姜仁禹，梁麗麗，馬思提，梁偉玲

（山東中醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校，山東 煙臺(tái) 264100）

四季青又被稱之為紅冬青，除此之外，它還有很多別稱，如油葉樹等，屬于冬青科植物，主要生長在長江流域以及秦嶺南坡等地域。四季青在我國多被用作觀察樹種，另外，由于其樹木質(zhì)地堅(jiān)韌，因此可用于制作雕刻品、工具柄等用，除此之外，它還有清熱解毒、涼血止血和消腫去淤等功效，能夠有效治療肺熱咳嗽、濕疹、瘡瘍、風(fēng)熱感冒和急性咽喉炎等，是一種實(shí)用價(jià)值較高的植物[1]。在四季青中，原兒茶酸和原兒茶醛兩種酚酸類成分為主要的抗炎和抗菌活性成分。據(jù)調(diào)查，我國對(duì)于四季青的提取工藝研究資料較為匱乏，因此本文對(duì)其指標(biāo)成分中的原兒茶酸以及原兒茶醛，通過乙醇提取方式進(jìn)行研究，同時(shí)使用大孔樹脂對(duì)其進(jìn)行工藝優(yōu)化，如下文所述。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

本次實(shí)驗(yàn)所用儀器選取APS-80-16plus高效液相色譜儀（迪慶開發(fā)區(qū)三江生物開發(fā)有限公司）、TG-332A微量分析天平（上海精科天美-上海天平儀器廠）、FA-2004實(shí)驗(yàn)室電子分析天平（上海良平儀器儀表有限公司）以及SG7200HDT超聲波清洗器（杭州億捷科技有限公司）。

1.2 試劑與樣品

本次實(shí)驗(yàn)所選取對(duì)照品為原兒茶酸以及原兒茶醛，兩種對(duì)照品均從中國藥品生物制品檢定所購買，其中雙蒸水為實(shí)驗(yàn)室自制，甲酸為分析純，乙腈為色譜純。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 實(shí)驗(yàn)方法

將原兒茶酸與原兒茶醛制作成曲線方程，其中橫坐標(biāo)X為二者濃度，縱坐標(biāo)Y為二者鋒面積所得積分值，最后得出回歸方程式。經(jīng)計(jì)算后，原兒茶酸含量在范圍內(nèi)線性關(guān)系較好，原兒茶醛含量在范圍內(nèi)線性關(guān)系較好。

2.2 不同提取工藝比較

本次研究評(píng)價(jià)指標(biāo)為原兒茶酸與原兒茶醇含量中的提取率，不同提取工藝比較方法分別為水煎提取方法與乙醇回流提取方法。

（1）乙醇回流提取方法：選取200單位的四季青藥材放置于燒瓶中，燒瓶容量為3000 mL（實(shí)驗(yàn)所用燒瓶為圓底），隨后使用30與70的乙醇經(jīng)過1600 mL回流（回流微沸即可）提取60 min，用紗布進(jìn)行過濾，過濾所得藥物殘?jiān)柙俳?jīng)過1200 mL溶劑進(jìn)行回流（同樣微沸）提取30 min，用紗布進(jìn)行濾過，最后將兩次所得濾液進(jìn)行合并，即得。

（2）水煎提取法：首先選取200單位的四季青藥材置于燒杯中，燒杯容量為1000 mL，隨后向燒杯中加入500 mL純凈水，使四季青在燒杯中浸泡30 min，然后對(duì)其進(jìn)行煮沸操作，待其完全沸騰后需保溫60 min，使用紗布進(jìn)行過濾，過濾所得藥物殘?jiān)枋褂?500 mL純凈水再次進(jìn)行煮沸操作，操作過程如上述一致，最后將兩次所得的濾過液體進(jìn)行合并，即得。

2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

將上文所述中兩種提取方法的供試品進(jìn)行相應(yīng)的稀釋后所得結(jié)果發(fā)現(xiàn)，原兒茶酸中乙醇70提取率最高（99.2%），詳見表1。

表1 不同提取方法中四季青原兒茶酸提取率對(duì)比（n，%）

原兒茶醛提取中，以乙醇70提取率為最高（91.6%），詳見表2。

表2 不同提取方法中四季青原兒茶醛提取率對(duì)比（n，%）

2.4 大孔樹脂純化工藝應(yīng)用

作為一種結(jié)構(gòu)為大孔的有機(jī)高分子共聚體，大孔吸附樹脂能夠作為吸附劑，憑借其具有的不同成分進(jìn)行選擇性的吸附和篩選操作，以實(shí)現(xiàn)對(duì)某一類化合物的分離純化?，F(xiàn)階段，在我國市面上較為常見的大孔吸附樹脂有十多種類型，每一種大孔吸附樹脂的適用范圍也不盡相同，本文研究對(duì)NKA—8極性樹脂對(duì)四季青酚酸類成分的洗脫效果進(jìn)行研究。

在選擇NKA—8乙醇洗脫液的濃度時(shí)，先將容量為50 mL的NKA—8樹脂進(jìn)行預(yù)處理后，置于吸附柱，同時(shí)在樹脂床上倒入12.5 mL四季青提取液，然后用蒸餾水對(duì)樹脂床中含有的非吸附性雜質(zhì)進(jìn)行清洗，以30、60、90的乙醇作為解吸劑，然后計(jì)算和檢測洗脫液中的藥物濃度和洗脫量。結(jié)果顯示，濃度為60的乙醇洗脫液洗脫效果更好。詳細(xì)情況見表3。

表3 NKA—8乙醇洗脫液濃度的選擇

3 討 論

四季青作為一種中藥，有清熱解毒、活血化瘀、消腫止痛等功效，其功效的實(shí)現(xiàn)與發(fā)揮主要依賴原兒茶酸、茶醛等酚酸類成分。四季青性寒。味道苦澀，能夠用于治療上呼吸道感染、慢性支氣管炎以及慢性哮喘等，由于這類病情常見癥狀為咳嗽、咳痰等，在治療上需進(jìn)行鎮(zhèn)咳祛痰方式，而四季青中所含的原兒茶酸、原兒茶醛等酚酸類成分能夠清熱化痰，達(dá)到宣肺止咳的作用[2-3]。

現(xiàn)階段，在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中，常用水煎提取法來實(shí)現(xiàn)對(duì)四季青酚酸類成分的提取，因而本文即對(duì)四季青提取純化工藝進(jìn)行了分析，以期有針對(duì)性的改進(jìn)工藝，去除四季青中含有的雜質(zhì)，實(shí)現(xiàn)優(yōu)秀的藥物制劑目標(biāo)。

本次研究通過水煎法與乙醇回流法對(duì)四季青酚酸類成分進(jìn)行提取后發(fā)現(xiàn)，原兒茶酸中以乙醇70提取率最高；原兒茶醛中以乙醇70提取率最高。應(yīng)用大孔樹脂純化工藝時(shí)，選擇濃度為60的NKA—8乙醇洗脫液效果更理想。

綜上所述，在進(jìn)行四季青酚酸類成分提取中，乙醇回流提取和大孔樹脂純化工藝均能夠有效去除雜質(zhì)，同時(shí)最大化保留酚酸類成分，因此可基于實(shí)際情況，選擇適當(dāng)?shù)墓に噷?shí)現(xiàn)對(duì)四季青酚酸類成分的提取。