黃其文，莫慧，黎新喜

茂名市人民醫(yī)院病理科，廣東茂名525000

乳腺癌發(fā)病原因暫未明確，在所有女性惡性腫瘤中位居首位，已對(duì)患者生命健康產(chǎn)生嚴(yán)重威脅。伴隨社會(huì)經(jīng)濟(jì)迅速發(fā)展與生活壓力不斷增加，乳腺癌發(fā)病率也在逐年攀升，且發(fā)病年齡呈現(xiàn)日漸年輕化趨勢(shì)[1-2]。乳腺并非維持人體生命活動(dòng)的重要器官，原位乳腺癌通常不會(huì)對(duì)患者的生命安全造成影響，然而由于乳腺細(xì)胞失去了正常細(xì)胞的特性，細(xì)胞間連接較為松散，且易脫落。而癌細(xì)胞一旦脫落，且就會(huì)隨著血液或淋巴液擴(kuò)散至患者全身，形成轉(zhuǎn)移，從而對(duì)患者的生命安全造成影響，已逐漸成為威脅女性身心健康的一項(xiàng)重大公共衛(wèi)生問(wèn)題。該研究選取該院于2014年1月—2015年12月間收治的100例為研究對(duì)象，采用免疫組織化學(xué)檢測(cè)癌組織及癌旁正常乳腺組織中CCR4的表達(dá)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

統(tǒng)計(jì)該院收治的乳腺癌患者（剔除新輔助化療及資料不全患者）的臨床病理資料，選取年輕乳腺癌患者（＜35歲）、非年輕乳腺患者（≥35歲）各自50例，年輕乳腺癌患者平均年齡（32.78±1.54）歲，非年輕乳腺患者平均年齡（61.27±5.76）歲，兩組一般資料對(duì)比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），存在可比性，見(jiàn)表1。

表1一般資料對(duì)比Table 1 Comparison of general information

納入標(biāo)準(zhǔn)：①均為無(wú)合并遠(yuǎn)處臟器轉(zhuǎn)移的原發(fā)乳腺癌；②術(shù)后均接受輔助化療，化療方案和周期均個(gè)體化；③所有患者術(shù)前均未行放化療。

排除標(biāo)準(zhǔn)：①研究者判斷生存期＜6個(gè)月或其他原因不能完成該研究者；②具有精神意識(shí)障礙的患者；③中途退出或轉(zhuǎn)院者。

1.2 方法

1.2.1 主要試劑耗材 鼠抗人CCR4單克隆抗體、改進(jìn)型檸檬酸鈉抗原修復(fù)液、DAB辣根過(guò)氧化物酶顯色試劑盒、蘇木素染色液、中性樹(shù)膠封片劑和磷酸鹽緩沖液(phosphate buff-ered saline，PBS)等。實(shí)驗(yàn)所需的其他儀器由該院病理科提供。

1.2.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備 ①半自動(dòng)石蠟轉(zhuǎn)輪切片機(jī)（RM2245）；②恒溫培養(yǎng)箱；③冰箱；④光學(xué)顯微鏡（BX-51型）；⑤DP-70圖象采集系統(tǒng)。

1.2.3 實(shí)驗(yàn)方法 所有標(biāo)本均經(jīng)過(guò)檸檬酸緩沖液（pH=6.0）高溫高壓抗原修復(fù)，采用鏈霉素抗生物素蛋白-過(guò)氧化物酶免疫組化法（SP法）免疫組織化學(xué)法染色。組織蠟塊4μm切片，置于二甲苯、梯度酒精水化，過(guò)氧化氫浸泡去除內(nèi)源性過(guò)氧化氫酶，檸檬酸修復(fù)抗原，血清封閉液封閉，一抗4℃孵育過(guò)夜，二抗室溫孵育2 h，DAB顯色5 min，蘇木素復(fù)染，依次梯度酒精、二甲苯脫水，中性樹(shù)膠封片，鏡下觀察。

1.2.4 結(jié)果判定 在雙盲情況下，由兩位主治醫(yī)生職稱以上病理醫(yī)生獨(dú)立評(píng)分。評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)如下：①按陽(yáng)性細(xì)胞百分率記分：＜5%為0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，＞75%以上為4分；②按著色強(qiáng)度記分，分為4個(gè)等級(jí)：無(wú)著色為0分，淡黃色為1分，黃色為2分，棕黃色為3分。兩者積分乘積＜6分為低表達(dá)（陰性），≥6分為高表達(dá)（陽(yáng)性）。

1.2.5 隨訪及生存時(shí)間 隨訪36個(gè)月，記錄總生存時(shí)間（手術(shù)當(dāng)天至患者死亡或隨訪截止）及無(wú)病生存時(shí)間（手術(shù)當(dāng)天至第1次轉(zhuǎn)移或復(fù)發(fā)）。

1.3 統(tǒng)計(jì)方法

應(yīng)用SPSS 23.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，率的比較應(yīng)用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)統(tǒng)計(jì)量應(yīng)用非參數(shù)Spearman相關(guān)，根據(jù)需要并做Fisher精確檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。單因素生存分析應(yīng)用Log-rank檢驗(yàn)，對(duì)于P＜0.05的指標(biāo)應(yīng)用Cox風(fēng)險(xiǎn)模型進(jìn)行多因素分析。

2 結(jié)果

2.1 研究對(duì)象CCR4表達(dá)情況

年輕組與非年輕組在CCR4表達(dá)上，乳腺癌組織表達(dá)率均比癌旁組織高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而年輕組的CCR4高表達(dá)率（58.00%）顯著比非年輕組（44.00%）高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表2。

表2研究對(duì)象CCR4表達(dá)情況[n（%）]Table 2 Research objects CCR4 expression[n(%)]

2.2 CCR4與乳腺癌臨床病理因素之間的關(guān)系

年輕組的腫瘤組織學(xué)分級(jí)、腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的CCR4高表達(dá)率顯著比非年輕組高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表3。

表3 CCR4與乳腺癌臨床病理因素之間的關(guān)系Table 3 Relationship between CCR4 and clinical pathological factors of breast cancer

2.3 年輕組CCR4蛋白的表達(dá)與患者的預(yù)后分析

所有患者均得到有效隨訪，中位隨訪時(shí)間為術(shù)后21（6～36）個(gè)月。其中年輕組19例患者發(fā)生乳腺癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移，3年治愈率62.00%（31/50）。根據(jù)CCR4蛋白表達(dá)情況，將患者分為CCR4陽(yáng)性組（n=22）和CCR4陰性組（n=28），Kaplan-Meier分析結(jié)果顯示，CCR4陽(yáng)性組患者的無(wú)瘤生存期（DFS）為（20.63±2.75）個(gè)月；CCR4陰性組患者DFS為（29.94±2.11）個(gè)月；兩組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=13.554，P＜0.05）。

3 討論

雖然近些年來(lái)隨著乳腺癌篩查工作的普遍開(kāi)展及乳腺癌綜合治療的開(kāi)展，使得乳腺癌的病死率明顯降低，然而其仍然會(huì)給患者的身心健康造成嚴(yán)重的威脅。尤其是近些年來(lái)，隨著社會(huì)的高速發(fā)展及人們生活壓力的不斷增加，乳腺癌的發(fā)病年齡也逐漸趨向年輕化[7-8]。

近年來(lái)，新生淋巴管和新生血管的研究已成為腫瘤轉(zhuǎn)移研究的熱點(diǎn)[9-10]。癌癥患者的死亡主要是由于癌細(xì)胞向遠(yuǎn)處器官擴(kuò)散所致，淋巴結(jié)受累是腫瘤轉(zhuǎn)移的重要特征之一。CCR4在免疫和炎癥反應(yīng)期間，可促進(jìn)淋巴細(xì)胞運(yùn)輸和歸巢到淋巴結(jié)，在腫瘤淋巴管和血管的形成中起著重要作用[11]。該次研究結(jié)果表明，年輕組與非年輕組在CCR4表達(dá)上，乳腺癌組織表達(dá)率均比癌旁組織高（P＜0.05），而年輕組的CCR4高表達(dá)率（58.00%）顯著比非年輕組（44.00%）高（P＜0.05），提示CCR4可能促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展，王保國(guó)等[12]學(xué)者在相關(guān)研究中得出，年輕乳腺癌患者的CCR4高表達(dá)率為49.67%，要高于非年輕乳腺癌患者的CCR4高表達(dá)率41.33%，與該文所得結(jié)果相近。年輕組的腫瘤組織學(xué)分級(jí)、腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的CCR4高表達(dá)率顯著比非年輕組高（P＜0.05），乳腺癌CCR4高表達(dá)組無(wú)瘤生存期（DFS）顯著低于CCR4低表達(dá)組的無(wú)瘤生存期（DFS），Kaplan-Meier生存分析顯示，兩組之間DFS差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），表明CCR4的表達(dá)水平與乳腺癌患者預(yù)后存在一定聯(lián)系。

綜上所述，趨化因子及受體作用軸在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中，CCR4在乳腺癌組織上呈高表達(dá)，年輕乳腺癌患者中的表達(dá)率相比非年輕乳腺癌患者更高，CCR4在年輕乳腺癌患者中呈高表達(dá)，其與乳腺癌患者預(yù)后呈正相關(guān)，CCR4參與到乳腺癌的發(fā)生發(fā)展中，影響患者預(yù)后。