楊聯(lián)偉，張 莉

（重慶市北碚區(qū)疾病預(yù)防與控制中心，重慶 400700）

人感染高致病性禽流感是由人類感染禽流感病毒（avian influenza virus，AIV）所引起的人禽共患傳染病，自1997年在香港發(fā)現(xiàn)人感染禽流感之后，此病癥引起全世界衛(wèi)生組織的高度關(guān)注。有文獻(xiàn)報道，人感染禽流感主要是由于接觸了感染病毒的禽鳥及其分泌物和排泄物。因此，禽類養(yǎng)殖、交易、宰殺等涉禽職業(yè)，以及涉禽環(huán)境都被認(rèn)為是人感染禽流感病毒的危險因素。2017年重慶市部分區(qū)縣發(fā)現(xiàn)人感染禽流感H7N9病例，按應(yīng)急工作要求，參照《職業(yè)暴露人群血清學(xué)和環(huán)境高致病性禽流感監(jiān)測方案》（2011版），2018～2019年對北碚區(qū)活禽市場外環(huán)境中禽流感病毒及其亞型進(jìn)行監(jiān)測，檢測結(jié)果報告如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本采集

在北碚區(qū)城鄉(xiāng)活禽市場采集三類外環(huán)境標(biāo)本（禽糞、籠具擦拭子、案板擦拭子），所有標(biāo)本操作過程（采集、處理、運輸）嚴(yán)格按照《職業(yè)暴露人群血清學(xué)和環(huán)境高致病性禽流感監(jiān)測方案》（2011版）進(jìn)行。

1.2 標(biāo)本檢測

從采集的外環(huán)境標(biāo)本中提取病毒RNA后，以實時熒光定量PCR法同時檢測甲型禽流感病毒核酸及H5、H7、H9亞型，嚴(yán)格按試劑盒的操作說明進(jìn)行體系配置、擴增和結(jié)果判定。

1.3 檢測方法及儀器

主要病毒核酸檢測試劑和儀器RNA提取試劑盒由江蘇碩世和廣州達(dá)安生物科技股份有限公司生產(chǎn)。主要檢測儀器設(shè)備為杭州安杰思AFD4800實時熒光定量PCR儀、低溫高速離心機、旋渦混合器、二級生物安全柜等。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

監(jiān)測數(shù)據(jù)錄入Excel 2007進(jìn)行整理，用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行X2檢驗，α=0.05，以Р＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 活禽場所外環(huán)境監(jiān)測結(jié)果

2018～2019年共采集并檢測三類外環(huán)境標(biāo)本480份。檢出甲型通用病毒核酸陽性標(biāo)本297份，陽性率61.88%。其中H7亞型病毒核酸陽性0份，陽性率為0.00%；H5亞型病毒核酸陽性60份，陽性率為12.50%；H9亞型病毒核酸陽性180份，陽性率為37.50%。

2.2 不同監(jiān)測場所禽流感病毒檢出率

城區(qū)活禽場所禽流感病毒陽性率略高于鄉(xiāng)鎮(zhèn)活禽場所，無顯著差異（X2=0.073，P＞0.05）；城區(qū)活禽場所禽流感病毒H5亞型陽性率略高于鄉(xiāng)鎮(zhèn)，無顯著差異（X2=2.13，P＞0.05）；城鄉(xiāng)活禽場所禽流感病毒H7亞型陽性率均為0.00%，無統(tǒng)計學(xué)意義；城區(qū)活禽場所禽流感病毒H9亞型陽性率略高于鄉(xiāng)鎮(zhèn)，無顯著差異（X2=2.00，P＞0.05）。見表1。

2.3 不同類型標(biāo)本禽流感病毒核酸檢測結(jié)果

從3種不同類型標(biāo)本中均檢出禽流感病毒H5、H9亞型，檢出率從高至低分別為，案板擦拭子＞禽類籠具＞禽類糞便。三類外環(huán)境標(biāo)本中禽流感病毒FluA檢出率有顯著差異（X2=7.34，P＜0.05）， 有統(tǒng)計學(xué)意義；三類外環(huán)境標(biāo)本中AH5檢出率有顯著差異（X2=38.00，P＜0.05），有統(tǒng)計學(xué)意義；三類外環(huán)境AH9檢出率無顯著差異（X2=1.732，P＞0.05）。見表2。

2.4 不同年份外環(huán)境標(biāo)本中禽流感病毒檢測結(jié)果

2018年外環(huán)境標(biāo)本中禽流感病毒FluA、AH5、AH9檢出率均高于2019年，2018～2019年均未檢出AH7。2018～2019年外環(huán)境標(biāo)本中禽流感病毒AH5亞型檢出率無顯著差異（X2=0.615，P＞0.05）；2018～2019年外環(huán)境標(biāo)本中禽流感病毒AH9亞型檢出率無顯著差異（X2=0.12，P＞0.05）。見表3。

3 討論

北碚區(qū)從2017年9月起開展了外環(huán)境禽流感病毒的監(jiān)測工作，主要采用實時熒光定量PCR的方法進(jìn)行禽流感病毒病原學(xué)檢測，該方法具有靈敏度高、特異性強、速度快等優(yōu)點。從2018～2019年北碚區(qū)禽流感外環(huán)境標(biāo)本監(jiān)測結(jié)果分析看，A型禽流感病毒檢出率61.88%，表明近年來北碚區(qū)活禽場所外環(huán)境中禽流感病毒普遍存在，與相關(guān)報道基本一致，其H5、H9亞型均檢出，其中H9亞型檢出率最高（37.50%）。

表1 不同場所外環(huán)境標(biāo)本檢測結(jié)果

表2 不同類型外環(huán)境標(biāo)本檢測結(jié)果

表3 不同年份外環(huán)境標(biāo)本檢測結(jié)果

不同監(jiān)測場所的檢測結(jié)果表明，北碚城區(qū)及鄉(xiāng)鎮(zhèn)活禽市場中普遍存在致病性禽流感病毒H5、H9亞型，與國內(nèi)研究符合，活禽交易市場同時存在多種禽流感病毒污染的現(xiàn)象。

不同類型標(biāo)本的檢測結(jié)果表明，北碚區(qū)禽流感外環(huán)境標(biāo)本病毒檢出率依次是，案板擦拭子＞禽類籠具＞禽類糞便。表明在禽類的售賣、加工等環(huán)節(jié)中很容易造成污染，特別是宰殺中所用的案板等更容易受到禽流感病毒的污染。需提醒相關(guān)部門加強涉職人員的消毒防護(hù)意識，及時清理禽糞、清潔籠具及宰殺用具等，減少外環(huán)境中禽流感病毒的存在，降低人感染禽流感的風(fēng)險。

人感染禽流感病毒的主要傳播途徑是呼吸道傳播。建議：①長期堅持對涉禽場所禽流感監(jiān)測，增加外環(huán)境標(biāo)本類型，了解掌握本區(qū)禽流感病原的變化趨勢，預(yù)判潛在感染風(fēng)險，及時有效采取針對性的防控措施。②改進(jìn)本區(qū)活禽市場衛(wèi)生條件，切實加強對禽糞、籠具、宰殺用具、污水等清理消毒，增強對活禽場所涉職人員的安全防護(hù)意識，做好個人防護(hù)。③加大衛(wèi)生宣教力度，進(jìn)街道社區(qū)做好科學(xué)宣傳工作，定期發(fā)布疫病防治知識，提高群眾衛(wèi)生及防護(hù)意識，避免接觸活禽，減少受感染機會。