文/王炬亮（復(fù)旦大學(xué)附屬兒科醫(yī)院） 編輯/南溪

隨著經(jīng)濟(jì)社會(huì)的日益發(fā)展，兒童肝病的疾病譜在數(shù)十年間發(fā)生了巨大轉(zhuǎn)變，由原來以傳染性肝炎為主，逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)橐赃z傳性肝病等罕見病為主。作為國(guó)家兒童醫(yī)學(xué)中心，復(fù)旦大學(xué)附屬兒科醫(yī)院的肝病專業(yè)團(tuán)隊(duì)在多年的臨床工作中積累了豐富的經(jīng)驗(yàn)和研究成果。近日，兒科醫(yī)院的感染傳染科肝病研究團(tuán)隊(duì)發(fā)現(xiàn)并報(bào)道了一種新的遺傳性肝病，致病基因?yàn)閆FYVE19，臨床表現(xiàn)為先天性肝纖維化、硬化性膽管炎和高GGT膽汁淤積癥。7月31日，該研究論文在線刊登于BMJ旗下的全球知名遺傳病雜志Journal of Medical Genetics，標(biāo)志著復(fù)旦大學(xué)附屬兒科醫(yī)院肝病領(lǐng)域的專業(yè)研究水平登上了一個(gè)新的高峰。

圖1 論文ZFYVE19缺陷相關(guān)先天性肝纖維化、硬化性膽管炎和高GGT膽汁淤積癥由BMJ旗下的Journal of Medical Genetics在線發(fā)表。

據(jù)復(fù)旦大學(xué)附屬兒科醫(yī)院感染傳染科主任王建設(shè)教授介紹，感染傳染科肝病研究團(tuán)隊(duì)近期發(fā)現(xiàn)并報(bào)道的新型遺傳性肝病，致病基因?yàn)閆FYVE19，臨床表現(xiàn)為先天性肝纖維化、硬化性膽管炎和高GGT膽汁淤積癥。這一成果由復(fù)旦大學(xué)附屬兒科醫(yī)院、復(fù)旦大學(xué)附屬金山醫(yī)院、中國(guó)科學(xué)院深圳先進(jìn)技術(shù)研究院、復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院、上海交通大學(xué)附屬仁濟(jì)醫(yī)院、復(fù)旦大學(xué)生物醫(yī)學(xué)研究院及奧地利格拉茨大學(xué)醫(yī)學(xué)院病理系多家單位合作完成，并于7月31日在線刊登于BMJ旗下的全球知名遺傳病雜志Journal of Medical Genetics。該論文由課題組的欒維莎博士后、郝陳指博士和黎佳琪碩士為共同第一作者，王建設(shè)教授為通信作者。

王建設(shè)教授表示，探索真理的道路從來不是一帆風(fēng)順的，創(chuàng)新性越強(qiáng)，研究難度越大，耗時(shí)越長(zhǎng)。從初次通過二代測(cè)序方法從患者中篩選出ZFYVE19，到研究成果被認(rèn)可并發(fā)表，歷時(shí)漫長(zhǎng)的6年時(shí)間，經(jīng)歷了多位研究團(tuán)隊(duì)成員的接力奉獻(xiàn)。由于既往對(duì)于這一基因功能的研究十分有限，初期在國(guó)際學(xué)術(shù)會(huì)議進(jìn)行報(bào)道時(shí)受到了業(yè)內(nèi)學(xué)者的較多質(zhì)疑。為了尋找致病證據(jù)，課題組研究人員積極收集更多病例、隨訪患者，提供具有說服力的家系證據(jù)；同時(shí)，與華山醫(yī)院、仁濟(jì)醫(yī)院合作，收集患者肝移植術(shù)中的組織樣本進(jìn)行研究，證明在患者中該蛋白表達(dá)缺失（圖3）；并與奧地利格拉茨大學(xué)醫(yī)學(xué)院病理系合作，分析研究患者肝組織的病理特征，從病理特征推測(cè)此病應(yīng)該是纖毛?。▓D4），終于找到進(jìn)一步深入研究的線索；還與中科院深圳先進(jìn)技術(shù)研究院合作，通過細(xì)胞系模型和患者來源的誘導(dǎo)干細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證實(shí)ZFYVE19變異影響纖毛形成，首次明確該基因與纖毛形成的直接相關(guān)性（圖5）；最終，在與復(fù)旦大學(xué)生物醫(yī)學(xué)研究院合作中，發(fā)現(xiàn)ZFYVE19基因的數(shù)據(jù)庫注釋存在缺陷，從而導(dǎo)致這一基因在測(cè)序分析中容易被忽略，最后我們通過該基因轉(zhuǎn)錄和蛋白翻譯方面進(jìn)行深入研究，對(duì)該基因的翻譯起始位點(diǎn)進(jìn)行了新的注釋，克服了注釋錯(cuò)誤對(duì)基因功能預(yù)測(cè)造成的誤導(dǎo)誤判（圖6），故而至今才被學(xué)術(shù)界揭示。在多方協(xié)助、共同努力下，課題組克服重重困難，歷時(shí)多年的研究成果終得以獲得業(yè)內(nèi)專家認(rèn)可。

豐碩的成果總來源于長(zhǎng)期的努力，作為國(guó)內(nèi)最大的兒童肝病診治和研究中心，王建設(shè)教授帶領(lǐng)肝病臨床及科研團(tuán)隊(duì)，從2003年開始就專注于兒童膽汁淤積癥的臨床和研究，且在國(guó)際上較早在患者中應(yīng)用二代測(cè)序方法進(jìn)行已知疾病的診斷和未知疾病的發(fā)掘，在多年臨床和科研工作中積累了豐富的臨床病例和研究數(shù)據(jù)資源。2017年王建設(shè)教授領(lǐng)銜的肝病團(tuán)隊(duì)鑒定了MYO5B缺陷引起的低GGT膽汁淤積癥譜系，被國(guó)際上公認(rèn)為家族性膽汁淤積癥6型（圖7）。今年3月，該團(tuán)隊(duì)又在國(guó)際上率先報(bào)道了一組由USP53缺陷引起低GGT膽汁淤積癥譜系，詳細(xì)闡述了該病的臨床特征及病理特征，并揭示了這一新基因與已知低GGT膽汁淤積癥致病基因TJP2的潛在關(guān)聯(lián)（圖8）。而近期報(bào)道的ZFYVE19則是全球首次關(guān)于該基因致病的報(bào)道，臨床上表現(xiàn)為先天性肝纖維化、硬化性膽管炎和高GGT膽汁淤積癥。在未來，基于國(guó)家兒童醫(yī)學(xué)中心的大平臺(tái)，相信復(fù)旦大學(xué)附屬兒科醫(yī)院兒童肝病中心這一研究成果必將為治療疑難肝病領(lǐng)域開辟新的道路，服務(wù)于更多疑難肝病患兒，為更多無助的家庭帶來希望和慰藉。

圖3 ZFYVE19缺陷患者家系圖顯示符合常染色體隱性遺傳，患者肝組織中ZFYVE19蛋白缺失。

圖4 患者肝臟組織病理中纖毛蛋白表達(dá)異常，提示纖毛病可能。

圖5 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證實(shí)，敲低ZFYVE19可以使細(xì)胞形成異常數(shù)目和形態(tài)的中心粒及纖毛。

圖6 ZFYVE19的mRNA結(jié)構(gòu)重新分析發(fā)現(xiàn)以往數(shù)據(jù)庫中注釋蛋白翻譯起始位點(diǎn)錯(cuò)誤。sAUG：注釋翻譯起始位點(diǎn)。dAUG：實(shí)際翻譯起始位點(diǎn)。

圖7 MYO5B缺陷導(dǎo)致低GGT膽汁淤積癥疾病譜系，發(fā)表于2017年Hepatology。

圖8 USP53缺陷導(dǎo)致低GGT肝內(nèi)膽汁淤積癥的臨床特點(diǎn)、病理特征及超微結(jié)構(gòu)，2020年發(fā)表于Liver International。