孔溝細(xì)；黃芩石細(xì)胞直徑24～48 μm，孔溝有分叉；黃柏石細(xì)胞大多呈分枝狀，形大；龍膽石細(xì)胞少見，紋孔裂縫狀，有的胞腔內(nèi)含細(xì)小針晶.因此，可以根據(jù)所含石細(xì)胞特點的不同進行黃連的鑒別.黃連與黃芩中均含有韌皮纖維.黃連韌皮纖維較粗短，長136～185 μm，直徑27～37 μm.黃芩韌皮纖維長51～200 μm，直徑9～33 μm.通過顯微測量法可鑒別黃芩.

1.3.3 結(jié)果

對黃連羊肝丸處方進行分析，其組成藥物共14種，避開交叉，排除干擾，在不同廠家的黃連羊肝丸粉末所制的片子中，均可見各藥材的主要顯微特征.說明已購買的各廠家黃連羊肝丸中藥味無缺失現(xiàn)象，表明其質(zhì)量在顯微鑒別結(jié)果上無明顯差別，若要進一步進行質(zhì)量控制，可以結(jié)合理化鑒別和含量測定的方法.

2 討 論

以往文獻(xiàn)鑒定黃連羊肝丸的質(zhì)量，通常只對黃連和黃芩的主要成分小檗堿及黃芩苷進行鑒別和含量測定，此法只能確定中成藥中某味或某幾味藥的指標(biāo)性成分的含量高低，不能全面的檢測處方中的所有原料藥的有無，尤其對于沒有標(biāo)準(zhǔn)品的中藥，檢測難度更大.本文采用顯微鑒別方法，具有操作簡便、結(jié)果準(zhǔn)確的特點，可以快速、簡便的對中成藥進行質(zhì)量控制，能夠測定制劑處方中原料藥組成的真實性，是中成藥鑒定中的主要手段之一.

中成藥的顯微鑒別是在粉末藥材顯微鑒定的基礎(chǔ)上，通過排比、分析，選定中成藥原料藥材中可資鑒別的顯微特征作為檢定的依據(jù)，具有一定專屬性，且制劑的原料藥材均為整體和批量磨粉入藥，避免了個體差異和取材部位不同的影響，保證了顯微特征檢出的重現(xiàn)性.本研究所用的顯微鑒別法，可以宏觀全面的把握中成藥的質(zhì)量，完善了中藥制劑的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，進一步較全面地補充了藥典中對于中成藥顯微鑒別的內(nèi)容，為今后中藥制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定起了示范性作用.