王之怡， 錢 燁， 陳怡然， 許 蓉， 張美玲

(華東師范大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院, 上海200241)

益生菌是指被機(jī)體經(jīng)過(guò)口服或其他方式攝入適當(dāng)數(shù)量后，能夠定植于宿主腸道改善微生態(tài)平衡，從而發(fā)揮有益作用的活菌。益生菌及其制劑已成為國(guó)內(nèi)外研究的熱點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于諸多領(lǐng)域[1]。

腐乳是中國(guó)特色的傳統(tǒng)發(fā)酵食品，其中的益生菌也受到許多學(xué)者的關(guān)注。王夫杰等[2]曾報(bào)道在腐乳中分離得到了能夠耐受10%鹽度和5%酒精度的乳酸菌。鄧加聰[3]曾報(bào)道從豆腐乳中分離獲得一株具有廣譜抑菌性能的乳桿菌，對(duì)短小桿菌、藤黃八疊球菌、甘薯病菌、大腸埃希菌和金黃色葡萄球菌這5種指示菌均有抑制活性。因此，發(fā)酵食品作為益生菌篩選的良好來(lái)源，具有一定的發(fā)掘潛力。

乳酸菌是較為常用的益生菌。目前，針對(duì)乳酸菌進(jìn)行的體外研究發(fā)現(xiàn)，乳酸菌具有耐酸耐膽鹽[4]、產(chǎn)生具有廣譜的抑制真菌活性的抗菌肽[5]、吸附食品中的重金屬[6]等功能。在此基礎(chǔ)上，研究者們開(kāi)展了乳酸菌在體的作用及機(jī)制探究，結(jié)果表明乳酸菌可以促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收和代謝[7]，提高宿主免疫能力[8]，影響宿主腸道微生態(tài)平衡[9]等作用。關(guān)于乳酸菌對(duì)宿主行為發(fā)育的影響，以及宿主代謝與行為的關(guān)系探究還鮮有報(bào)道。

動(dòng)物腸道內(nèi)膽鹽含量約為0.3%～0.5%[10]，是典型的高膽鹽環(huán)境。具備膽鹽耐受能力提示著該菌株具有腸道定植潛能[11]。因此，本研究設(shè)計(jì)0.3%膽鹽平板對(duì)分離得到的乳酸菌進(jìn)行耐膽鹽能力檢測(cè)，以期得到一株能耐受動(dòng)物腸道環(huán)境的乳酸菌進(jìn)行進(jìn)一步在體實(shí)驗(yàn)。

斑馬魚(yú)(Daniorerio)常用于胚胎發(fā)育[12]、脂肪積累[13]和毒理實(shí)驗(yàn)[14]等研究。近年來(lái)，斑馬魚(yú)模型也被廣泛應(yīng)用于益生菌的在體功能檢測(cè)[15-16]。斑馬魚(yú)模型具有顯著優(yōu)點(diǎn)：1)斑馬魚(yú)早期胚胎透明，利于脂肪沉積情況的染色觀察[17]和微生物在體實(shí)驗(yàn)的定植情況觀察[18]。2)斑馬魚(yú)具有較強(qiáng)的繁殖能力，胚胎發(fā)育迅速，飼養(yǎng)條件簡(jiǎn)單。3)斑馬魚(yú)基因數(shù)據(jù)庫(kù)較為完善，具有良好的研究基礎(chǔ)。

本研究首先從腐乳中篩選獲得乳酸菌，進(jìn)行在體實(shí)驗(yàn)探究，檢測(cè)菌株對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)代謝和運(yùn)動(dòng)攝食的影響，以期對(duì)腐乳中分離得到的乳酸菌菌株進(jìn)行較為全面的功能評(píng)價(jià)。

1 材料與方法

1.1 材料

家庭自制腐乳，MRS肉湯培養(yǎng)基、MRS瓊脂培養(yǎng)基、牛膽鹽(杭州百思生物技術(shù)有限公司)，細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒(天根生化科技有限公司)，DNA marker 2000 plus(TaKaRa)，引物27 F：5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′、1492R：5′-TACCTTGTTACGACTT-3′，6×Loading Buffer，2×EasyTaqPCR SuperMix，瓊脂糖，EB染液，ASP染液，尼羅紅染液。

1.2 方法

1.2.1 腐乳中乳酸菌的富集與分離

取腐乳(FR)樣品5 mL，1200 r/min離心1 min，取上清液1 mL稀釋10倍。取稀釋液1 mL加入100 mL MRS肉湯培養(yǎng)基，厭氧條件下37 ℃，200 r/min培養(yǎng)過(guò)夜，富集菌體。第二天，將菌液稀釋104倍后取100 μL稀釋液涂布在MRS固體培養(yǎng)基上，將培養(yǎng)皿置于厭氧環(huán)境中37 ℃倒置培養(yǎng)48 h，得到乳酸菌單菌落。

1.2.2 耐膽鹽乳酸菌的篩選

利用影印平板法的原理，用牙簽挑取MRS固體培養(yǎng)基上形成的乳酸菌單菌落，分別接種到MRS平板以及含有0.3%牛膽鹽的MRS平板的相同位置上，每個(gè)菌落設(shè)置2個(gè)平行。將培養(yǎng)皿置于厭氧環(huán)境中37 ℃倒置培養(yǎng)48 h。

1.2.3 DNA的提取與16S rDNA的擴(kuò)增

利用細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒(DP302)提取耐膽鹽菌株的DNA，并以其作為模板，PCR擴(kuò)增其16S rDNA的片段，PCR體系為6 μL DNA模板，30 μL 2×EasyTaqPCR SuperMix，6 μL上下游引物(5 μmol/μL)，擴(kuò)增體系為60 μL。

1.2.4 16S rDNA鑒定和進(jìn)化樹(shù)的構(gòu)建

將PCR產(chǎn)物用1%瓊脂糖進(jìn)行凝膠電泳，并送至上海美吉生物公司進(jìn)行測(cè)序。測(cè)序得到的乳酸菌16S rRNA基因序列使用DNAMAN 8軟件進(jìn)行拼接后，與NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行比對(duì)，初步確定篩選得到的乳酸菌的種類。

將測(cè)序結(jié)果和數(shù)據(jù)庫(kù)中的參比菌株序列使用MEGA-X軟件，利用鄰近法(Neighbor-Joining method)構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)，進(jìn)一步確定篩選得到的乳酸菌與其參比菌株之間的進(jìn)化關(guān)系，同時(shí)進(jìn)行100次Bootstrap自舉法檢驗(yàn)進(jìn)化樹(shù)分支的可信度。

1.2.5 斑馬魚(yú)幼魚(yú)的飼養(yǎng)

選取野生型斑馬魚(yú)中性成熟且生長(zhǎng)狀況良好、規(guī)格均勻的雌雄魚(yú)，使其自由交配，收取魚(yú)卵當(dāng)天記為第0天。將魚(yú)卵以合適密度(每皿50～100條)放入盛有卵水的培養(yǎng)皿中孵化，分為對(duì)照組(除每天半定量更換卵水外，不額外添加其他物質(zhì)，Control組)，低濃度處理組(水體加菌終濃度為104cfu/mL，F(xiàn)R27-4組)，高濃度處理組(水體加菌終濃度為105cfu/mL，F(xiàn)R27-5組)。培養(yǎng)皿放于28 ℃恒溫光照培養(yǎng)箱中，每天用新鮮卵水半定量換水，并吸走卵殼和死卵。待斑馬魚(yú)幼魚(yú)生長(zhǎng)到5 dpf(days post fertilization，dpf)后，開(kāi)始喂食草履蟲(chóng)液和蛋黃液，待斑馬魚(yú)幼魚(yú)生長(zhǎng)到10 dpf后，改喂豐年蟲(chóng)。

乳酸菌添加方式：每天取乳酸菌菌液于離心管中1200 r/min離心1 min后去上清，根據(jù)平板計(jì)數(shù)結(jié)果，往菌體中加入相應(yīng)量的卵水重懸后加入對(duì)應(yīng)組。乳酸菌從0 dpf開(kāi)始每天在換水后添加直至實(shí)驗(yàn)結(jié)束，每隔7 d重新進(jìn)行計(jì)數(shù)。

卵水配方：11 L 超純水中加入 16.5 mL 海鹽溶液和 100 μL 亞甲基藍(lán)。

1.2.6 斑馬魚(yú)卵孵化率的測(cè)定

分別統(tǒng)計(jì)0 dpf各組中初始斑馬魚(yú)卵數(shù)和3 dpf孵出的斑馬魚(yú)幼魚(yú)數(shù)，計(jì)算各組斑馬魚(yú)卵的孵化率，計(jì)算公式如下：

孵化率(%)= (3 dpf存活幼魚(yú)數(shù)/0 dpf 魚(yú)卵數(shù))×100%

1.2.7 斑馬魚(yú)幼魚(yú)的平均體長(zhǎng)比較

使用 Image J軟件對(duì)斑馬魚(yú)幼魚(yú)的熒光顯微鏡白光照片進(jìn)行體長(zhǎng)的測(cè)量統(tǒng)計(jì)。

1.2.8 斑馬魚(yú)幼魚(yú)脂肪沉積的測(cè)定

將實(shí)驗(yàn)用魚(yú)置于12孔板中，每孔5條。吸干每孔中的水，在避光條件下加入2 mL尼羅紅工作液，沒(méi)過(guò)魚(yú)體。避光染色30 min，隨后每隔30 min用卵水洗滌2次，共洗滌8次。將實(shí)驗(yàn)用魚(yú)置于熒光顯微鏡下以綠色激發(fā)光觀察并拍照記錄(曝光時(shí)間為200 ms)，利用Image J軟件測(cè)量統(tǒng)計(jì)熒光面積。

1.2.9 斑馬魚(yú)幼魚(yú)的攝食實(shí)驗(yàn)

取50 mL草履蟲(chóng)培養(yǎng)液，加入5 μL ASP染料避光染色1 h，用500目濾網(wǎng)過(guò)濾。將實(shí)驗(yàn)用魚(yú)置于12孔板中，每孔5條。每孔加入2～3 mL上述草履蟲(chóng)餌料，放置于28 ℃的培養(yǎng)箱中避光1 h。將實(shí)驗(yàn)用魚(yú)置于熒光顯微鏡下以藍(lán)色激發(fā)光觀察并拍照記錄(曝光時(shí)間為5 s)，利用Image J軟件測(cè)量統(tǒng)計(jì)熒光面積。

1.2.10 斑馬魚(yú)幼魚(yú)的行為學(xué)實(shí)驗(yàn)

取不同組相同日齡斑馬魚(yú)幼魚(yú)各5條置于24孔板中，每孔1條。將24孔板置于Zebrabox及ZebraLab系統(tǒng)中，記錄其每分鐘運(yùn)動(dòng)情況，實(shí)驗(yàn)持續(xù)24 h，利用Microsoft Excel軟件對(duì)其行動(dòng)距離進(jìn)行分析計(jì)算并制得圖表。其中，小于3 mm/s為低速運(yùn)動(dòng)；3～8 mm/s為中速運(yùn)動(dòng)；大于8 mm/s為高速運(yùn)動(dòng)。

1.2.11 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

用GraphPad Prism 6軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)(t-test), 分析比較處理組與對(duì)照組的差異，P<0.05代表有顯著性差異?！?”為P<0.05， “**”為P<0.01, “***”為P<0.001。

2 結(jié)果與分析

2.1 耐膽鹽乳酸菌的分離篩選、16S rDNA鑒定及進(jìn)化樹(shù)構(gòu)建

從腐乳中成功分離純化出一株耐膽鹽乳酸菌，編號(hào)為FR27。經(jīng)測(cè)序比對(duì)后發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)R27與植物乳桿菌LactobacillusplantarumNG3(KR107060.1)相似度達(dá)99.52%。構(gòu)建進(jìn)化樹(shù)(圖1)顯示，F(xiàn)R27在進(jìn)化上與LactobacillusplantarumNG3的關(guān)系最近，同時(shí)與其他幾株Lactobacillusplantarum的遺傳距離都較近，但與同為乳酸菌的Enterococcusfaecium和Pediococcuspentosaceus的遺傳距離相對(duì)較遠(yuǎn)，因此可以判斷FR27屬于Lactobacillusplantarum。

圖1 FR27系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)

2.2 FR27對(duì)斑馬魚(yú)幼魚(yú)生長(zhǎng)發(fā)育的影響

2.2.1 FR27對(duì)斑馬魚(yú)卵孵化率的影響

為了判斷FR27對(duì)斑馬魚(yú)是否安全，同時(shí)探究其對(duì)魚(yú)體發(fā)育的影響，統(tǒng)計(jì)各組斑馬魚(yú)卵孵化率，結(jié)果如圖2所示。與對(duì)照組相比，F(xiàn)R27-4組的孵化率無(wú)顯著差異(P=0.0611)，F(xiàn)R27-5組的孵化率顯著提高(P<0.05)，表明FR27對(duì)魚(yú)體是安全的，同時(shí)在一定程度上能促進(jìn)斑馬魚(yú)卵的發(fā)育成熟。

2.2.2 FR27對(duì)斑馬魚(yú)幼魚(yú)體長(zhǎng)的影響

通過(guò)統(tǒng)計(jì)相同日齡各組斑馬魚(yú)的平均體長(zhǎng)來(lái)探究FR27對(duì)幼魚(yú)生長(zhǎng)的影響。由圖3可知，F(xiàn)R27的添加對(duì)斑馬魚(yú)幼魚(yú)生長(zhǎng)存在一定促進(jìn)作用，且該作用效果隨菌液濃度的增加而增強(qiáng)。其中，F(xiàn)R27-4組的平均體長(zhǎng)顯著大于對(duì)照組(P<0.05)，F(xiàn)R27-5組平均體長(zhǎng)增加極為顯著(P<0.001)。

圖2 不同濃度FR27菌液處理后斑馬魚(yú)卵孵化率(n=5)

圖3 相同日齡各組斑馬魚(yú)幼魚(yú)體長(zhǎng)(n=5)

2.2.3 FR27對(duì)斑馬魚(yú)幼魚(yú)脂肪沉積的影響

圖4顯示了FR27對(duì)斑馬魚(yú)幼魚(yú)脂肪沉積的影響，低濃度組的脂肪沉積較對(duì)照組無(wú)顯著差異(P=0.0747)，高濃度組的脂肪沉積顯著增加(P<0.01)。該結(jié)果表明在相同投喂條件下，F(xiàn)R27可促進(jìn)斑馬魚(yú)幼魚(yú)的脂肪沉積，但菌液濃度需達(dá)到較高水平才會(huì)表現(xiàn)出顯著效果。

圖4中a、b和c分別表示對(duì)照組、FR27-4組和FR27-5組。1、2列分別表示白光下斑馬魚(yú)幼魚(yú)的形態(tài)圖以及使用Image J軟件得到的熒光分布圖。d圖為不同組斑馬魚(yú)幼魚(yú)腹部熒光面積的統(tǒng)計(jì)圖(n=5，a、b和c中每組選取3條以作展示)。

圖4 不同濃度FR27菌液處理后斑馬魚(yú)幼魚(yú)的尼羅紅染色情況

2.3 FR27促進(jìn)斑馬魚(yú)幼魚(yú)生長(zhǎng)發(fā)育的原因探究

2.3.1 FR27對(duì)斑馬魚(yú)幼魚(yú)攝食能力的影響

為進(jìn)一步探究FR27處理組的脂肪沉積高于對(duì)照組的原因，檢測(cè)相同時(shí)間內(nèi)各組斑馬魚(yú)的攝食量。由圖5可知，F(xiàn)R27可提高斑馬魚(yú)幼魚(yú)的攝食能力，且高濃度組表現(xiàn)更顯著。其中，F(xiàn)R27-4組的消化道熒光面積顯著大于對(duì)照組(P<0.05)，F(xiàn)R27-5組與對(duì)照組相比差異極為顯著(P<0.001)。

圖5中a、b和c分別表示對(duì)照組、FR27-4組、FR27-5組。1、2列分別表示白光下斑馬魚(yú)幼魚(yú)的形態(tài)圖、曝光時(shí)間為5 s拍攝的斑馬魚(yú)幼魚(yú)攝食帶熒光的草履蟲(chóng)1 h后熒光顯微鏡下圖。d圖為不同組斑馬魚(yú)幼魚(yú)消化道熒光面積的統(tǒng)計(jì)結(jié)果(n=5，a、b和c中每組選取3條以作展示)。

圖5 不同濃度FR27菌液處理后斑馬魚(yú)幼魚(yú)的攝食情況

2.3.2 FR27對(duì)斑馬魚(yú)幼魚(yú)運(yùn)動(dòng)能力的影響

對(duì)斑馬魚(yú)幼魚(yú)進(jìn)行24 h的行為監(jiān)測(cè)，探究不同組斑馬魚(yú)幼魚(yú)攝食能力表現(xiàn)出明顯差異的原因，結(jié)果如圖 6所示。從圖 6-a中可以看出，在白天FR27-5組斑馬魚(yú)幼魚(yú)的運(yùn)動(dòng)距離大于FR27-4組，且FR27處理組都大于對(duì)照組，而在夜晚3組斑馬魚(yú)幼魚(yú)的運(yùn)動(dòng)距離無(wú)差異；從圖 6-b中可見(jiàn)，在高速運(yùn)動(dòng)中，F(xiàn)R27處理組的運(yùn)動(dòng)距離與對(duì)照組相比均表現(xiàn)出顯著性差異(FR27-4組：P<0.01；FR27-5組：P<0.001)。同時(shí)，F(xiàn)R27-5組低速運(yùn)動(dòng)距離也顯著大于對(duì)照組(P<0.05)。這說(shuō)明FR27的添加能夠提高斑馬魚(yú)幼魚(yú)的運(yùn)動(dòng)能力，且隨菌液濃度的增加，該作用效果增強(qiáng)。

a：24 h內(nèi)各組斑馬魚(yú)幼魚(yú)的行動(dòng)距離圖。b：24 h內(nèi)各組斑馬魚(yú)幼魚(yú)每分鐘以不同速度運(yùn)動(dòng)的平均運(yùn)動(dòng)距離統(tǒng)計(jì)，其中Smldist表示每分鐘以低速運(yùn)動(dòng)的平均運(yùn)動(dòng)距離；Inadist表示每分鐘以中速運(yùn)動(dòng)的平均運(yùn)動(dòng)距離；Lardist表示每分鐘以高速運(yùn)動(dòng)的平均運(yùn)動(dòng)距離(n=5)

3 討論

在現(xiàn)有的乳酸菌研究中，研究者們主要從泡菜[11]、傳統(tǒng)發(fā)酵酸奶[19]和健康動(dòng)物新鮮糞便樣品[20]等來(lái)源分離篩選得到具有不同功能的乳酸菌。發(fā)酵食品腐乳作為乳酸菌的來(lái)源雖已引起關(guān)注，但目前主要集中于離體性質(zhì)研究，對(duì)腐乳來(lái)源乳酸菌的在體作用尚無(wú)報(bào)道。本研究成功地從腐乳中篩選得到一株耐受0.3%膽鹽的乳酸菌菌株FR27，通過(guò)基因測(cè)序比對(duì)后發(fā)現(xiàn)FR27是一株植物乳桿菌(Lactobacillusplantarum)。Oguntoyinbo和Narbad[21]曾報(bào)道在非洲發(fā)酵谷物中分離得到一株具有耐膽鹽能力的LactobacillusplantarumULAG24，其具有競(jìng)爭(zhēng)性排除體外培養(yǎng)的HT29細(xì)胞系中SalmonellaentericaLT2的能力，且能刺激BALB/c小鼠免疫因子IFN γ和IL10的產(chǎn)生，這提示著植物乳桿菌Lactobacillusplantarum對(duì)動(dòng)物體的健康具有一定潛在作用。

為了進(jìn)一步探究分離篩選得到的FR27對(duì)斑馬魚(yú)生長(zhǎng)發(fā)育的影響，將不同濃度的FR27以浸泡方式添加至斑馬魚(yú)受精卵孵育的水環(huán)境中，隨后進(jìn)行了一系列在體功能實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明，F(xiàn)R27能促進(jìn)斑馬魚(yú)受精卵孵化(圖 2)。目前，關(guān)于益生菌的添加提高動(dòng)物受精卵孵化能力的研究多在家禽中開(kāi)展，Mazanko等[22]曾發(fā)現(xiàn)：芽孢桿菌益生菌補(bǔ)充劑能提高雞蛋孵化率。在水生動(dòng)物領(lǐng)域，相關(guān)研究還鮮有報(bào)道。此外，F(xiàn)R27能顯著增加幼魚(yú)體長(zhǎng)(圖 3)，該結(jié)果與黃坤鵬[23]使用魚(yú)源克勞氏芽孢桿菌Bacillusclausii在石斑魚(yú)幼魚(yú)上開(kāi)展的實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致。同時(shí)，F(xiàn)R27的作用效果隨水體菌濃度的增加而更為顯著。FR27的添加還能增加斑馬魚(yú)幼魚(yú)的脂肪沉積，高濃度組表現(xiàn)出顯著性差異(圖 4)。益生菌對(duì)動(dòng)物體脂肪沉積及體重的影響一直以來(lái)都飽受爭(zhēng)議，在一項(xiàng)健康足月嬰兒中開(kāi)展的人體實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)[24]，與安慰劑組相比，益生菌服用組的體重會(huì)顯著增加。但在益生菌對(duì)畜禽作用的研究結(jié)果中發(fā)現(xiàn)[25-27]，益生菌的添加可以增加畜禽個(gè)體的大小、體重以及瘦肉比例，但不能增加脂肪沉積，甚至可能降低胴體脂肪率，這與本研究結(jié)果相悖。為了探究FR27促進(jìn)脂肪沉積的原因，對(duì)斑馬魚(yú)幼魚(yú)的攝食能力和行為能力進(jìn)行進(jìn)一步檢測(cè)后發(fā)現(xiàn)：FR27能提高斑馬魚(yú)幼魚(yú)的攝食和運(yùn)動(dòng)能力，同時(shí)也表現(xiàn)出濃度效應(yīng)(圖 5和圖6)。關(guān)于乳酸菌能夠提高魚(yú)體的運(yùn)動(dòng)能力這一觀點(diǎn)與Phelps等[28]在2017年發(fā)表的研究結(jié)果一致，他們對(duì)無(wú)菌斑馬魚(yú)模型進(jìn)行早期微生物的接種后發(fā)現(xiàn)10 dpf實(shí)驗(yàn)組的運(yùn)動(dòng)能力大于對(duì)照組，他們認(rèn)為微生物的定植是斑馬魚(yú)神經(jīng)行為正常發(fā)育的必要條件。本研究結(jié)果表明，一定濃度的乳酸菌添加能提高幼魚(yú)的攝食和運(yùn)動(dòng)能力，從而進(jìn)一步促進(jìn)斑馬魚(yú)幼魚(yú)的生長(zhǎng)發(fā)育和脂肪沉積，這一研究結(jié)果也提示：在探究益生菌對(duì)宿主生長(zhǎng)發(fā)育的影響時(shí)，攝食量是需要考量的主要指標(biāo)之一。

外源乳酸菌對(duì)魚(yú)體作用機(jī)制原因較多。早期的研究認(rèn)為，外源乳酸菌可以通過(guò)定植在魚(yú)類腸道使乳酸菌數(shù)量增加來(lái)發(fā)揮作用[29]。隨后的研究發(fā)現(xiàn)，外源乳酸菌還可通過(guò)調(diào)節(jié)宿主腸道菌群結(jié)構(gòu)進(jìn)而產(chǎn)生一定效應(yīng)。陳營(yíng)等[30]發(fā)現(xiàn)外源乳酸菌的添加使牙鲆(Paralichthysolivaceus)稚魚(yú)腸道中形成酸性環(huán)境，進(jìn)而對(duì)弧菌的增殖產(chǎn)生拮抗。王靜等[31]也指出，外源乳酸菌通過(guò)與宿主消化道正常菌群互相作用，進(jìn)一步參與動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化吸收過(guò)程。還有研究指出，外源乳酸菌對(duì)宿主的作用機(jī)制表現(xiàn)在：將復(fù)雜的碳水化合物發(fā)酵成為乳酸或揮發(fā)性脂肪酸，促進(jìn)宿主對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收并進(jìn)一步產(chǎn)生促生效應(yīng)[32]。本研究中發(fā)現(xiàn)，外源乳酸菌的添加可以顯著促進(jìn)斑馬魚(yú)的生長(zhǎng)發(fā)育和脂肪沉積，并增強(qiáng)攝食和運(yùn)動(dòng)能力，但是具體作用機(jī)制尚不清楚，有待進(jìn)一步探討。

益生菌的開(kāi)發(fā)在動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)研究中受到越來(lái)越多科學(xué)研究者及產(chǎn)業(yè)從業(yè)人員的關(guān)注，但是目前大多數(shù)益生菌篩選主要關(guān)注抑菌活性，對(duì)于益生菌促進(jìn)動(dòng)物體發(fā)育和代謝的研究，主要集中在益生菌對(duì)動(dòng)物體的體重[33-34]和消化酶活性的影響[35-37]，對(duì)于益生菌促進(jìn)動(dòng)物攝食與行為，及其與生長(zhǎng)發(fā)育的關(guān)系探究還鮮有報(bào)道。本研究對(duì)未來(lái)開(kāi)發(fā)動(dòng)物用益生菌制劑、評(píng)估益生菌功能提供了技術(shù)平臺(tái)。通過(guò)本研究將動(dòng)物行為及動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)代謝特征相關(guān)聯(lián)，為啟發(fā)后續(xù)動(dòng)物體生長(zhǎng)代謝研究提供新的思路。