黃金，劉艷，潘娟，劉源，許振鵬，楊炳友，匡海學(xué)

(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué) 北藥基礎(chǔ)與應(yīng)用研究教育部重點實驗室，黑龍江 哈爾濱 150040)

柴胡為傘形科植物柴胡(BupleurumchineseDC.)或狹葉柴胡(BupleurumscorzonerifoliumWild.)的干燥根[1]，前者習(xí)稱北柴胡，后者習(xí)稱南柴胡或紅柴胡。北柴胡具有退熱、疏肝、升陽的功效，常用于治療寒熱往來、胸脅脹痛、月經(jīng)不調(diào)等癥，現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，柴胡還具有較好的保肝作用和抗腫瘤、抗癲癇、抗抑郁活性[2-3]。北柴胡作為傳統(tǒng)的大宗藥材，市場需求量巨大，僅東北每年市場供應(yīng)量高達(dá)千噸[4]，而北柴胡地上部分作為非傳統(tǒng)藥用部位，占全株植物總生物量的88.1%[5]，按此計算，每年東北三省丟棄浪費的北柴胡地上部分近萬噸，輻射全國北柴胡植物藥用資源浪費情況更加嚴(yán)重！通過文獻查閱可知，北柴胡地上部分的現(xiàn)代藥理學(xué)研究主要圍繞解熱保肝、抗炎、抗病毒和鎮(zhèn)痛[6]等藥理活性開展，而其化學(xué)成分的相關(guān)報道較少，為了進一步開發(fā)北柴胡植物資源，闡明其地上部分的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，故對北柴胡地上部分正丁醇層化學(xué)成分進行研究，通過多種色譜手段及波譜學(xué)方法從中分離鑒定出9個化合物。

1 儀器與材料

旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(EYELA公司)；AV-600型超導(dǎo)核磁共振儀(Bruker公司)；Q-TOF(ESI)高分辨質(zhì)譜儀(Waters公司)；中壓制備(布奇公司)；制備型高效液相色譜(島津公司)；分析型高效液相色譜(Waters公司)；x-Bridge C18分析柱5 μm，4.6 mm×150 mm(Waters公司)；Shim-pack GIST C185 μm，20 mm×250 mm(島津公司)；Sephadex LH-20(Pharmacia公司)；反相ODS(YMC公司)；柱色譜硅膠(200～300目)和薄層色譜硅膠(青島海洋化工廠)；色譜甲醇(默克公司)。

北柴胡地上部分藥材于2017年9月采自黑龍江省大慶市林甸地區(qū)。經(jīng)黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)藥用植物學(xué)教研室樊銳鋒副教授鑒定為傘形科植物北柴胡(BupleurumchineseDC.)的干燥地上部分，標(biāo)本(20170910)保存于黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)中藥化學(xué)教研室。

2 提取與分離

將干燥的北柴胡地上部分藥材(44.4 kg)適當(dāng)粉碎，以8倍量70%乙醇溶液回流提取3次，每次1 h，減壓濃縮得到浸膏(5.6 kg)。浸膏中加入適量蒸餾水，使之完全溶解分散，再分別使用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇(水飽和)進行萃取，其中得到正丁醇的萃取部位浸膏(0.6 kg)。取0.3 kg正丁醇萃取物經(jīng)硅膠柱色譜分離，以二氯甲烷-甲醇系統(tǒng)為流動相(100:0～0:100)進行梯度洗脫，得到11個流分(Fr.1～Fr.11)。化合物1在Fr.6中重結(jié)晶得到(12 mg)，F(xiàn)r.2～Fr.10經(jīng)ODS柱色譜，甲醇-水(1:9～1:0)梯度洗脫，化合物9在Fr.10中析出得到(8.0 mg)?；衔?～8通過結(jié)合Sephadex LH-20柱色譜，利用制備型HPLC通過分離得到。其中化合物2(10.1 mg)，化合物3(9.2 mg)和化合物4(6.0 mg)從Fr.2中分離得到，化合物5(14.6 mg)，化合物6(11.8 mg)和化合物7(7.1 mg)從Fr.3中分離得到，化合物8(1.5 mg)從Fr.4中分離得到。結(jié)構(gòu)式見圖1。

圖1 化合物結(jié)構(gòu)

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1:無色針晶。HR-ESI-MS m/z: 153.0763 [M+H]+，分子式為C5H12O5。1H-NMR (D2O, 600 MHz) δ: 3.80～3.84 (4H, m, H-1, H-5)，3.64-3.71 (3H, m, H-2, H-3, H-4)。13C-NMR (D2O, 150 MHz) δ: 72.2 (C-3)，72.1 (C-2, C-4)，62.3 (C-1, C-5)。上述數(shù)據(jù)與文獻[7]報道基本一致，故鑒定為核糖醇。

化合物2: 黃色油狀物。HR-ESI-MS m/z: 279.1595 [M+H]+，分子式為C16H22O4。1H-NMR (CD3OD, 600 MHz) δ: 7.72 (2H, dd, J = 5.7, 3.3 Hz, H-2, H-5)，7.61 (2H, dd, J = 5.7, 3.3 Hz, H-3, H-4)，4.29 (4H, t, J = 6.6Hz, H-8′, H-8″)，1.72 (4H, m, H-9, H-9′)，1.45 (4H, m, H-10, H-10′) ，0.97 (6H, t, J = 7.4Hz, H-11, H-11′)。13C-NMR (CD3OD, 150 MHz) δ: 132.4 (C-1, C-6)，129.9 (C-2, C-5)，133.6 (C-3, C-4)，169.3 (C-7, C-7′)，66.7 (C-8, C-8′)，31.7 (C-9, C-9′)，20.3 (C-10, C-10′)，14.0 (C-11, C-11′)。上述數(shù)據(jù)與文獻[8]報道基本一致，故鑒定為鄰苯二甲酸二丁酯。

化合物3: 無色帶光澤鱗狀物。HR-ESI-MS m/z: 257.2483 [M+H]+，分子式為C16H32O2。1H-NMR (CD3OD, 600 MHz) δ: 2.27 (2H, t, J = 7.4 Hz, H-2)，1.59 (2H, m, H-3)，1.29-1.32 (24H, m, H-4～H-15)，0.90 (3H, t, J = 6.9 Hz, H-16)。13C-NMR (CD3OD, 150 MHz) δ: 177.7 (C-1)，35.0 (C-2)，26.1 (C-3)，30.3-30.8 (C-4～C-13)，33.1 (C-14)，23.8 (C-15)，14.4 (C-16)。上述數(shù)據(jù)與文獻[9]報道基本一致，故鑒定為棕櫚酸。

化合物4: 無色固體。HR-ESI-MS m/z: 186.1131 [M+H]+，分子式為C9H15NO3。1H-NMR (CD3OD, 600 MHz) δ: 4.28 (1H, dd, J = 9, 4.4 Hz, H-5)，4.17 (2H, t, J = 6.6 Hz, H-7)，2.48 (1H, m, H-4a)，2.33 (2H, m, H-3)，2.14(1H, m, H-4b)，1.65 (2H, m, H-8)，1.40 (2H, m, H-9)，0.95 (3H, t, J = 7.4 Hz, H-10)。13C-NMR (CD3OD, 150 MHz) δ: 174.1 (C-2)，30.3 (C-3)，25.9 (C-4)，57.2 (C-5)，181.1 (C-6)，66.3 (C-7)，31.7 (C-8)，20.1 (C-9)，14.0 (C-10)。上述數(shù)據(jù)與文獻[10]報道基本一致，故鑒定為焦谷氨酸正丁酯。

化合物5: 無色蠟狀固體。HR-ESI-MS m/z: 249.1335 [M+H]+，分子式為C11H20O6。1H-NMR (CD3OD, 600 MHz) δ: 5.36 (1H, m, H-2)，4.32 (1H, dd, J = 11.8, 6.4 Hz, H-1a)，4.27 (1H, d, J=7.9 Hz, H-1′)，4.21 (1H, dd, J = 11.8, 7.7 Hz, H-1b)，3.87 (1H, dd, J = 12.0, 2.2 Hz, H-6′b)，3.67 (1H, dd, J = 12.0, 5.8 Hz, H-6′a)，3.27～3.35 (2H, m, H-3′, H-4′)，3.22 (1H, m, H-5′)，3.17 (1H, dd, J = 8.9, 8.0 Hz, H-2′)，1.75 (3H, s, H-4) ，1.70 (3H, s, H-5)。13C-NMR (CD3OD, 150 MHz) δ: 66.3 (C-1)，121.7 (C-2)，138.5 (C-3)，25.9 (C-4)，18.0 (C-5)，102.8 (C-1′)，75.0 (C-2′)，78.1 (C-3′)，71.7 (C-4′)，78.0 (C-5′)，62.8 (C-6′)。上述數(shù)據(jù)與文獻[11]報道基本一致，故鑒定為3-methyl-but-2-en-1-yl β-D-glucopyranoside。

化合物6: 白色粉末。HR-ESI-MS m/z: 251.1494 [M+H]+，分子式為C11H22O6。1H-NMR (CD3OD, 600 MHz) δ: 4.23 (1H, d, J = 7.9 Hz, H-1′)，3.94 (1H, dt, J = 9.6, 7.0 Hz, H-1a)，3.86 (1H, dd, J = 12.0, 2.2 Hz, H-6′a)，3.66 (1H, dd, J = 12.0, 5.3 Hz, H-6′b)，3.56 (1H, dt, J = 9.6, 7.0 Hz, H-1b)，3.25-3.35 (3H, m, H-3′, H-4′, H-5′)，3.17 (1H, dd, J = 9.1, 7.9 Hz, H-2′)，1.74 (1H, m, H-3) ，1.51 (1H, q, J = 7.0 Hz, H-2) ，0.92 (6H, dd, J = 6.7, 1.0 Hz, H-4, H-5)。13C-NMR (CD3OD, 150 MHz) δ: 69.3 (C-1)，39.6 (C-2)，26.0 (C-3)，23.0 (C-4)，23.0 (C-5)，104.4 (C-1′)，75.1 (C-2′)，78.1 (C-3′)，71.7 (C-4′)，77.9 (C-5′)，62.8 (C-6′)。上述數(shù)據(jù)與文獻[12]報道基本一致，故鑒定為3-methylbutan-1-ol β-D-glucopyranoside。

化合物7: 無色糖漿狀物質(zhì)。HR-ESI-MS m/z: 263.1495 [M+H]+，分子式為C12H22O6。1H-NMR (CD3OD, 600 MHz) δ: 5.44 (1H, m, H-4)，5.38(1H, m, H-3)，4.26 (1H, d, J = 7.9 Hz, H-1′)，3.87 (1H, o, H-1a)，3.85 (1H, o, H-6′a)，3.66 (1H, dd, J = 11.9, 5.4 Hz, H-6′b)，3.53 (1H, dt, J = 9.5, 7.4 Hz, H-1b)，3.24-3.36 (3H, m, H-3′, H-4′, H-5′)，3.17 (1H, dd, J = 9.1, 7.9 Hz, H-2′)，2.37 (2H, m, H-2) ，2.07 (2H, m, H-5)，0.96 (3H, t, J = 7.6 Hz, H-6)。13C-NMR (CD3OD, 150 MHz) δ: 70.4 (C-1)，28.8 (C-2)，125.8 (C-3)，134.5 (C-4)，21.5 (C-5)，14.6 (C-6)，104.3 (C-1′)，75.1 (C-2′)，78.1 (C-3′)，71.6 (C-4′)，78.0 (C-5′)，62.8 (C-6′)。上述數(shù)據(jù)與文獻[13]報道基本一致，故鑒定為(Z)-3-hexenyl-O-β-D-glucopyranoside。

化合物8: 白色粉末。HR-ESI-MS m/z: 186.0878 [M+H]+，分子式為C7H11N3O3。1H-NMR (CD3OD, 600 MHz) δ: 8.32 (1H, s, H-4)，8.18 (1H, s, H-2)，6.43 (1H, t, J = 6.4 Hz, H-1′)，4.58(1H, o, H-4′)4.07 (1H, d, J = 2.5 Hz, H-3′)，3.84 (1H, dd, J = 12.3, 2.7 Hz, H-5′a)，3.74 (1H, dd, J = 12.3, 3.2 Hz, H-5′b)，2.81 (1H, m, H-2′a)，2.41 (1H, m, H-2′b)。13C-NMR (CD3OD, 150 MHz) δ: 153.5 (C-2)，141.6(C-4)，89.9 (C-1′)，41.5 (C-2′)， 73.1(C-3′)，87.2 (C-4′)，63.6 (C-5′)。上述數(shù)據(jù)與文獻[14]報道基本一致，鑒定為1-(2′-deoxy-β-D-erythro- pentofuranosyl)-1H-1,2,4-triazone。

化合物9: 白色無定形粉末。HR-ESI-MS m/z: 217.0977 [M+H]+，分子式為C12H12N2O2。1H-NMR (DMSO, 600 MHz) δ: 10.91(1H, s, 1-NH)，7.44 (1H, d, J = 7.9 Hz, H-4)，7.32 (1H, d, J = 7.9 Hz, H-7)，7.06 (1H, t, J = 7.5 Hz, H-6)，6.99 (1H, t, J = 7.5 Hz, H-5)，4.23 (1H, d, J = 15.4 Hz, H-8b)，4.16 (1H, d, J = 15.4 Hz, H-8a)，3.62 (1H, dd, J = 10.6, 5.0 Hz, H-11)，3.13 (1H, dd, J = 16.1, 5.0 Hz, H-12b)，2.81 (1H, dd, J = 16.1, 10.6 Hz, H-12a)。13C-NMR (DMSO, 150 MHz) δ: 126.2 (C-2)，106.5 (C-3)，127.7 (C-3a)，117.8 (C-4)，118.8 (C-5)，121.3 (C-6)，111.2 (C-7)，136.2 (C-7a)，40.4 (C-8)，169.4 (C-10)，56.4 (C-11)，22.8 (C-12)。上述數(shù)據(jù)與文獻[15]報道基本一致，故鑒定為anoectochine。

4 結(jié)果與討論

本研究對北柴胡地上部分正丁醇層展開了系統(tǒng)化學(xué)成分分離，共得到9個化合物，其中化合物4，8，9為首次從傘形科中分離得到，化合物5，6，7為首次從該植物中分離得到。北柴胡作為傳統(tǒng)中藥，市場需求量大，野生資源不斷減少，但其地上部分沒有得到充分的開發(fā)利用，柴胡植物資源遭到嚴(yán)重浪費。本文進一步豐富了北柴胡的化學(xué)成分，為北柴胡化學(xué)成分的研究提供參考，同時為進一步開發(fā)非藥用部位的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及藥用植物資源提供科學(xué)依據(jù)。