林丹，王代友

（廣西醫(yī)科大學(xué)附屬口腔醫(yī)院 1.綜合一門診，2.口腔額面外科，廣西 南寧 530021）

口腔癌是一種常見的惡性腫瘤，其發(fā)病率約占全身惡性腫瘤的3%。口腔鱗狀細(xì)胞癌 （oral squamous cell carcinoma，OSCC） 占口腔癌的90%，其病死率排世界癌癥病死率的第6位[1]，早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療是提高OSCC 患者療效最有效的手段。目前針對(duì)OSCC的診治，通過采用基因組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)等分子生物學(xué)技術(shù)篩選出了大量生物標(biāo)志物，已經(jīng)有上市的以生物標(biāo)志物的為靶點(diǎn)的靶向治療藥物，以及潛在作為治療靶點(diǎn)的生物標(biāo)志物研究方興未艾[2]。

MRN復(fù)合體包括MRE11、RAD50、NBS1 3種蛋白質(zhì)，其在DNA 復(fù)制、細(xì)胞周期調(diào)控、DNA 損傷信號(hào)感應(yīng)、維持基因組穩(wěn)定等過程中有關(guān)鍵的作用。近來研究證實(shí)：MRN復(fù)合體與腫瘤的惡性生物學(xué)行為有關(guān)[3]，可能參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展，甚至與放射治療的反應(yīng)性有關(guān)[4]。作為OSCC 潛在生物標(biāo)志物，目前研究主要集中在抑制MRN 對(duì)腫瘤細(xì)胞放射敏感性的影響上[5]。但MRN復(fù)合體的MRE11、RAD50、NBS1 3種蛋白質(zhì)在OSCC 中的表達(dá)未見系統(tǒng)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)主要研究MRN復(fù)合體各亞基單位與OSCC 臨床病理特征的關(guān)系，進(jìn)而為OSCC的治療提供參考。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取2016年1月—2017年6月廣西醫(yī)科大學(xué)附屬口腔醫(yī)院住院治療的OSCC 患者50例為觀察組。所有患者行手術(shù)治療，并經(jīng)常規(guī)病理切片確診，術(shù)前未接受放化療。獲取患者臨床資料，包括年齡、性別、民族、家族病史、治療用藥情況、病理分級(jí)和轉(zhuǎn)移情況。其中，男性28例，女性22例；年齡38～67歲，平均 （58.8±6.7） 歲；另選擇50例同期本院口腔疾病患者作為對(duì)照組，其組織來源于術(shù)中距離腫瘤邊緣＞2 cm的口腔黏膜組織，以及因良性疾病 （口腔扁平苔蘚、口腔白斑病、口腔潰瘍、盤狀紅斑） 行病理檢查的口腔黏膜組織。其中，男性26例，女性24例；平均年齡 （57.4±7.5） 歲。兩組的性別構(gòu)成比、年齡比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＞0.05）。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有受試對(duì)象簽署知情同意書。

1.2 研究方法

采用免疫組織化學(xué)SP法檢測組織中MRE11、RAD50、NBS1 3種蛋白的表達(dá)。嚴(yán)格按照試劑盒配套說明書進(jìn)行操作，經(jīng)脫蠟-修復(fù)(兔抗人MRE11、RAD50、NBS1 多克隆抗體購自北京博奧森生物技術(shù)有限公司），陰性對(duì)照使用PBS緩沖液。結(jié)果判定采用雙評(píng)分半定量法評(píng)價(jià)[6]，分為著色強(qiáng)度評(píng)分 （0分：未著色，1分：淡黃色，2分：棕黃色，3分：棕褐色）和染色評(píng)分[400倍顯微鏡下隨機(jī)選取5個(gè)視野，記數(shù)陽性細(xì)胞所占比例 （陽性率）。1分：≤25%，2分：＞25%～50%，3分：＞50%～75%，4分：＞75%～100%]，最終評(píng)分取著色強(qiáng)度評(píng)分×染色評(píng)分，≥6分為陽性，＜6分為陰性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 22.0 統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差 （±s）表示，比較用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以例 （%）表示，比較用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 MRE11、RAD50及NBS1免疫組織化學(xué)染色結(jié)果

MRE11、RAD50和NBS1陽性表達(dá)呈棕黃色，主要位于胞核內(nèi)，部分位于胞漿，在正常黏膜組織中呈弱陽性反應(yīng)。見圖1。

2.2 兩組MRE11、RAD50及NBS1表達(dá)比較

兩組MRE11、RAD50及NBS1陽性表達(dá)率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05），觀察組MRE11、RAD50陽性表達(dá)率低于對(duì)照組；觀察組NBS1陽性表達(dá)率高于對(duì)照組。見表1。

2.3 MRE11、RAD50和NBS1的表達(dá)與OSCC患者臨床病理特征的關(guān)系

圖1 MRE11、RAD50、NBS1在組織中的表達(dá) （SP法×400）

表1 兩組患者M(jìn)RE11、RAD50及NBS1陽性表達(dá)率的比較 [n=50，例 （%） ]

觀察組NBS1的陽性表達(dá)率在不同OSCC的組織分型、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期中比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05）。NBS1在低分化組 （76.2%） 、中分化組 （64.7%） 的陽性表達(dá)率高于高分化組 （25.0%） （P＜0.05） ；NBS1在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的陽性表達(dá)率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者 （P＜0.05）。NBS1在Ⅲ、Ⅳ期 （81.8%） 的患者的陽性表達(dá)率高于I、Ⅱ期患者 （42.9%） （P＜0.05）。MRE11和RAD50的陽性表達(dá)率在性別、年齡、分化程度、臨床分期、腫瘤大小及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移間比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＞0.05）。見表2。

表2 觀察組不同臨床特征間MRE11、RAD50和NBS1的陽性表達(dá)率比較例 （%）

續(xù)表2

3 討論

有研究表明NBS1蛋白水平的降低和升高均可引起癌變[7]。在腫瘤患者中，NBS1的70 kD C端片段的數(shù)量與癌癥發(fā)生相關(guān)，與70 kD NBS1表達(dá)水平高的患者比較，70 kD NBS1表達(dá)水平低的患者C端片段的數(shù)量增加，并且類淋巴母細(xì)胞系易發(fā)展成癌細(xì)胞[8]。一項(xiàng)研究篩選29例非小細(xì)胞肺癌，13例肝細(xì)胞癌和18例非小細(xì)胞肺癌及10個(gè)食管癌樣品，顯示NBS1的表達(dá)與相應(yīng)的正常組織比較升高[9]。NBS1在某些類型腫瘤中的過度表達(dá)是晚期惡性腫瘤預(yù)后差的標(biāo)志物。在高NBS1表達(dá)患者標(biāo)本中觀察到細(xì)胞質(zhì)染色隨著NBS1 水平的升高而加深[10]。本研究在OSCC 中檢測到NBS1陽性表達(dá)率高于對(duì)照組，也提示NBS1 可能與腫瘤的發(fā)生有關(guān)。且發(fā)現(xiàn)NBS1的陽性表達(dá)率與腫瘤的臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和分化程度有關(guān)，表明NBS1的表達(dá)可能與較差的臨床預(yù)后有關(guān)。

與NBS1相反，RAD50過表達(dá)導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞壞死和凋亡。研究結(jié)果顯示，有RAD50基因表達(dá)的腫瘤血管更少，因此RAD50被認(rèn)為是抑制腫瘤生長的重要靶點(diǎn)[11]。而MRE11在腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)研究較少，但與RAD50類似，MRE11在腫瘤中 （卵巢癌） 的表達(dá)較正常組織減少[12]。本研究發(fā)現(xiàn)，在OSCC 中RAD50與MRE11陽性表達(dá)率低于對(duì)照組，提示RAD50與MRE11可能對(duì)OSCC的發(fā)生起抑制作用。但本研究未發(fā)現(xiàn)RAD50與MRE11表達(dá)與腫瘤臨床分期及分化程度等臨床特征有關(guān)。

綜上所述，MRE11、RAD50和NBS1表達(dá)在OSCC組織中存在異常。NBS1與OSCC分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期有關(guān)。