范路梅，魏 紅，謝小紅

腦出血是指非外力導(dǎo)致的血管破裂出血，其發(fā)生主要與腦血管病變有關(guān)，應(yīng)激性潰瘍是重癥腦出血的主要并發(fā)癥之一，增加了重癥腦出血病人的死亡率[1]，應(yīng)激性潰瘍有血紅蛋白(hemoglobin，Hb)、血細(xì)胞比容(hematocrit，HCT)下降以及便隱血陽(yáng)性等典型癥狀，但三者均為非特異性指標(biāo)，因此，尋求簡(jiǎn)便易行、特異性高的生化指標(biāo)診斷是否發(fā)生應(yīng)激性潰瘍確有必要。熱休克蛋白70(heat shock protein 70，HSP70)是重要的應(yīng)激蛋白，幾乎在所有生物應(yīng)激細(xì)胞中高水平表達(dá)，有研究表明其與應(yīng)激性潰瘍的發(fā)生密切相關(guān)[2]。熱休克蛋白90(heat shock protein 90，HSP90)是一類結(jié)構(gòu)保守、功能廣泛的蛋白質(zhì)[3]，其與應(yīng)激性潰瘍關(guān)系的研究較少。本研究通過(guò)分析重癥腦出血病人血清HSP70、HSP90表達(dá)情況及其與應(yīng)激性潰瘍的關(guān)系，探討血清HSP70、HSP90水平對(duì)重癥腦出血病人發(fā)生應(yīng)激性潰瘍的診斷價(jià)值，以期為重癥腦出血病人發(fā)生應(yīng)激性潰瘍的判斷提供理論基礎(chǔ)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2015年9月—2018年6月收治的141例重癥腦出血病人作為病例組，根據(jù)是否發(fā)生應(yīng)激性潰瘍分為應(yīng)激性潰瘍組與非應(yīng)激性潰瘍組。應(yīng)激性潰瘍組58例，男27例，女31例；年齡45～74(61.38±9.27)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：符合重癥腦出血診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]；符合應(yīng)激性潰瘍?cè)\斷標(biāo)準(zhǔn)[5]。排除標(biāo)準(zhǔn)：急性糜爛性胃炎、消化性胃炎、食管靜脈曲張破裂出血、肝硬化病人；合并肺、腎等多器官病變病人。非應(yīng)激性潰瘍組83例，男42例，女41例；年齡44～78(63.29±8.77)歲。另選取同期體檢健康者60名作為對(duì)照組，其中男38名，女22名；年齡45～77(62.49±9.06)歲。3組性別、年齡等一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2 方法

1.2.1 樣本采集 病例組于入院24 h內(nèi)、體檢健康者于晨起空腹抽取靜脈血5 mL，-4 ℃、3 000 r/min離心20 min，取上清液，貼標(biāo)簽，保存于-80 ℃冰箱中待用，避免反復(fù)凍融。

1.2.2 血清HSP70、HSP90水平及Hb、HCT、轉(zhuǎn)鐵蛋白(transferrin，TRF)水平檢測(cè) 采用酶聯(lián)免疫法(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)檢測(cè)血清HSP70、HSP90、TRF水平，試劑盒分別為HSP70試劑盒(上?；馍锟萍加邢薰?、HSP90檢測(cè)試劑盒(鎮(zhèn)江博研生物科技有限公司)、TRF測(cè)定試劑盒(武漢中太生物技術(shù)有限公司)，嚴(yán)格按照操作說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。并進(jìn)行血常規(guī)Hb、HCT水平檢測(cè)。

2 結(jié) 果

2.1 3組HSP70、HSP90水平比較 3組HSP70、HSP90水平比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與對(duì)照組相比，非應(yīng)激性潰瘍組HSP70降低(P<0.05)，HSP90差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。應(yīng)激性潰瘍組HSP70、HSP90水平較對(duì)照組與非應(yīng)激性潰瘍組升高(P<0.05)。詳見(jiàn)表1。

表1 3組HSP70、HSP90水平比較 (±s)

P<0.05。

2.2 3組應(yīng)激性潰瘍檢測(cè)指標(biāo)比較 3組Hb、HCT、TRF水平比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與對(duì)照組相比，非應(yīng)激性潰瘍組Hb水平顯著升高(P<0.05)，HCT、TRF水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；應(yīng)激性潰瘍組Hb、HCT水平降低(P<0.05)，TRF水平升高(P<0.05)；與非應(yīng)激性潰瘍組比較，應(yīng)激性潰瘍組Hb、HCT水平降低(P<0.05)，TRF水平升高(P<0.05)。詳見(jiàn)表2。

表2 3組Hb、HCT、TRF水平比較 (±s)

2.3 HSP70、HSP90水平與應(yīng)激性潰瘍指標(biāo)的相關(guān)性 Pearson相關(guān)分析顯示，血清HSP70水平與Hb、HCT水平呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)，與TRF水平呈正相關(guān)(P<0.05)。HSP90水平與Hb、HCT水平呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)，與TRF水平呈正相關(guān)(P<0.05)。詳見(jiàn)表3。

表3 HSP70、HSP90水平與應(yīng)激性潰瘍指標(biāo)的相關(guān)性分析

2.4 HSP70、HSP90水平對(duì)重癥腦出血病人應(yīng)激性潰瘍的預(yù)測(cè)作用 ROC曲線顯示，HSP70水平預(yù)測(cè)重癥腦出血病人應(yīng)激性潰瘍曲線下面積為0.876，截?cái)嘀禐?.00 ng/mL，敏感度為82.8%，特異性為94.0%。HSP90水平預(yù)測(cè)重癥腦出血病人應(yīng)激性潰瘍的曲線下面積為0.800，截?cái)嘀禐?31.43pg/mL，敏感度為75.9%，特異性為88.0%。詳見(jiàn)圖1。

圖1 HSP70、HSP90水平對(duì)應(yīng)激性潰瘍?cè)\斷作用的ROC曲線

2.5 Logistic回歸分析影響重癥腦出血病人應(yīng)激性潰瘍發(fā)生的因素 多因素Logistic回歸分析顯示，Hb、HCT、TRF水平是病人發(fā)生應(yīng)激性潰瘍的無(wú)關(guān)因素，高水平HSP70、HSP90是影響重癥腦出血病人發(fā)生應(yīng)激性潰瘍的危險(xiǎn)因素。詳見(jiàn)表4。

表4 多因素Logistic回歸分析

3 討 論

應(yīng)激性潰瘍是泛指休克、創(chuàng)傷、手術(shù)后或嚴(yán)重全身性感染時(shí)發(fā)生的急性胃炎，是一種急性胃黏膜病變，是重癥腦出血病人嚴(yán)重并發(fā)癥之一[6]。隨著重癥監(jiān)護(hù)的加強(qiáng)、抗感染藥物的更新，提高了重癥腦出血病人的生存率，應(yīng)激性潰瘍的發(fā)病率隨之升高。目前，有關(guān)腦出血合并應(yīng)激性潰瘍的發(fā)病機(jī)制已有較多研究，但發(fā)病機(jī)制尚未完全明確。有研究表明腦出血誘導(dǎo)的一系列神經(jīng)體液變化打破了胃黏膜穩(wěn)態(tài)，致使胃局部出現(xiàn)出血[7]。

HSP70是重要的應(yīng)激蛋白，幾乎在所有生物應(yīng)激細(xì)胞中高水平表達(dá)，熱應(yīng)激、氧自由基、缺血缺氧、嚴(yán)重創(chuàng)傷均可誘導(dǎo)HSP70產(chǎn)生[8-9]。Leu等[10]研究表明，應(yīng)激性潰瘍病人外周血細(xì)胞中HSP70 mRNA水平、HSP70蛋白陽(yáng)性率表達(dá)顯著高于非應(yīng)激性潰瘍病人及對(duì)照組。本研究表明，應(yīng)激性潰瘍病人胃黏膜上皮細(xì)胞HSP70 mRNA表達(dá)顯著升高，可減少胃黏膜細(xì)胞的損傷，進(jìn)而保護(hù)胃黏膜，并推測(cè)應(yīng)激狀態(tài)下胃黏膜HSP70增加的可能機(jī)制為：各種因素刺激下胃黏膜細(xì)胞蛋白質(zhì)構(gòu)型改變，激發(fā)細(xì)胞應(yīng)激反應(yīng)，激活并編碼HSP70，HSP70可促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)合成、折疊，減少對(duì)黏膜細(xì)胞的損傷，從而保護(hù)胃黏膜[11]。有研究顯示，HSP70家族可以修復(fù)損傷的前核糖體、防止溶酶體破壞、穩(wěn)定細(xì)胞膜，從而維持細(xì)胞正常的形態(tài)和功能，對(duì)抗有害因素[12]。本研究中，重癥腦出血病人合并應(yīng)激性潰瘍病人血清HSP70水平高于非應(yīng)激性潰瘍病人及體檢健康者，推測(cè)HSP70在重癥腦出血病人應(yīng)激性潰瘍發(fā)生過(guò)程中起一定作用。臨床表明應(yīng)激性潰瘍病人血常規(guī)檢查中Hb、HCT下降，便隱血呈陽(yáng)性，TRF不受飲食、藥物等因素影響，敏感度高，微量出血即可檢出[13]。本研究中應(yīng)激性潰瘍病人Hb、HCT水平低于非應(yīng)激性潰瘍病人及體檢健康者，TRF水平則高于非應(yīng)激性潰瘍病人及體檢健康者。同時(shí)Pearson相關(guān)性分析顯示，HSP70水平與Hb、HCT水平呈負(fù)相關(guān)，與TRF水平呈正相關(guān)，進(jìn)一步表明HSP70與應(yīng)激性潰瘍的發(fā)生密切相關(guān)。HSP70預(yù)測(cè)重癥腦出血病人應(yīng)激性潰瘍發(fā)生的曲線下面積為0.876，特異性、敏感度高，可作為重癥腦出血病人發(fā)生應(yīng)激性潰瘍的診斷指標(biāo)，截?cái)嘀禐?.00 ng/mL，表明當(dāng)血清濃度HSP70高于2.00 ng/mL時(shí)，重癥腦出血病人發(fā)生應(yīng)激性潰瘍的風(fēng)險(xiǎn)高。多因素Logistic回歸分析顯示，HSP70水平是重癥腦出血病人并發(fā)應(yīng)激性潰瘍的影響因素，提示重癥腦出血病人血清HSP70水平高則發(fā)生應(yīng)激性潰瘍的風(fēng)險(xiǎn)高，推測(cè)可通過(guò)檢測(cè)血清HSP70水平評(píng)估病人發(fā)生應(yīng)激性潰瘍的風(fēng)險(xiǎn)，以便及時(shí)采取治療。

HSP90是一類結(jié)構(gòu)保守、功能廣泛的蛋白質(zhì)，目前認(rèn)為其基本功能為分子伴侶功能[14]，通過(guò)幫助氨基酸鏈折疊成正確的三維結(jié)構(gòu)，清除受損而無(wú)法正確折疊的氨基酸鏈，護(hù)送蛋白分子尋找目標(biāo)分子以免受到其他分子的干擾發(fā)揮作用。在受到各種刺激誘導(dǎo)時(shí)，HSP90表達(dá)增加，以抵制外界刺激對(duì)細(xì)胞的損傷。HSP90與蘇氨酸蛋白激酶及上游的3-磷脂酰肌醇依賴性蛋白1激酶相結(jié)合，在抗細(xì)胞凋亡作用中扮演重要角色[15-17]。有研究表明，HSP90蛋白在心血管系統(tǒng)應(yīng)激反應(yīng)時(shí)發(fā)揮保護(hù)性作用[18]。本研究中，應(yīng)激性潰瘍病人血清HSP90水平高于非應(yīng)激性潰瘍病人，推測(cè)HSP90可能在應(yīng)激性潰瘍中發(fā)揮重要作用。本研究發(fā)現(xiàn)HSP90水平與Hb、HCT水平呈負(fù)相關(guān)，與TRF呈正相關(guān)，進(jìn)一步表明HSP90與重癥腦出血病人應(yīng)激性潰瘍的發(fā)生密切相關(guān)。HSP90預(yù)測(cè)重癥腦出血病人應(yīng)激性潰瘍發(fā)生的曲線下面積為0.800，截?cái)嘀禐?31.43 pg/mL，表明當(dāng)血清濃度HSP90高于131.43 pg/mL時(shí)，重癥腦出血病人發(fā)生應(yīng)激性潰瘍的風(fēng)險(xiǎn)高。多因素Logistic回歸分析顯示，HSP90是重癥腦出血病人合并應(yīng)激性潰瘍的影響因素，因此，重癥腦出血病人血清HSP90水平高，則發(fā)生應(yīng)激性潰瘍的風(fēng)險(xiǎn)高，應(yīng)對(duì)這些病人進(jìn)行適當(dāng)干預(yù)，加強(qiáng)監(jiān)測(cè)，以改善病人病情。

綜上所述，重癥腦出血合并應(yīng)激性潰瘍病人血清HSP70、HSP90水平升高，檢測(cè)血清HSP70、HSP90水平對(duì)早期診斷重癥腦出血病人發(fā)生應(yīng)激性潰瘍具有一定價(jià)值。