喬喬，余小紅，許龍，李娟，曹陽(yáng)，曹明成，黃順旺

作者單位：合肥創(chuàng)新醫(yī)藥技術(shù)有限公司，安徽 合肥230088

琥珀酸多西拉敏，英文名稱(chēng)為doxylamine succinate，化學(xué)名為N，N-二甲基-2-［1-苯基-1-（2-吡啶基）乙氧基］乙胺琥珀酸鹽，分子式為C21H28N2O5，分子量為388.46。琥珀酸多西拉敏為白色或類(lèi)白色粉末，極易溶于水，易溶于乙醇、甲醇，略溶于丙酮。琥珀酸多西拉敏是乙醇類(lèi)抗組胺藥，具有抗組胺作用、抗膽堿作用和顯著的鎮(zhèn)靜作用［1-10］。其適用于多種過(guò)敏性皮膚病、枯草熱、過(guò)敏性鼻炎、哮喘性支氣管炎等，也可作為催眠藥用于失眠的短期治療［11-15］，國(guó)內(nèi)尚未批準(zhǔn)上市。

琥珀酸多西拉敏的合成工藝中用到了有機(jī)溶劑四氫呋喃、異丙醇、乙酸乙酯、甲基叔丁基醚、乙苯和二甲苯（通常含有60%間二甲苯、14%對(duì)二甲苯、9%鄰二甲苯和17%乙苯），這些殘留溶劑水平高于安全值時(shí)，就會(huì)對(duì)人體或環(huán)境產(chǎn)生危害，所以需要開(kāi)發(fā)出檢出限定量限低、靈敏度專(zhuān)屬性強(qiáng)、精密度準(zhǔn)確度高的琥珀酸多西拉敏殘留溶劑的檢測(cè)方法。

在 USP40［16］、EP9.0［17］和 BP2016［18］的琥珀酸多西拉敏原料質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中，均未收錄其殘留溶劑的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)。本研究于2016 年7 月至2017 年6 月參照人用藥品注冊(cè)技術(shù)國(guó)際協(xié)調(diào)會(huì)議（ICH）對(duì)有機(jī)溶劑殘留量測(cè)定的指導(dǎo)原則［19］、中國(guó)藥典收錄的殘留溶劑測(cè)定法及藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則［20］，建立了琥珀酸多西拉敏原料殘留溶劑測(cè)定方法并進(jìn)行了方法驗(yàn)證。

1 儀器與試劑

GC-2010plus氣相色譜儀（日本島津），島津火焰離子化檢測(cè)器（FID），Labsolutions DB版色譜數(shù)據(jù)工作站，AG135型雙量程電子天平（梅特勒·托利多）。

琥珀酸多西拉敏原料中試樣品3批（20190301、20190302、20190303）均為自制樣品；二甲基亞砜（DMSO）為色譜純，甲基叔丁基醚、四氫呋喃、乙酸乙酯、異丙醇、乙苯、對(duì)二甲苯、間二甲苯、鄰二甲苯均為分析純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1溶液的制備取本品約0.2 g，精密稱(chēng)定，置20 mL量瓶中，加70%DMSO溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。精密稱(chēng)取甲基叔丁基醚500 mg，四氫呋喃72 mg，乙酸乙酯500 mg，異丙醇500 mg，乙苯37 mg，對(duì)二甲苯30 mg，間二甲苯130 mg，鄰二甲苯20 mg，置同一50 mL 量瓶中，加DMSO 溶解并稀釋至刻度，搖勻；再精密量取適量，加70%DMSO溶解并稀釋制成每1 毫升中約含甲基叔丁基醚50 μg，四氫呋喃7.2 μg，乙酸乙酯50 μg，異丙醇50 μg，乙苯3.7 μg，對(duì)二甲苯3.0 μg，間二甲苯13.0 μg，鄰二甲苯2.0 μg 的溶液，作為混合對(duì)照品溶液。精密量取上述溶液各10 mL置頂空瓶中，密封，頂空進(jìn)樣1 mL，分別注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，考察各溶劑峰的分離度。

2.2色譜條件及系統(tǒng)適用性采用氣相色譜法，按照殘留溶劑測(cè)定法［20］測(cè)定。以聚乙二醇（或極性相近）為固定液的毛細(xì)管柱為色譜柱；起始溫度為35 ℃，維持10 min，以每分鐘10 ℃的速率升溫至50 ℃，維持15 min，再以每分鐘40 ℃的速率升溫至220 ℃，維持15 min；進(jìn)樣口溫度為200 ℃；檢測(cè)器FID溫度為250 ℃；頂空瓶平衡溫度為85 ℃，平衡時(shí)間為30 min。精密量取按“2.1”項(xiàng)下方法制備的系統(tǒng)適用性溶液10 mL 置頂空瓶中，密封，頂空進(jìn)樣1 mL，注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，如圖1 所示。系統(tǒng)適用性溶液中，各溶劑峰分離度均＞1.5，理論塔板數(shù)均大于2 000，符合要求。

圖1 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)毛細(xì)管氣相色譜圖

2.3定量限、檢測(cè)限、線性范圍精密稱(chēng)取甲基叔丁基醚500 mg、四氫呋喃72 mg、乙酸乙酯500 mg、異丙醇500 mg、乙苯217 mg、對(duì)二甲苯217 mg、間二甲苯217 mg、鄰二甲苯217 mg，加DMSO溶解并稀釋至20 mL，搖勻；精密量取1 mL用DMSO溶解并稀釋至50 mL，搖勻，作為混合對(duì)照品貯備液；用70%DMSO 稀釋以測(cè)定各成分的定量限與檢測(cè)限。精密量取混合對(duì)照品貯備液 0.5、1.0、2.0、3.0、6.0 mL，分別置20 mL量瓶中，各加70%DMSO稀釋至刻度，搖勻，作為線性溶液（1）、（2）、（3）、（4）、（5）。分別精密量取定量限溶液和線性溶液10 mL置頂空瓶中，密封，頂空進(jìn)樣1 mL，記錄色譜圖。以各成分的峰面積為縱坐標(biāo)（Y），濃度為橫坐標(biāo)（X），進(jìn)行線性回歸，結(jié)果見(jiàn)表1。各溶劑在所考察的濃度范圍內(nèi)均具有良好線性，相關(guān)系數(shù)r為0.999 0～0.999 5。

表1 琥珀酸多西拉敏殘留溶劑定量限、檢測(cè)限與線性

2.4精密度與準(zhǔn)確度精密度：按“2.1”項(xiàng)下方法制備供試品6份，在“2.2”色譜條件下，以氣相色譜儀進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算各有機(jī)殘留溶劑含量相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）。6份樣品中，單個(gè)殘留溶劑含量的RSD均＜10%。

準(zhǔn)確度：精密量取混合對(duì)照品貯備液，加入供試品中，制成含各已知雜質(zhì)為限度的80%、100%、120%的回收率樣品，進(jìn)樣分析，記錄色譜圖，計(jì)算各殘留溶劑回收率。8種殘留溶劑的平均加樣回收率在99.1%～101.6%，RSD均＜5%。

2.5溶液穩(wěn)定性按“2.1”項(xiàng)下制備混合對(duì)照品溶液，25℃放置，并于0、2、4、6、8、12、24 h 分別取樣進(jìn)樣分析，記錄色譜圖。計(jì)算得混合對(duì)照品溶液中單個(gè)殘留溶劑峰面積的RSD均小于10%，表明混合對(duì)照品溶液放置在室溫條件下24 h內(nèi)是穩(wěn)定的。

2.6耐用性通過(guò)分別調(diào)整色譜條件中的進(jìn)樣口溫度±5 ℃、檢測(cè)器溫度±5 ℃、載氣流速±0.05 mL/min及更換不同品牌色譜柱，考察混合對(duì)照品溶液中各殘留溶劑峰之間分離度的情況。結(jié)果表明，進(jìn)樣口溫度、檢測(cè)器溫度、載氣流速及更換不同品牌色譜柱等參數(shù)的調(diào)整對(duì)測(cè)定結(jié)果基本不會(huì)產(chǎn)生影響，方法的耐用性良好。

表2 琥珀酸多西拉敏中試批原料殘留溶劑毛細(xì)管氣相色譜法檢測(cè)結(jié)果/%

2.7樣品測(cè)定按上述已確定的色譜條件及方法，對(duì)3批琥珀酸多西拉敏中試批原料進(jìn)行殘留溶劑測(cè)定，按外標(biāo)法計(jì)算供試品溶液中有機(jī)殘留溶劑含量。結(jié)果見(jiàn)圖2 與表2 所示，各批次樣品殘留溶劑量均符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

圖2 琥珀酸多西拉敏中試批原料殘留溶劑檢測(cè)毛細(xì)管氣相色譜圖

3 討論

琥珀酸多西拉敏易溶于水，但水直接進(jìn)樣對(duì)毛細(xì)管柱存在損害，且以水作溶劑時(shí)色譜峰形及分離度均明顯不佳，因此選擇有機(jī)溶劑作溶媒。琥珀酸多西拉敏在DMSO 中溶解度較大，且沸點(diǎn)較高；在本研究色譜條件下，溶劑出峰位置在所有待測(cè)組分之后，對(duì)測(cè)定結(jié)果無(wú)干擾，故選用70%DMSO為溶劑并采用頂空進(jìn)樣方式，選用強(qiáng)極性的氣相毛細(xì)管柱（聚乙二醇為固定相）作分析柱，結(jié)果表明，各殘留溶劑之間均能達(dá)到較好的分離。

國(guó)內(nèi)外琥珀酸多西拉敏的生產(chǎn)工藝不同，應(yīng)根據(jù)各國(guó)生產(chǎn)的實(shí)際情況制定相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。試驗(yàn)證明，本研究建立的色譜方法操作簡(jiǎn)便，能較好地分離8 種殘留溶劑，且靈敏度高，專(zhuān)屬性、重現(xiàn)性均較好，尚未見(jiàn)其他文獻(xiàn)報(bào)道。本方法能夠準(zhǔn)確測(cè)定琥珀酸多西拉敏中有機(jī)溶劑殘留量，為琥珀酸多西拉敏原料質(zhì)量控制提供試驗(yàn)依據(jù)。