聞亞美，邵欣欣，丁亞通，孔維麗，馬麗娜，張 輝，黨 帥，黃桃閣，郭艷春

（1.周口市農(nóng)業(yè)科學(xué)院 河南周口 466000； 2.河南省農(nóng)藥檢定站 鄭州 450002； 3.河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 鄭州 450002）

目前，發(fā)酵料栽培是平菇栽培常用的生產(chǎn)模式，它是指培養(yǎng)料堆積發(fā)酵后，進(jìn)行食用菌栽培的方法[1]，因其不需要高溫高壓滅菌，不需要凈化接菌，操作過程簡單易學(xué)，生產(chǎn)中被大面積推廣應(yīng)用。1972年，平菇代料栽培首先在河南取得成功。1982 年安陽市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所研發(fā)的“塑料袋堆積法栽培平菇”試驗(yàn)成功，更是讓發(fā)酵料栽培平菇發(fā)展勢頭強(qiáng)勁，并很快在全國普及推廣[2-3]。

近年來，發(fā)酵料栽培推廣到山東、河北、寧夏、內(nèi)蒙古、新疆、安徽等6 個(gè)省，在國外也有所發(fā)展。由于發(fā)酵料栽培沒有經(jīng)過高溫高壓滅菌這個(gè)環(huán)節(jié)，一般生產(chǎn)上會使用一定劑量的殺菌殺蟲劑來保證生產(chǎn)的順利進(jìn)行。目前，食用菌病害防治專用藥劑很少，大都采用蔬菜和主要農(nóng)作物藥劑，濫用現(xiàn)象十分嚴(yán)重，常常造成外貿(mào)出口食用菌農(nóng)藥殘留超標(biāo)現(xiàn)象[4]。張金玲等[5]對2015—2018 年紅河州監(jiān)測的18 種農(nóng)產(chǎn)品殺菌劑殘留污染水平進(jìn)行了報(bào)道，發(fā)現(xiàn)食用菌中殺菌劑檢出率高。在藥品流通市場，相關(guān)管理部門具體管束力量也略顯薄弱。早在2008 年，管道平等[6]就呼吁相關(guān)管理部門應(yīng)根據(jù)我國食用菌生產(chǎn)、加工和貿(mào)易的實(shí)際情況，對農(nóng)藥進(jìn)行歸類，進(jìn)一步完善和修訂我國食用菌安全質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。截至2018 年，我國在食用菌上僅登記了11 個(gè)產(chǎn)品，其中殺菌劑產(chǎn)品10 個(gè)，殺蟲劑產(chǎn)品僅有1 個(gè)[7]。因此，解決食用菌類登記農(nóng)藥品種嚴(yán)重短缺問題，篩選出高效、安全的藥劑是十分緊迫的?；诖?，筆者對市場流通并暢銷的7 種殺菌劑進(jìn)行藥效對比，并對施藥條件下子實(shí)體中農(nóng)藥殘留進(jìn)行檢測，開展安全性評價(jià)，以期為平菇發(fā)酵料生產(chǎn)用藥范圍及用藥量提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試品種 平菇為‘德豐5 號’，周口市農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究中心保藏。

1.1.2 供試培養(yǎng)料配方 棉籽殼92%，麥麩6%，石灰2%，含水量65%。

1.1.3 試驗(yàn)儀器與試劑 主要儀器：液質(zhì)聯(lián)用儀（安捷倫6410，2009），氣相色譜儀（瓦里安cp3800，2004）。試驗(yàn)藥品：所用7 種殺菌劑均為有生產(chǎn)批號的市售產(chǎn)品，具體如表1。

表1 供試用殺菌劑

1.2 方法

1.2.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 平菇生產(chǎn)試驗(yàn)于2019 年2 月28日至5 月26 日進(jìn)行，子實(shí)體中農(nóng)藥殘留含量測定于2019 年6 月進(jìn)行。其中2 月28 日至3 月15 日在周口市農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究中心進(jìn)行原料預(yù)濕、發(fā)酵、裝袋及接種工作，3 月16 日至5 月26 日在西華縣勤立食用菌專業(yè)合作社進(jìn)行發(fā)菌、出菇等工作。發(fā)菌期間棚內(nèi)溫度在15～25 ℃，濕度在45%～70%，出菇期間棚內(nèi)溫度在24～30 ℃，濕度在48%～72%。

試驗(yàn)采用隨機(jī)區(qū)組排列。每個(gè)藥劑為1 個(gè)處理，每個(gè)處理3 次重復(fù)，1 次重復(fù)60 袋，大棚入口設(shè)置保護(hù)行。

1.2.2 生產(chǎn)模式 本次試驗(yàn)分別監(jiān)測以棉籽殼為主料的平菇發(fā)酵料栽培模式下不同殺菌劑的防治效果。

1.2.3 用藥劑量 按照常規(guī)生產(chǎn)程序進(jìn)行生產(chǎn)，在裝袋前加入不同濃度的殺菌劑，以等量清水作為對照。具體用藥劑量見表1。

1.2.4 生產(chǎn)過程 1）建堆發(fā)酵：按照培養(yǎng)料配方準(zhǔn)備原材料，原材料預(yù)濕后拌勻堆成高1.0～1.1 m 的料堆進(jìn)行發(fā)酵，料溫升至50 ℃后開始翻堆，1～2 d 翻堆1 次，共發(fā)酵7 d。當(dāng)料溫達(dá)到65 ℃保持24 h 以上，翻堆1 次，當(dāng)料溫再次達(dá)到65 ℃保持24 h 以上發(fā)酵即可結(jié)束。2）裝袋、接種、發(fā)菌與出菇：培養(yǎng)料發(fā)酵完成后，按藥劑所使用的劑量，將藥劑拌入發(fā)酵好的培養(yǎng)料中，混合均勻后，選用20 cm×45 cm 聚乙烯袋裝袋，鋪3 層菌種接種。

將接種好的菌袋移入西華縣勤立食用菌種植專業(yè)合作社大棚進(jìn)行發(fā)菌，期間監(jiān)測菌絲生長速度及菌袋污染率，記錄氣象資料。

待一潮菇子實(shí)體生長至采收期，取樣，-20 ℃保存，同批次送檢。

1.2.5 數(shù)據(jù)采集與測定方法 菌絲生長速度統(tǒng)計(jì)：采用7 d 計(jì)量法，統(tǒng)計(jì)接種后第5～12 d 的菌絲生長長度，計(jì)算出7 d 內(nèi)的平均生長速度，并進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)。

菌袋污染率統(tǒng)計(jì)：記錄整個(gè)發(fā)菌過程中染菌袋數(shù)，計(jì)算每個(gè)處理中菌袋的污染率，并進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)。菌袋污染率/%=染菌袋數(shù)/總袋數(shù)×100。

平菇產(chǎn)量統(tǒng)計(jì)：一潮菇采收后，記錄一潮菇的平菇鮮菇產(chǎn)量，并進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)。

子實(shí)體農(nóng)藥殘留量測定：樣品送至河南省農(nóng)藥檢定站分析殘留科，參照GB 23200.113—2018《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)植物源性食品中208 種農(nóng)藥及其代謝物殘留量的測定氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法》[8]，根據(jù)實(shí)驗(yàn)室實(shí)際條件，測定其農(nóng)藥殘留量。

1.3 數(shù)據(jù)處理與分析

采用Excle 2010 進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，SPSS 17.0 進(jìn)行差異性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 菌絲生長速度統(tǒng)計(jì)

根據(jù)接種后7 d 內(nèi)的平均生長速度，對比不同藥劑處理對菌絲生長速度的影響（表2）。

表2 顯示，80%多菌靈可濕性粉劑用藥處理下，平菇菌絲生長速度為0.38 cm·d-1，顯著高于對照及其他用藥處理下菌絲生長速度；50%氯溴異氰尿酸可溶粉劑用藥處理下，平菇菌絲生長速度與對照相比，差異達(dá)顯著水平；20%二氯異氰尿酸鈉可溶粉劑、50%咪鮮胺錳鹽可濕性粉劑、450 g·L-1咪鮮胺水乳劑、50%腐霉利可濕性粉劑用藥處理下，平菇菌絲生長速度與對照相比，無顯著差異；75%百菌清可濕性粉劑用藥處理下，接入的平菇菌種菌絲不能正常生長，有減弱趨勢，這里不再與其他處理對比。即不同藥劑在試驗(yàn)濃度下，75%百菌清可濕性粉劑有抑制甚至殺滅平菇菌絲的作用，其他6 種藥劑對菌絲生長均沒有抑制作用，均可列為平菇發(fā)酵料生產(chǎn)可用備選藥品。

2.2 菌袋污染率統(tǒng)計(jì)

從表2 中菌袋污染情況可以看出：50%咪鮮胺錳鹽可濕性粉劑、450 g·L-1咪鮮胺水乳劑、50%腐霉利可濕性粉劑用藥處理下，菌袋污染率為0，即沒有發(fā)現(xiàn)綠霉、木霉感染，顯著低于對照及其他處理下菌袋污染率。50%氯溴異氰尿酸可溶粉劑、80%多菌靈可濕性粉劑用藥處理與對照相比差異顯著；20%二氯異氰尿酸鈉可溶粉劑用藥處理與對照相比，沒有顯著差異；75%百菌清可濕性粉劑用藥處理下，菌袋污染率過高，與其他處理數(shù)據(jù)差異較大，為保證數(shù)據(jù)分析結(jié)果的準(zhǔn)確性，這里不再將其與其他處理做生物學(xué)統(tǒng)計(jì)分析。綜上，從發(fā)菌期間抑雜菌（綠霉、木霉等）效果來看，不同藥劑在試驗(yàn)濃度下，50%咪鮮胺錳鹽可濕性粉劑、450 g·L-1咪鮮胺水乳劑、50%腐霉利可濕性粉劑、50%氯溴異氰尿酸可溶粉劑、80%多菌靈可濕性粉劑均可作為平菇發(fā)酵料生產(chǎn)可用備選藥品，50%咪鮮胺錳鹽可濕性粉劑、450 g·L-1咪鮮胺水乳劑、50%腐霉利可濕性粉劑效果較好。

2.3 平菇產(chǎn)量統(tǒng)計(jì)

從一潮菇產(chǎn)量來說（表2），50%氯溴異氰尿酸可溶粉劑、50%咪鮮胺錳鹽可濕性粉劑、450 g·L-1咪鮮胺水乳劑、50%腐霉利可濕性粉劑、80%多菌靈可濕性粉劑用藥處理下產(chǎn)量要顯著高于對照，20%二氯異氰尿酸鈉可溶粉劑與對照相比差異不顯著。50%咪鮮胺錳鹽可濕性粉劑用藥處理下產(chǎn)量顯著高于50%氯溴異氰尿酸可溶粉劑。此外，75%百菌清用藥處理下，平菇菌絲萌發(fā)較差，未能產(chǎn)出子實(shí)體，無法與其他藥劑進(jìn)行對比（下同）。綜上，從子實(shí)體產(chǎn)量來說，不同藥劑在試驗(yàn)濃度下，50%氯溴異氰尿酸可溶粉劑、50%咪鮮胺錳鹽可濕性粉劑、450 g·L-1咪鮮胺水乳劑、50%腐霉利可濕性粉劑、80%多菌靈可濕性粉劑可列為平菇發(fā)酵料生產(chǎn)促增產(chǎn)備選藥品。

2.4 出菇期病害統(tǒng)計(jì)

觀察出菇期間病害的發(fā)生情況，并做好統(tǒng)計(jì)。發(fā)酵料生產(chǎn)出一潮菇時(shí)，子實(shí)體、菌袋均沒有發(fā)現(xiàn)肉眼可見病害發(fā)生，除75%百菌清外，其余6 種藥品藥效沒有明顯差別。

2.5 子實(shí)體中農(nóng)藥殘留量測定

表2 顯示，50%腐霉利可濕性粉劑用藥處理下，一潮菇子實(shí)體中腐霉利農(nóng)殘含量為0.193 mg·kg-1，80%多菌靈可濕性粉劑用藥處理下，一潮菇子實(shí)體中多菌靈農(nóng)殘含量為0.004 9 mg·kg-1，其余編號為2～5 的4 種藥品處理下一潮菇中均未檢出農(nóng)藥殘留。從食品安全角度來說，在文中用藥劑量下，50%腐霉利可濕性粉劑、80%多菌靈可濕性粉劑存在安全生產(chǎn)隱患，暫不能被列為平菇發(fā)酵料生產(chǎn)安全增產(chǎn)藥品，而75%百菌清，在試驗(yàn)劑量下，嚴(yán)重影響菌袋正常發(fā)菌，也不能被列為平菇發(fā)酵料生產(chǎn)安全增產(chǎn)藥品。

表2 殺菌劑拌料平菇發(fā)酵料生產(chǎn)藥劑篩選試驗(yàn)統(tǒng)計(jì)

3 討論與結(jié)論

目前我國的食用菌藥品市場還略顯混亂，一些沒有生產(chǎn)批號的藥品確實(shí)存在流通現(xiàn)象，這其中就存在一定的安全隱患。而作為與食品安全息息相關(guān)的食用菌產(chǎn)業(yè)來說，判斷藥品優(yōu)劣的標(biāo)準(zhǔn)，安全性是最重要的考量指標(biāo)。據(jù)史琦云等[9]報(bào)道，1 kg 平菇干品中，蛋白質(zhì)含量為194.3 g、粗脂肪17.1 g、粗纖維82.1 g，是一種高蛋白低脂肪食品，可作為“三高”人群的優(yōu)選食品，因此對其安全性要求更高。

在藥品登記系統(tǒng)，咪鮮胺錳鹽屬于登記較早的食用菌殺菌劑，2010 年就有企業(yè)登記用于平菇生產(chǎn)[10]。現(xiàn)有報(bào)道對文中所試其他藥劑也有體現(xiàn)。文中腐霉利按照0.1%拌料平菇培養(yǎng)料，一潮菇中存在腐霉利殘留，殘留量為0.193 mg·kg-1。劉洋[11]、毛春玲等[12]也做過此類研究，他們將腐霉利按照0.5%拌料加入平菇培養(yǎng)料，收獲時(shí)期子實(shí)體中腐霉利的殘留量小于0.001 mg·kg-1，后續(xù)試驗(yàn)可著重腐霉利的檢出方法及用藥劑量進(jìn)行優(yōu)化。文中使用1.25 g·kg-1多菌靈拌料栽培，一潮菇子實(shí)體中農(nóng)殘含量為0.004 9 mg·kg-1，這與魏茂瓊等[13]得到的結(jié)果一致，即培養(yǎng)料中的多菌靈可遷移到平菇子實(shí)體中。因此，在多菌靈用于平菇生產(chǎn)之前，還要細(xì)化其用藥濃度，降低食品安全風(fēng)險(xiǎn)。文中1.5 g·kg-1百菌清拌料栽培，平菇菌絲基本不萌發(fā)，沒有子實(shí)體產(chǎn)生。這點(diǎn)與李晶等[14]、李冠霖等[15]得出的結(jié)果一致，說明在實(shí)際生產(chǎn)中應(yīng)避開此藥劑的高濃度用藥。后續(xù)試驗(yàn)可降低百菌清用藥濃度，進(jìn)行生產(chǎn)實(shí)測。

我國GB 2763—2016《食品中農(nóng)藥最大殘留限量》[16]標(biāo)準(zhǔn)限值與歐盟等其他標(biāo)準(zhǔn)[17]相比有較大差距。實(shí)際生產(chǎn)中，施用單一藥劑可能合乎標(biāo)準(zhǔn)，但不同藥劑總量堆積達(dá)到一定數(shù)值時(shí)，是否存在食品安全風(fēng)險(xiǎn)還不能完全確定。以文中所試藥品腐霉利為例，農(nóng)殘檢測顯示一潮菇中腐霉利含量為0.193 mg·kg-1，低于GB 2763—2016 中對蘑菇類（鮮）最大殘留限量5 mg·kg-1，但對于消費(fèi)者來說，食用的這些食品是否有其他類型的農(nóng)藥殘留，各種農(nóng)藥之間是否會有協(xié)同甚至促進(jìn)效果，是否會出現(xiàn)農(nóng)藥堆積問題，最終是否會影響人類身體健康，這些都沒有完全否定的答案。因此，對于存在農(nóng)藥殘留問題的藥品，不管殘留量與我國現(xiàn)存國標(biāo)相比差距多少，這類藥品在列入安全可用藥品之前，應(yīng)細(xì)化試驗(yàn)濃度的設(shè)定，確保食品安全。

筆者對7 種市場流通在售藥品、且占有一定市場份額的平菇發(fā)酵料生產(chǎn)拌料用殺菌劑藥效進(jìn)行了藥效對比并對其安全性進(jìn)行了評價(jià)，綜合不同用藥處理下菌絲生長速度、菌袋污染率、一潮菇產(chǎn)量、出菇期子實(shí)體和菌袋病害發(fā)生情況以及一潮菇中農(nóng)藥殘留量等生產(chǎn)指標(biāo)后認(rèn)為，50%氯溴異氰尿酸可溶粉劑、50%咪鮮胺錳鹽可濕性粉劑、450 g·L-1咪鮮胺水乳劑表現(xiàn)較好，且無農(nóng)藥殘留，可列為平菇發(fā)酵料生產(chǎn)安全增產(chǎn)藥品。