周賽男，郭寶林

1.中國醫(yī)學科學院 北京協(xié)和醫(yī)學院 藥用植物研究所，北京 100193；2.山西醫(yī)科大學，山西 太原 030001

“搶青”多指果實種子類藥材在未達到適合采收期而提前采收的現(xiàn)象?！皳屒唷碑a(chǎn)生的原因主要是產(chǎn)新期前該藥材價格一般處于高位，提前采收后能提前上市獲得好的收益。連翹、五味子、梔子、八角、決明子等都存在“搶青”現(xiàn)象，以沒有權(quán)屬的野生藥材最為嚴重。采收期的差異將帶來藥材質(zhì)量的變化，是非常值得關注的問題。本課題組曾經(jīng)報道過連翹“搶青”帶來的成分含量變化[1]。近年來，酸棗仁藥材的“搶青”問題也比較嚴重，“搶青”采收的酸棗種子不成熟、總產(chǎn)量降低、種子干癟、種皮占比較大，可能影響其質(zhì)量。酸棗仁是鼠李科植物酸棗ZiziphusjujubaMill. var.spinosa(Bunge) Hu ex H. F. Chow的干燥種子，具有養(yǎng)心補肝、寧心安神、斂汗生津的功效[2]。酸棗仁是藥食同源品種，在養(yǎng)神助眠等功能食品中也廣泛使用，用量逐年增加。野生酸棗分布于華北各地，產(chǎn)地的老百姓一般在8月中旬酸棗未成熟時開始采收，到9月中旬采收基本結(jié)束。傳統(tǒng)的采收時間在10月1日之后，也就是說對于酸棗仁，“搶青”這一做法已經(jīng)形成了當今采收的慣例。本研究設計分離出種皮和種仁2個部位，在多個產(chǎn)地，從“搶青”時間到種子完全成熟的各個時期采收酸棗，測定酸棗仁不同采收時間和不同部位成分含量變化，在課題組前期建立的含量測定方法[3]基礎上，測定了三萜皂苷類(酸棗仁皂苷A和酸棗仁皂苷B)和黃酮類(斯皮諾素和6?-阿魏酰斯皮諾素)4個主要成分含量。

1 材料

1.1 樣品

1.1.1酸棗仁不同部位實驗樣品 酸棗仁樣品購自河北安國，產(chǎn)地分別為甘肅(GS)和山東(SD)，手工將種皮和種仁分離干凈，每份樣品不少于10 g，樣品信息見表1。

表1 酸棗仁不同部位實驗樣品信息

1.1.2不同采收期實驗樣品 在山西大寧、河北元氏、山東萊蕪和北京海淀4個主要產(chǎn)地，采集對象為生長旺盛、結(jié)果多的植株，采集時間為8月中旬—11月上旬，每次采樣均間隔半個月。1個重復10株，每株采集20粒果實，合并200粒果實為1個樣品，3個重復。每個采收期來自同樣的植株。每次收集完果實樣品，均晾干后去果肉去殼。樣品經(jīng)中國醫(yī)學科學院藥用植物研究所郭寶林研究員鑒定為鼠李科植物酸棗Z.jujubaMill. var.spinosa(Bunge) Hu ex H. F. Chow的干燥種子，樣品信息來源見表2。

表2 不同采收期酸棗仁藥材信息

1.2 試藥

斯皮諾素、6?-阿魏酰斯皮諾素、酸棗仁皂苷A和酸棗仁皂苷B對照品均購自成都曼思特生物科技有限公司，純度均大于98%；乙腈(色譜純，美國Fisher公司)；蒸餾水購于杭州娃哈哈集團有限公司；其他試劑均為分析純。

1.3 儀器

ACQUITY UPLC(美國Waters公司)包括四元高壓梯度泵、真空脫氣機、自動進樣器、柱溫箱、ELS檢測器、TUV檢測器、Empower色譜工作站；AT261DeltaRange+w十萬分之一天平(METTLER TOLEDO儀器有限公司)；FA210N電子天平(上饒市鴻翔實業(yè)有限公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 對照品溶液的制備

分別精密稱取4種對照品適量于5 mL容量瓶中，甲醇溶解，定容至刻度，得斯皮諾素2.110 mg·mL-1、6?-阿魏酰斯皮諾素1.950 mg·mL-1、酸棗仁皂苷A 2.176 mg·mL-1、酸棗仁皂苷B 1.004 mg·mL-1的對照品儲備液，并各取1 mL置5 mL的容量瓶中，定容，既得混合對照品儲備液。

2.2 供試品溶液的制備

精密稱取酸棗仁藥材粉末(過三號篩)1.0 g于50 mL具塞錐形瓶中，加入30 mL的70%乙醇，常溫超聲提取(功率500 W，頻率40 kHz)90 min，過濾，濾渣用8 mL的70%乙醇洗滌，合并濾液與洗液，將其轉(zhuǎn)移至旋蒸瓶中，旋干，用甲醇定容至5 mL的容量瓶中，搖勻，0.22 μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，即得。

2.3 色譜條件

色譜柱：ACQUITY C18柱(150 mm×2.1 mm，1.7 μm)；流動相為乙腈(A)-0.1%甲酸水溶液(B)，梯度洗脫(0～4 min，14.5%～16%A；4～5 min，16%～20%A；5～9 min，20%A；9～11 min，20%～37%A；11～17 min，37%A；17～19 min，37%～100%A；19～22 min，100%A；22～24 min，100%～14.5%A；24～27 min，14.5%A)；體積流量：0.3 mL·min-1；柱溫：35 ℃；進樣量：3 μL；檢測波長：335 nm；ELSD條件漂移管溫度：60 ℃；氣壓：172 kPa。色譜圖見圖1。

注：A.對照品UV色譜圖；B.樣品UV色譜圖；C.對照品ELSD色譜圖；D.樣品ELSD色譜圖；1.斯皮諾素；2.6?-阿魏酰斯皮諾素；3.酸棗仁皂苷A；4.酸棗仁皂苷B。圖1 酸棗仁對照品和樣品UPLC圖

2.4 含量測定

所有樣品的含量結(jié)果見表3～4，不同采收期含量變化見圖2。

表3 酸棗仁不同部位中2種黃酮和2種皂苷的質(zhì)量分數(shù)(n=3) %

在種仁和種皮中同時存在2種黃酮和2種皂苷，但在種仁中的含量顯著高于種皮，2種黃酮的種仁含量約為種皮含量的3倍，酸棗仁皂苷A的種仁含量約為種皮含量的2倍，酸棗仁皂苷B在種皮和種仁含量相近。

所采集樣品中，不同采收期4個產(chǎn)地的測定結(jié)果所顯示的變化規(guī)律一致，即隨著酸棗果實成熟，黃酮類成分和皂苷類成分的含量均逐漸升高，該變化和文獻報道一致[4]，其中在9月下旬斯皮諾素和6?-阿魏酰斯皮諾素的含量達到最高點，其后直到11月上旬基本穩(wěn)定，而在9月中旬酸棗仁皂苷A和B的含量達到最高點(其中酸棗仁皂苷B稍早一些)，其后基本穩(wěn)定，和酸棗果實的完全成熟時間相一致[5]。

表4 酸棗仁4個產(chǎn)地不同采收期樣品中2種黃酮和2種皂苷的質(zhì)量分數(shù) %

注：A.河北元氏；B.山東萊蕪；C.北京海淀；D.山西大寧。圖2 酸棗仁4個產(chǎn)地不同采收期樣品含量變化

4個成分中隨果實成熟變化幅度最大的是斯皮諾素。這一結(jié)果表明，酸棗仁的采收時間是影響質(zhì)量的重要因素，傳統(tǒng)的酸棗仁采收時間(10月1日后)是合理的，而“搶青”采收降低了酸棗仁的質(zhì)量，越早采收兩類成分的含量越低，如傳統(tǒng)采收期采收的酸棗仁中斯皮諾素含量約為8月中旬采收的含量的3倍。

2.6 結(jié)論

由本研究可以看出，“搶青”采收將嚴重影響酸棗仁藥材中黃酮類成分和皂苷類成分的含量，《中華人民共和國藥典》規(guī)定酸棗仁藥材中斯皮諾素的質(zhì)量分數(shù)不低于0.08%，酸棗仁皂苷A的質(zhì)量分數(shù)不低于0.03%。經(jīng)市場調(diào)研發(fā)現(xiàn)，酸棗仁藥材中斯皮諾素的含量差異比較大，除不同產(chǎn)地影響其含量外[6-7]，“搶青”采收也可能是主要影響因素?！皳屒唷辈墒蘸蟮奈闯墒焖釛椚时容^干癟，種皮占比例較高，而種皮中各成分含量顯著低于種仁，應該是導致含量低的一個原因，應嚴格控制酸棗仁的采收期，但兩類主要成分在酸棗仁發(fā)育成熟過程的各個部位中的含量變化還可以做進一步研究。

“搶青”采收和其中黃曲霉毒素產(chǎn)生有一定的關系。早期采摘的果實果肉含水量大，比較黏，大多用堆漚方法，讓果肉腐爛后清洗去果肉，過程中引入了黃曲霉菌的感染[8]。未成熟種子比較干癟，加工過程容易產(chǎn)生種皮破裂，丟失了厚種皮的防護而易染菌。此外，未成熟種子含水量高，容易受到黃曲霉菌浸染。因此“搶青”采收可能也是引起黃曲霉毒素增加和超標的重要因素。