李靜 楊虹(天津市生態(tài)環(huán)境監(jiān)測中心，天津 300191)

0 引言

污水處理廠污泥是污水處理廠在凈化污水過程中產(chǎn)生的沉淀物，其中含有大量需氧菌和異養(yǎng)菌[1]。我國污水處理廠對污泥穩(wěn)定化處理中糞大腸菌群的限值規(guī)定執(zhí)行GB 18918—2002《城鎮(zhèn)污水處理廠污染物排放標(biāo)準(zhǔn)》。目前，對于污泥中糞大腸菌群的檢測以多管發(fā)酵法較為普遍，本文依據(jù)CJ/T 221—2005《城市污水處理廠污泥檢驗(yàn)方法》對多管發(fā)酵法測定污泥中糞大腸菌群進(jìn)行了精密度和準(zhǔn)確度的驗(yàn)證，為該方法的可靠性和準(zhǔn)確性提供了技術(shù)支持。

本文是通過采用多管發(fā)酵法對總大腸菌群來進(jìn)行對比實(shí)驗(yàn)，比較它們結(jié)果的一致性。要測定污泥中細(xì)菌總數(shù)對判斷污泥被污染程度，污水處理廠污泥排放是否符合標(biāo)準(zhǔn)，具有重要的意義。在檢測的過程中，要結(jié)合細(xì)菌學(xué)監(jiān)測的分析以及質(zhì)控工作時(shí)間和參加省環(huán)境監(jiān)測中心站來舉辦大腸菌群檢測技術(shù)培訓(xùn)，并且比對監(jiān)測研討的情況。首先監(jiān)測人員一定是二、三級站，監(jiān)測人員大多數(shù)非在校所學(xué)專業(yè)上崗，持證率低，這就影響監(jiān)測數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和有效性。采樣瓶的材質(zhì)規(guī)格以及瓶口爆炸方式，各式多樣，有很多不符合方法和規(guī)范所規(guī)定的要求。與化學(xué)監(jiān)測，水樣采樣瓶混裝，不能滿足無菌操作的要求，這就影響了監(jiān)測數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和可比性。對于監(jiān)測點(diǎn)位細(xì)菌學(xué)監(jiān)測，水樣采集和保存的物質(zhì)條件和手段是不足的，如采樣船采樣器采樣點(diǎn)標(biāo)志等等，導(dǎo)致了監(jiān)測點(diǎn)位置層次深度定位過泛，隨意性大，影響了監(jiān)測數(shù)據(jù)的科學(xué)性可比性和連續(xù)性。

在水樣采集與保存中，采集人員大多數(shù)缺少細(xì)菌學(xué)的監(jiān)測知識，不是專業(yè)的檢測人員，細(xì)菌學(xué)監(jiān)測水樣和化學(xué)監(jiān)測水樣混采，或者是在空氣中暴露的時(shí)間過長，就會違反無菌操作的規(guī)程，并且污染水樣，水樣采集量過滿，不利于水樣檢測前震蕩，搖勻，水樣常溫運(yùn)輸存放時(shí)間過長，未采取低溫保存的措施，不符合技術(shù)規(guī)范的要求，這就影響了監(jiān)測數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。在監(jiān)測的過程中一定要根據(jù)細(xì)菌學(xué)監(jiān)測的特殊性以及大腸菌群測試特性分布及監(jiān)測過程存在的問題，要提出強(qiáng)化質(zhì)量控制，并且對環(huán)境衛(wèi)生防護(hù)有一定的對策和措施。

同時(shí)也應(yīng)該強(qiáng)化監(jiān)測人員環(huán)境衛(wèi)生安全的防患意識，進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室要穿戴防護(hù)服和防護(hù)器具，避免人體與實(shí)驗(yàn)廢液直接接觸。同時(shí)在檢測的過程中，盡量采用一次性實(shí)驗(yàn)器皿用具，實(shí)驗(yàn)固體廢棄物，按照傳染病醫(yī)院醫(yī)療固體廢棄物處置方法來進(jìn)行處置。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

乳糖蛋白胨培養(yǎng)液、伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基、革蘭氏染液、松柏油和無菌生理鹽水。

恒溫培養(yǎng)箱、高壓蒸汽滅菌鍋、冰箱、酒精燈、振蕩器、可調(diào)式電爐、天平(感量0.01g)。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 空白試驗(yàn)

不加污泥樣品，按照試樣測定的全部步驟，進(jìn)行大腸菌群的測定，接種培養(yǎng)后無產(chǎn)酸產(chǎn)氣，即空白檢驗(yàn)合格。

1.2.2 樣品的采集與預(yù)處理

采集天津市周邊20個(gè)污水處理廠污泥，含水率范圍為69.6%～95.4%?，F(xiàn)場將污泥采集于經(jīng)干熱滅菌處理的廣口玻璃瓶中，采集后保存于4℃冷藏箱中，于24h內(nèi)送檢。

稱取污泥樣品1.00g，放入裝有9mL滅菌生理鹽水的試管內(nèi)，充分搖勻，制成1:10的均勻菌液。再將此菌液倒入裝有90mL生理鹽水的三角瓶中搖勻，制成1:100的均勻菌液，如此操作，依次配制10倍稀釋菌液。

1.2.3 水樣的接種與發(fā)酵

在裝有5mL三倍濃縮乳糖蛋白胨培養(yǎng)液的5支試管中加入10mL樣品，在裝有10mL單倍濃縮乳糖蛋白胨培養(yǎng)液的5支試管中加入1mL樣品，在裝有10mL單倍濃縮乳糖蛋白胨培養(yǎng)液的5支試管中加入1mL按1:10比例稀釋的污泥樣品。

經(jīng)培養(yǎng)24h后，將產(chǎn)酸產(chǎn)氣及只產(chǎn)酸的發(fā)酵管分別接種于伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上，再置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18～24h，挑選滿足革蘭氏陰性無芽孢桿菌特征的菌落進(jìn)行復(fù)發(fā)酵實(shí)驗(yàn)，于37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，有產(chǎn)酸產(chǎn)氣者即證實(shí)有大腸菌群存在。

2 結(jié)果與討論

2.1 精密度判斷值的測定

在同類同批的污水處理廠污泥樣品中，選取最先的15個(gè)陽性樣品由同一名實(shí)驗(yàn)人員作平行雙樣，實(shí)驗(yàn)結(jié)果列于表1。

計(jì)算：ΣR1g=0.2083+Λ+0.0378=2.2305

精密度判斷值=3.27R=3.27×0.1487=0.4862

根據(jù)《水和廢水監(jiān)測分析方法》(第四版)第五篇第二章水中的細(xì)菌學(xué)測定中有關(guān)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量保證控制[2]規(guī)定，“當(dāng)雙樣實(shí)驗(yàn)結(jié)果對數(shù)值的差值大于3.27R(精密度判據(jù))時(shí)，表示實(shí)驗(yàn)的精密度已失控，須廢棄自上一次精密度檢查之后的雙樣實(shí)驗(yàn)結(jié)果，并找出原因加以糾正后，方可繼續(xù)監(jiān)測水樣?！庇杀?計(jì)算結(jié)果可知，本實(shí)驗(yàn)室在污水處理廠污泥樣品的精密度判斷值為0.4862。

2.2 精密度檢驗(yàn)

重新選取6個(gè)污水廠污泥樣品，進(jìn)行平行雙樣分析，計(jì)算精密度，與本實(shí)驗(yàn)室的污水處理廠污泥樣品的精密度判斷值0.4862進(jìn)行比較，測定結(jié)果見表2。

表1 精密度判斷值的計(jì)算

表2 實(shí)際樣品測定結(jié)果

由表2計(jì)算結(jié)果可知，實(shí)際樣品對數(shù)值的差值均小于本實(shí)驗(yàn)室污水處理廠污泥樣品的精密度判斷值0.4862，精密度檢驗(yàn)合格。

3 結(jié)語

綜上所述，本文根據(jù)多管發(fā)酵法測定城市污水處理廠污泥中大腸菌群的分析過程，對污泥中大腸菌群的測定進(jìn)行了精密度的驗(yàn)證分析工作。通過對精密度的驗(yàn)證，可以證實(shí)該方法具有較好的重復(fù)性，能夠滿足實(shí)驗(yàn)室生物檢測相關(guān)要求，具有較好的適用性。