寧慧波，魏國(guó)春，烯文源，李 聰

[1.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，北京 海淀 100193；2.海博萊生物科技咨詢（北京）有限公司，海淀 100086]

豬偽狂犬?。≒orcine pseudorabies,PR）是由偽狂犬病病毒（Pseudorabies virus,PRV）引起的一種嚴(yán)重影響?zhàn)B豬生產(chǎn)的傳染病，對(duì)養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失[1]。2011年，該病自我國(guó)華北地區(qū)向南逐步呈暴發(fā)狀態(tài)，迅速波及我國(guó)生豬主產(chǎn)區(qū)，包括華北、華中、華東、華南及西南等地區(qū)，引發(fā)大量母豬流產(chǎn)及仔豬死亡，嚴(yán)重影響我國(guó)養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展[2]。隨著Bartha-K61株及變異株疫苗的強(qiáng)化免疫，輔以gEELISA的廣泛應(yīng)用，PR在我國(guó)得到較好的防控。雖然近幾年該病在臨床上趨于緩和，但PR陽(yáng)性豬場(chǎng)依然很多，這增加了豬病防控的復(fù)雜性，嚴(yán)重影響了我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)的健康發(fā)展[3]。

為了掌握現(xiàn)有防控體系下華北地區(qū)規(guī)?；i場(chǎng)PRV感染狀況，本調(diào)查對(duì)華北地區(qū)322個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)的19 696份血清樣品進(jìn)行PRV gE抗體檢測(cè)，對(duì)PRV感染情況進(jìn)行系統(tǒng)分析，為華北區(qū)PR的科學(xué)防控及凈化提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 血清樣品 樣品采集時(shí)間為2014年1月至2019年12月，采集區(qū)域?yàn)槲覈?guó)華北地區(qū)，采樣豬場(chǎng)基礎(chǔ)母豬存欄數(shù)＞150頭，共322個(gè)豬場(chǎng)，19 696份血清（表1）。所有采樣豬場(chǎng)均使用偽狂犬病gE基因缺失疫苗。

表1 2014—2019年規(guī)模化豬場(chǎng)采樣數(shù)量

1.1.2 試劑盒 選用西班牙HIPRA公司PRV gE抗體檢測(cè)試劑盒。

1.2 方法

1.2.1 血清采集 采用分階段采樣方法，分別采集公豬、后備母豬、不同胎次經(jīng)產(chǎn)母豬及不同生長(zhǎng)階段的仔豬血液（＞10周齡）。

1.2.2 PRV gE抗體檢測(cè) 采用阻斷酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）法。檢測(cè)的血清樣品全部采自免疫gE基因缺失疫苗的豬場(chǎng)，故檢測(cè)到gE抗體陽(yáng)性樣品可以初步判斷該豬場(chǎng)被PRV感染。在進(jìn)行豬場(chǎng)及樣品結(jié)果判定和統(tǒng)計(jì)時(shí)，豬場(chǎng)只要有1個(gè)樣品為gE抗體陽(yáng)性，則該場(chǎng)判定為PRV野毒陽(yáng)性場(chǎng)。

2 結(jié)果與分析

2.1 2014—2019年豬場(chǎng)PRV gE抗體檢測(cè)結(jié)果

整個(gè)華北地區(qū)分析，2014—2019年，豬場(chǎng)陽(yáng)性率呈先上升后下降趨勢(shì)，2019年陽(yáng)性率最低，為62.96%；2016年陽(yáng)性率最高，為85.48%（圖1）。各省份分析來(lái)看，2014—2019年期間，北京地區(qū)的陽(yáng)性率一直高于88.89%，甚至達(dá)100%，這可能與該地區(qū)調(diào)運(yùn)外地活豬多導(dǎo)致PR感染壓力大有一定的相關(guān)性；河北與山西省陽(yáng)性率基本呈先上升后下降趨勢(shì)；2018年天津市的陽(yáng)性率為100%；內(nèi)蒙古地區(qū)的陽(yáng)性率變化較大，這與采樣豬場(chǎng)數(shù)量少有一定的相關(guān)性。由于非洲豬瘟的原因，2019年采樣豬場(chǎng)數(shù)量明顯減少，影響了調(diào)查的真實(shí)性，使得陽(yáng)性率明顯低于往年。結(jié)果表明，PR在我國(guó)華北地區(qū)依然較為嚴(yán)重，需引起高度重視。

2.2 2014—2019年樣品PRV gE抗體檢測(cè)結(jié)果

整個(gè)華北地區(qū)分析，2014—2019年，樣品陽(yáng)性率呈先上升后下降趨勢(shì)，2019年陽(yáng)性率最低，為30.61%；2015年陽(yáng)性率最高，為46.96%（圖2）。各省份分析來(lái)看，2014—2019年期間，北京市的陽(yáng)性率一直高于58.77%，最高達(dá)73.56%；除了2015年，每一年北京市的陽(yáng)性率均為各省份中最高；河北省陽(yáng)性率基本呈先上升后下降趨勢(shì)，2019年陽(yáng)性率最低，為18.79%，2015年陽(yáng)性率最高，為43.69%；山西省陽(yáng)性率基本呈上升趨勢(shì)；2018年天津市的陽(yáng)性率為39.38%；內(nèi)蒙古地區(qū)的陽(yáng)性率變化較大，這與采集樣品數(shù)量少有一定的相關(guān)性。同樣，由于非洲豬瘟的原因，2018—2019年采集樣品數(shù)量明顯減少，某些程度上影響了樣品的陽(yáng)性率。

2.3 2014—2019年種豬PRV gE抗體檢測(cè)結(jié)果

2014—2019年，種豬陽(yáng)性率整體呈先上升后下降趨勢(shì)，2019年陽(yáng)性率最低，為34.25%；2016年陽(yáng)性率最高，為54.07%（圖3）。各省份分析來(lái)看，2014—2019年期間，北京市的陽(yáng)性率一直高于61.30%，最高達(dá)88.83%；除了2015年，每一年北京市的陽(yáng)性率均為各省份中最高；河北省陽(yáng)性率基本呈先上升后下降趨勢(shì)，2019年陽(yáng)性率最低，為22.58%，2016年陽(yáng)性率最高，為49.73%；山西省陽(yáng)性率呈起伏不定趨勢(shì)，2015年陽(yáng)性率最低，為30.60%，2019年陽(yáng)性率最高，為56.15%；2018年天津市的陽(yáng)性率為59.12%；內(nèi)蒙古地區(qū)的陽(yáng)性率變化較大，這與采樣豬場(chǎng)數(shù)量少有一定的相關(guān)性。結(jié)果表明，我國(guó)華北地區(qū)種豬群大比例感染PR；除2019年外，約40%以上的種豬呈PR感染狀態(tài)。

2.4 2014—2019年仔豬PRV gE抗體檢測(cè)結(jié)果

2014—2019年，仔豬陽(yáng)性率無(wú)特定變化規(guī)律，2014年陽(yáng)性率最低，為22.70%；2015年陽(yáng)性率最高，為39.35%（圖4）。各省份分析來(lái)看，2014—2019年期間，北京市的陽(yáng)性率一直高于30.00%，最高達(dá)55.33%，除了2015與2019年，每一年北京市的陽(yáng)性率均為各省份中最高；河北省陽(yáng)性率基本呈先上升后下降趨勢(shì)，2019年陽(yáng)性率最低，為10.73%，2015年陽(yáng)性率最高，為36.78%；山西省陽(yáng)性率整體呈上升趨勢(shì)，2014年僅為8.43%，2019年為45.79%；2018年天津市的陽(yáng)性率為8.99%；內(nèi)蒙古地區(qū)的陽(yáng)性率變化較大，這與采集樣品數(shù)量少有一定的相關(guān)性。結(jié)果表明，我國(guó)華北地區(qū)仔豬群普遍感染PR，約22%以上的仔豬呈PR感染狀態(tài)。

3 討論

3.1 豬偽狂犬病在我國(guó)華北地區(qū)豬群中依然廣泛流行

近幾年，由于gE-ELISA檢測(cè)方法的廣泛應(yīng)用，許多學(xué)者及機(jī)構(gòu)對(duì)不同地區(qū)豬場(chǎng)的PRV野毒感染情況進(jìn)行了大量的血清學(xué)檢測(cè)。周緒斌等2008年調(diào)查顯示，PRV感染豬場(chǎng)比例為57.1%，樣品gE抗體陽(yáng)性率11.7%。黨占國(guó)等在2012—2015年對(duì)16個(gè)省市240個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)進(jìn)行血清學(xué)樣本檢測(cè)，結(jié)果顯示：99.2%的豬場(chǎng)感染PRV；樣品gE抗體陽(yáng)性率分別為39.4%、39.6%、43.8%和50.8%[4]。中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)楊漢春教授調(diào)查顯示：2014—2017年，gE抗體陽(yáng)性豬場(chǎng)分別為80.08%、76.08%、75.28%、78.33%[5]?？偟膩?lái)看，2011年之后，PRV陽(yáng)性豬場(chǎng)高達(dá)75%以上，近40%的樣品為陽(yáng)性。這些數(shù)據(jù)表明，近幾年我國(guó)PR的防控壓力依然較大，需引起高度重視。

本研究對(duì)我國(guó)華北地區(qū)的322個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)進(jìn)行調(diào)查，共19 696份血清樣品。調(diào)查結(jié)果顯示：2014—2018年，豬場(chǎng)陽(yáng)性率從 78.72%上升到85.48%，2019年為62.96%；樣品陽(yáng)性率從34.09%上升到46.96%，2019年為30.61%。盡管2016—2018年，豬場(chǎng)及樣品陽(yáng)性率呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，但2018年的陽(yáng)性率依然高于2014年，說(shuō)明豬偽狂犬病在我國(guó)華北地區(qū)依然廣泛流行，需引起高度重視。

3.2 種豬群是偽狂犬病防控的重點(diǎn)

PRV通過(guò)口鼻感染后，在呼吸道的上皮細(xì)胞內(nèi)復(fù)制增殖，而后，通過(guò)三叉神經(jīng)、舌咽神經(jīng)、嗅神經(jīng)的神經(jīng)末梢，進(jìn)入三叉神經(jīng)節(jié)和嗅球，以核衣殼的形式存在，最終形成潛伏感染，豬是PRV感染后唯一可以存活的物種。潛伏感染期病毒及動(dòng)物機(jī)體的穩(wěn)定并不是一成不變的，當(dāng)種豬受到外界的不利因素刺激后（如：分娩、混合感染、免疫力下降、免疫抑制類藥物等）[6-7]，潛伏感染的PRV可以被活化，進(jìn)而造成PRV通過(guò)軸突返回到外周組織，從而造成豬只發(fā)病及通過(guò)口腔、鼻腔及生殖道等途徑來(lái)排毒。尤其母豬，PRV的感染率隨著胎齡的增加而升高[8]。所以潛伏感染PRV的種豬是潛在的傳染源。檢測(cè)結(jié)果顯示，除2019年外，約40%以上的種豬呈PR感染狀態(tài)。盡管豬場(chǎng)對(duì)于PR的防控越來(lái)越重視，加大了種豬的免疫頻率，但疫苗免疫只能在一定程度上減少豬的臨床發(fā)病比例和降低經(jīng)濟(jì)損失，但不能完全阻止PRV的傳播擴(kuò)散。因此，對(duì)于生產(chǎn)性能不佳的種豬，應(yīng)加速淘汰。

3.3 仔豬群樣品采集需合理化

免疫母豬可以通過(guò)哺乳使仔豬獲得PRV特異性抗體，母源抗體可以保護(hù)仔豬免受PRV的攻擊，抑制PRV在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的復(fù)制。對(duì)于免疫的母豬，母源抗體可以持續(xù)到4月齡[9]；野毒感染的母豬，抗體高于陰性母豬免疫能達(dá)到的水平。如果感染母豬產(chǎn)下的仔豬檢測(cè)過(guò)早，它們可能被認(rèn)為是感染，而實(shí)則為未消退的母源抗體。所以，通常一般不對(duì)10周齡之前的仔豬進(jìn)行采樣檢測(cè)，而應(yīng)加大生長(zhǎng)肥育豬的檢測(cè)。

調(diào)查結(jié)果顯示，2014—2019年，仔豬陽(yáng)性率均在22%以上，最高為39.35%；由于未消退母源抗體的影響，仔豬的陽(yáng)性率實(shí)際應(yīng)低于檢測(cè)結(jié)果。盡管增加了仔豬免疫頻率，但是陽(yáng)性率并未降低，這可能與免疫程序不合理有一定的關(guān)系；母源抗體可以保護(hù)仔豬，但母源抗體未降低到一定水平，則會(huì)干擾仔豬自身抗體的產(chǎn)生[10-11]。為了更好保護(hù)中大豬，仔豬除了進(jìn)行噴鼻免疫外，應(yīng)對(duì)商品豬進(jìn)行兩次免疫，以降低中大豬感染PRV的幾率[12]。

3.4 豬偽狂犬病需綜合防控

PR的發(fā)生和流行的過(guò)程，應(yīng)具有3個(gè)必要環(huán)節(jié)：傳染源、傳播途徑和易感豬群。三者聯(lián)結(jié)起來(lái)，就構(gòu)成PR的流行鎖鏈。缺少任何一個(gè)，PR的流行均不可能發(fā)生。3個(gè)環(huán)節(jié)包括多個(gè)風(fēng)險(xiǎn)因素。PRV可以通過(guò)活豬、精液、車輛、人員、空氣等多種方式及途徑入侵豬場(chǎng)或在場(chǎng)內(nèi)不同階段豬群傳播。在美國(guó)、西班牙、德國(guó)、意大利、匈牙利、比利時(shí)、墨西哥等養(yǎng)殖發(fā)達(dá)國(guó)家均成熟的利用風(fēng)險(xiǎn)因素分析技術(shù)應(yīng)用于PR的防控凈化領(lǐng)域，并且取得顯著效果[13]。

由于我國(guó)華北地區(qū)面積大、地理環(huán)境復(fù)雜、養(yǎng)殖水平參差不齊、多種豬病的混合感染、加之近幾年P(guān)RV變異毒株的出現(xiàn)，使得規(guī)?；i場(chǎng)普遍存在PRV的感染，PR的凈化進(jìn)程緩慢。因此，應(yīng)同時(shí)重視免疫程序的合理化，種豬的合理引入與淘汰，車輛、人員及物資的清洗消毒，切實(shí)做好豬場(chǎng)內(nèi)外生物安全，從而對(duì)偽狂犬病進(jìn)行綜合性的防控與凈化。